血痛定噴霧劑消腫及鎮(zhèn)痛作用的研究

鐘沁月，呼永河 ，鄭德志，肖雯婧，侯 君

血痛定巴布貼是成都軍區(qū)總醫(yī)院和解放軍452醫(yī)院院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用至今已有十幾年，主要用于基層部隊(duì)外訓(xùn)常見軟組織損傷的治療。其由中藥三七、獨(dú)一味、祖師麻組成，療效確切，未見明顯不良反應(yīng)發(fā)生[1]。但血痛定巴布貼的生物利用率低，使用、攜帶不便。本課題組前期研究表明，血痛定巴布貼抗炎作用明顯，鎮(zhèn)痛作用較弱[2]。因此，為改善巴布貼劑型缺陷，本研究前期采用了高分子生物材料聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯共聚物（PCEC）制備出同時(shí)傳輸疏水性（獨(dú)一味、祖師麻）和親水性藥物（三七）的高效透皮緩釋納米粒，可促進(jìn)血痛定有效成分的吸收，并制成具有較好止血作用的中藥外用噴霧劑[3]。為了解納米載體的血痛定噴霧劑是否具有快速、高效的消腫與鎮(zhèn)痛作用，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑 血痛定噴霧劑凍干粉末（批號(hào)：20160701）及φ6 mm打孔器由本實(shí)驗(yàn)室制備；云南白藥粉購(gòu)于云南白藥集團(tuán)股份有限公司；扶他林乳膠劑購(gòu)于北京諾華制藥有限公司；硫化鈉、冰醋酸、二甲苯（分析純）購(gòu)置于西南國(guó)藥公司。

1.1.2 儀器 恒溫水浴熱板（55℃，河北冀星實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），小鼠尾光熱痛反應(yīng)儀（成都泰盟科技有限公司），扭力天平（上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康ICR小白鼠，SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，體重19～22 g，雄性，購(gòu)于四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（許可證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管字第71號(hào)）。飼養(yǎng)條件：溫度 20～22℃，相對(duì)濕度 60%～70%，光照 12 h/12 h，明暗交替，自動(dòng)定時(shí)過濾通風(fēng)換氣，換氣頻度10～15次/h。

1.3 溶液配制 精密稱定凍干血痛定噴霧劑粉末0.5 g，定容至 100 ml，配制成 5 mg/ml的儲(chǔ)備液，臨用前稀釋。

精密稱取云南白藥粉0.3 g，定容至100 ml，配制成3 mg/ml陽性對(duì)照藥物溶液。

1.4 動(dòng)物分組 將小鼠隨機(jī)分為空白組（賦形劑PCEC 3 mg/ml）、陽性對(duì)照組（云南白藥 3 mg/ml或扶他林8 g/kg）、血痛定噴霧劑高、中、低濃度組（5、3、1 mg/ml），分別用于消腫及鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)每組動(dòng)物8只。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 消腫實(shí)驗(yàn) 各組小鼠給藥前，采用硫化鈉滑石粉對(duì)背部脫毛，脫毛面積為2 cm×2 cm；涂敷藥物前，以溫水洗凈去毛區(qū)皮膚。各組按照成人體表面積法換算成小鼠給藥量為0.01 ml/g，血痛定噴霧劑高、中、低濃度組含藥量分別為 1.25、0.75、0.25 mg，陽性對(duì)照組（云南白藥）含藥量為0.75 mg。早上9:00涂敷1次，下午15:00涂敷1次，連續(xù)給藥3 d。末次給藥后1 h，各組小鼠均于右耳正反兩面均勻涂抹二甲苯0.05 ml。1 h后用直徑6 mm打孔器在左右耳相對(duì)稱部位打孔，取耳片，用扭力天平稱重，計(jì)算雙側(cè)耳片重量之差。腫脹度=右耳質(zhì)量-左耳質(zhì)量。

1.5.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

1.5.2.1 熱板法 剔除痛閾反應(yīng)潛伏期＜10 s和＞30 s的小鼠。給藥方案同“1.5.1”項(xiàng)，連續(xù)給藥3 d。各組小鼠于分別于末次給藥后0.5和1 h，置于55℃熱板上，觀察小鼠的痛覺反應(yīng)。以小鼠出現(xiàn)舔后足為判斷指標(biāo)，記錄小鼠置于熱板上至其出現(xiàn)舔足的時(shí)間。

1.5.2.2 甩尾法 選擇反應(yīng)潛伏期4～6 h的小鼠。給藥方案同“1.5.1”項(xiàng)，各組小鼠分別于末次給藥后0.5和1 h，置小鼠尾于光熱痛反應(yīng)測(cè)試儀上，觀察記錄小鼠出現(xiàn)甩尾的時(shí)間。

