“商環(huán)”一次性包皮環(huán)切吻合器微生物限度檢查方法驗(yàn)證

張穎 商建忠

摘 要：依據(jù)藥典方法對(duì)已建立的商環(huán)包皮環(huán)切器的微生物限度檢測方法進(jìn)行可行性驗(yàn)證，結(jié)果各試驗(yàn)菌回收率均大于70%，控制菌檢查實(shí)驗(yàn)組均陽性檢出。表明實(shí)驗(yàn)所采取的薄膜過濾法計(jì)數(shù)和控制菌檢查常規(guī)方法能正確反映檢品中微生物限度的情況。

關(guān)鍵詞：微生物限度；商環(huán)；驗(yàn)證

“商環(huán)”一次性包皮環(huán)切吻合器的問世，是男性包皮環(huán)切手術(shù)的里程碑式的創(chuàng)新，其主導(dǎo)的環(huán)切術(shù)具有簡單美觀、痛苦小恢復(fù)快等特點(diǎn)，備受廣大醫(yī)患的關(guān)注和推崇。蕪湖圣大醫(yī)療器械有限公司是“商環(huán)”的專利研發(fā)和生產(chǎn)企業(yè)，亦是此類包皮環(huán)切器產(chǎn)品質(zhì)量規(guī)范起草單位，多年來一直對(duì)產(chǎn)品生產(chǎn)和質(zhì)量嚴(yán)格管控，借由高?？萍继嘏蓡T進(jìn)駐企業(yè)的契機(jī)，與高校的高級(jí)技術(shù)人才共同合作，修正升級(jí)了產(chǎn)品生產(chǎn)檢驗(yàn)的技術(shù)規(guī)范。本文對(duì)校企合作并依據(jù)藥典規(guī)范和產(chǎn)品特點(diǎn)建立的產(chǎn)品微生物限度檢查方法進(jìn)行了探討和研究，按照2015年藥典相關(guān)規(guī)定進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，為保證產(chǎn)品現(xiàn)階段的微生物檢測方法的可靠和進(jìn)一步完善商環(huán)微生物限度檢測方法以及產(chǎn)品整體質(zhì)量控制提供有力的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

實(shí)驗(yàn)用商環(huán)包皮環(huán)切器由圣大醫(yī)療器械技術(shù)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)所用菌種均購自中國藥品生物制品鑒定所；實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

浙江麒麟醫(yī)藥設(shè)備有限公司生產(chǎn)旋渦混合器；上海博迅醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)恒溫培養(yǎng)箱（MJX-250型）；上海申安醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)蒸汽壓力滅菌器。所有玻璃儀器均由蜀牛玻璃制品有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

①菌懸液的制備。將復(fù)蘇后的菌種接種于胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中30～35℃培養(yǎng)24h，白色念珠菌使用沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基20～25℃培養(yǎng)2d，上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液配制成含菌數(shù)為50～100cfu/mL的菌懸液；②供試品溶液的制備。取待檢測器械一只，加0.9%無菌氯化鈉溶液100mL，充分震蕩后備用，若溶液不足100mL需用0.9%無菌氯化鈉溶液補(bǔ)足至100mL備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌數(shù)計(jì)數(shù)檢查（薄膜過濾法）

菌數(shù)計(jì)數(shù)采用藥典規(guī)定薄膜過濾法。加無菌蛋白胨溶液將供試品溶液1mL稀釋至100mL，薄膜過濾，按照要求沖洗濾膜，在最后一次沖洗液中加入已制備好的菌懸液1mL，取下濾膜置于規(guī)定培養(yǎng)基中在規(guī)定溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)；菌液組操作同實(shí)驗(yàn)組，但過濾物僅為已制備好的菌懸液1mL；同理供試品組僅過濾供試醫(yī)療器械洗下的溶液，其余操作同實(shí)驗(yàn)組。回收率按照1.3.2項(xiàng)下計(jì)算。

1.3.2 回收率計(jì)

加菌回收率=（實(shí)驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)）/菌液組的平均菌落數(shù)*100%

1.3.3 控制菌檢查（大腸埃希菌和沙門菌）

取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3份，其中一份加入1mL供試品溶液并接種大腸埃希菌作為實(shí)驗(yàn)組，一份無添加為陰性對(duì)照（NC），一份僅接種大腸埃希菌作為陽性對(duì)照（PC），于麥康凱液體培養(yǎng)基中42℃培養(yǎng)24h，劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)，必要時(shí)可進(jìn)行生化確認(rèn)。同時(shí)平行操作2組。

取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基3份，同大腸埃希菌設(shè)置，經(jīng)RV沙門增菌液體培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)24h，劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基平板上，觀察菌落形態(tài)，可劃線和穿刺TSI瓊脂斜面進(jìn)行確認(rèn)。同時(shí)平行操作2組。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌的計(jì)數(shù)回收率分別為84%、91%、87%和93%；控制菌檢查中大腸埃希菌和沙門菌PC均為陽性，NC均為陰性，實(shí)驗(yàn)組兩組平行操作均為陽性檢出。

結(jié)果顯示，所有陽性添加菌的回收率均大于70%，符合藥典該項(xiàng)下要求，表示待測器械的提取液對(duì)菌數(shù)計(jì)數(shù)過程無影響，按該方法進(jìn)行微生物限度檢查中的菌數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果可真實(shí)反映器械微生物污染情況?？刂凭鷻z查結(jié)果顯示在PC和NC結(jié)果均正常的情況下，實(shí)驗(yàn)組的陽性控制菌結(jié)果為陽性檢出，符合藥典該項(xiàng)下要求，即建立的控制菌檢查方法可真實(shí)反映器械受該兩種控制菌污染的情況，對(duì)控制菌生長和檢驗(yàn)無影響。

3 討論

方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)于醫(yī)療器械的微生物限度檢查具有非常重要的意義，可避免檢品因?qū)ξ⑸锷L的抑制作用而無法真實(shí)表現(xiàn)被微生物污染的情況。醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)常因技術(shù)水平的限制而無法制定或?qū)χ贫ǖ漠a(chǎn)品檢驗(yàn)方法無力驗(yàn)證，導(dǎo)致對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量管控下降甚至產(chǎn)生嚴(yán)重后果。本項(xiàng)目在校企合作的基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮高校科技人才作用，幫助企業(yè)建立了微生物限度的檢查方法并進(jìn)行驗(yàn)證，提升了企業(yè)質(zhì)量管控的水平，加強(qiáng)了校企溝通的深度，取得了較好的成果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示經(jīng)驗(yàn)證，商環(huán)包皮環(huán)切吻合器提取液對(duì)微生物計(jì)數(shù)和控制菌檢查過程無干擾，藥典推薦的微生物限度檢查方法可真實(shí)反映器械受微生物干擾程度，可作為產(chǎn)品生產(chǎn)和日常檢驗(yàn)使用，為該產(chǎn)品更進(jìn)一步的規(guī)范化檢查和生產(chǎn)進(jìn)行有益的科學(xué)探討。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（第四部）通則[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015.

項(xiàng)目：省級(jí)創(chuàng)新發(fā)展行動(dòng)計(jì)劃 藥品生物檢定技術(shù)精品在線開放課程；安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)?？萍继嘏蓡T項(xiàng)目。