HPLC法檢測(cè)液態(tài)乳中的乙基麥芽酚

周宏霞，臧汝瑛

（威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東威海,264210）

0 引 言

乙基麥芽酚（2-乙基-3羥基-4-吡喃酮），是一種人工合成香精，因其毒性相對(duì)較小、副作用小，被廣泛應(yīng)用于食品生產(chǎn)中。它可以彌補(bǔ)食品本身的香味缺陷，賦予部分食品生動(dòng)的原滋味，加強(qiáng)食品的香味，掩蓋食品的不良?xì)庀1]。但是，如果大量的使用也會(huì)危害身體健康。GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》，中明確規(guī)定巴氏殺菌乳、滅菌乳、發(fā)酵乳等28種產(chǎn)品中不能添加香料、香精，凡添加了食品用香料、香精的食品應(yīng)按照國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)示。巴氏殺菌乳、滅菌乳、發(fā)酵乳中不得檢出乙基麥芽酚。因此，對(duì)三類液態(tài)乳進(jìn)行乙基麥芽酚的檢測(cè)，加強(qiáng)對(duì)乳品市場(chǎng)的監(jiān)管具有重要意義。

目前，檢測(cè)乙基麥芽酚的方法有：分光光度法[2]、電化學(xué)法[3-5]、高效液相色譜法[6-7]、氣相色譜法[8-9]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[10]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1]等。GB5009.250-2016是關(guān)于食品中乙基麥芽酚的檢測(cè)方法，但是適用范圍，沒有液態(tài)乳。由于提取的基質(zhì)不同，提取效果會(huì)有差別，本文以液態(tài)乳為研究對(duì)象，建立液態(tài)乳中乙基麥芽酚的測(cè)定方法。為保障液態(tài)乳的質(zhì)量安全提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

甲醇：色譜純(美國默克公司)；乙腈：色譜純(美國默克公司)；甲酸：分析純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）；標(biāo)準(zhǔn)品：乙基麥芽酚≥98%（加拿大TRC公司）。微孔濾膜：0.45 um(天津津騰)。

1.2 儀器

臺(tái)式高速離心機(jī)(Neofuge 23R，上海力申科學(xué)儀器有限公司)，電子天平（舜宇恒平儀器公司），分析天平（瑞士梅特勒公司），島津LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2 g樣品（精確至0.01 g）于10 mL容量瓶中，加入6 mL乙腈振蕩混勻，提取10 min，用乙腈定容至刻度，6 000 r/min離心10 min，取上清液，過0.45 um的濾膜，濾液進(jìn)液相色譜儀分析。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取乙基麥芽酚0.1 g(精確至0.0001 g)，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度為1 mg/mL，于4℃冰箱保存。

1.5 儀器條件

色譜柱為Aglient ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 um)。流動(dòng)相A：0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B：甲醇。A+B=65∶35；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 uL；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相色譜條件的優(yōu)化

選擇不同的流動(dòng)相甲醇+水(30∶70)、甲醇+0.02 mol/L磷酸二氫鈉（25∶75）、甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65），發(fā)現(xiàn)甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65）條件下乙基麥芽酚峰形較好，基本無拖尾現(xiàn)象，目標(biāo)物質(zhì)與樣品中的干擾物質(zhì)也能得到很好的分離。而用其他流動(dòng)相時(shí)峰拖尾嚴(yán)重。因此選用甲醇+0.1%甲酸溶液（35∶65）的條件。色譜柱選擇150 mm的反相柱，柱壓小，分析時(shí)間短，目標(biāo)物能與樣品雜質(zhì)分離。乙基麥芽酚的色譜圖如圖1所示。

圖1 乙基麥芽酚色譜圖

2.2 提取條件的優(yōu)化

液體乳中蛋白質(zhì)含量高，提取過程要除去蛋白。前處理過程中比較了兩種沉淀蛋白的方法：（1）利用有機(jī)試劑沉淀蛋白，本方法參考GB 5009.250-2016的方法采用乙腈沉淀蛋白。（2）利用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白。其中利用有機(jī)試劑沉淀蛋白效果好，并且回收率高。因此本方法采用乙腈沉淀蛋白。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制0.5、2、5、10、25、100 mg/L的工作溶液，6個(gè)濃度的工作溶液依據(jù)1.5的液相色譜條件進(jìn)樣，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果如圖2所示。乙基麥芽酚在0.5～100 mg/L范圍內(nèi)線性良好，線性回歸方程為Y=38186.92X-42965.82，R=0.9999。以峰面積相當(dāng)于基線噪音的3倍（S/N=3）計(jì)算出乙基麥芽酚的檢出限為1 mg/kg。

圖2 乙基麥芽酚的校準(zhǔn)曲線

2.4 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

在已知的陰性液態(tài)乳樣品中分別添加1、2、10 mg/kg的3個(gè)水平的乙基麥芽酚，每個(gè)加標(biāo)樣品做5個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，按照1.3進(jìn)行樣品前處理，計(jì)算回收率及其精密度。最后計(jì)算得到液態(tài)乳中乙基麥芽酚的回收率在87.81%～98.82%，RSD在1.03%～3.27%。其結(jié)果見下表1。

表1 回收率添加實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)果

建立了液態(tài)乳中乙基麥芽酚的液相檢測(cè)方法，具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)。該方法線性關(guān)系良好，回收率高，可操作性強(qiáng)，符合定量分析的要求。