1.5.2.3 扭體法 空白組和血痛定各組每次給藥劑量同前，陽性對(duì)照組（扶他林）按照體表面積法換算成小鼠給藥量8 g/kg，0.2 g/只。各組小鼠腹部去毛，暴露2 cm×2 cm的皮膚為給藥區(qū)，各組分別于早上9:00和下午15:00各涂藥1次。于末次給藥后0.5 h，腹腔注射1%冰醋酸0.2 ml，觀察記錄 15 s內(nèi)，小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 消腫作用 血痛定噴霧劑的消腫作用呈劑量依賴性，且高劑量組的消腫作用與陽性對(duì)照組無顯著差異（P＞ 0.05，表 1）。

表1 小鼠耳殼二甲苯炎癥消腫實(shí)驗(yàn)（n=8）

2.2 鎮(zhèn)痛作用

2.2.1 熱板法 血痛定各濃度組及陽性對(duì)照組的痛覺反應(yīng)潛伏期均延長(zhǎng)，其中給藥后1 h的作用明顯長(zhǎng)于給藥后0.5 h，并呈劑量依賴性，而血痛定高濃度組的痛覺反應(yīng)潛伏期長(zhǎng)于陽性對(duì)照組（P＜0.05，表 2）。

表2 熱板法各組痛覺反應(yīng)潛伏期比較（n=8）

2.2.2 甩尾法 血痛定各濃度組及陽性對(duì)照組的痛覺反應(yīng)潛伏期均延長(zhǎng)，給藥后1 h鎮(zhèn)痛作用長(zhǎng)于0.5 h，并呈劑量依賴性（P＜ 0.05，表 3）。

表3 甩尾法各組痛覺反應(yīng)潛伏期比較（n=8）

2.2.3 扭體法 血痛定各濃度組及陽性對(duì)照組的扭體痛次數(shù)均減少，血痛定噴霧劑的作用呈劑量依賴性（P＜0.05，表4），其中高濃度組的抑制率與陽性對(duì)照組相當(dāng)。

表4 扭體法各組扭體反應(yīng)次數(shù)比較（n=8）

3 討論

部隊(duì)日常訓(xùn)練或執(zhí)行任務(wù)過程中，戰(zhàn)士容易出現(xiàn)創(chuàng)傷出血、皮膚擦傷和肌肉、韌帶挫傷或撕裂傷、關(guān)節(jié)和腰部損傷、過勞性損傷等。在后送至醫(yī)院進(jìn)行?？浦委熐?，主要進(jìn)行各種外傷藥膏的貼敷治療，以達(dá)到止痛、消腫的目的。但目前部隊(duì)配發(fā)的外傷藥膏要么粘附性差，容易脫落；要么粘附性過強(qiáng)，在用后揭撕時(shí)引起皮膚過敏或刺激、拔掉汗毛、甚至造成局部皮膚撕裂導(dǎo)致極度疼痛等。本研究在原組方不變的情況下，運(yùn)用高分子納米材料，制備了新型的血痛定噴霧劑，其有效成分為PCEC[3]，增加了中藥的生物利用度，較巴布貼劑型而言，提高了中藥組分的鎮(zhèn)痛作用，且方便攜帶，適用于皮膚、關(guān)節(jié)肢體表面等部位給藥，同時(shí)兼具止血鎮(zhèn)痛作用，適合惡劣野戰(zhàn)條件下官兵自救。

耳殼二甲苯炎癥腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血痛定噴霧劑具有明確的消腫作用，其中高劑量的效果最顯著，與陽性對(duì)照藥物云南白藥相當(dāng)，顯示其較好的消腫作用。小鼠熱板法、甩尾法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血痛定噴霧劑對(duì)熱刺激所致疼痛感具有明確的抑制作用，尤其以高劑量的抑制作用最強(qiáng)，甚至超過了云南白藥的作用。小鼠扭體法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血痛定噴霧劑能減輕醋酸對(duì)試驗(yàn)小鼠內(nèi)臟所致的疼痛，顯示較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，也是以高劑量的鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，與陽性對(duì)照藥物扶他林的作用相當(dāng)。

綜上所述，血痛定噴霧劑具有強(qiáng)效的消腫及鎮(zhèn)痛作用，具有使用便捷的特點(diǎn)，可作為治療軍隊(duì)訓(xùn)練傷的常用藥和特需藥，亦是臨床所急需的中藥新品種。