清熱祛濁膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊美娜 王世信

【摘 要】目的：完善清熱祛濁膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：用薄層色譜法對(duì)處方中的黃連、大黃、枳實(shí)進(jìn)行定性鑒別；用高效液相法對(duì)鹽酸小檗堿進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾；含量測(cè)定線性良好，回收率試驗(yàn)符合《中國藥典》2015版四部規(guī)定。結(jié)論：定性、定量測(cè)定方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可對(duì)制劑質(zhì)量進(jìn)行有效控制。

【關(guān)鍵詞】清熱祛濁膠囊；鹽酸小檗堿；高效液相；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

清熱祛濁膠囊是由我院經(jīng)典驗(yàn)方發(fā)展而來的中藥復(fù)方制劑，在臨床上用于肥胖型2型糖尿病療效確切，但由于目前缺乏全面的質(zhì)量控制方法。為了確保制劑安全有效，穩(wěn)定可控，本試驗(yàn)利用高效液相色譜法對(duì)該制劑進(jìn)行含量測(cè)定以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。

1 薄層色譜鑒別

1.1 黃連的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對(duì)照品內(nèi)容物各4g，精密稱定，加甲醇40ml，80℃水浴回流提取15分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品，制成0.5mg/1ml的甲醇溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液（12：6：3：3：1）為展開劑，置氨蒸氣中飽和15分鐘，展開，展距15cm，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。經(jīng)過薄層色譜鑒別，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。重現(xiàn)性良好，陰性無干擾。

1.2大黃的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對(duì)照品內(nèi)容物2g，加甲醇40ml，超聲提取20分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液10ml、氯仿10ml加熱回流提取30分鐘，放冷，濾過，濾液用氯仿萃取2次（10、10ml），合并氯仿液，揮干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液。另取大黃酚、大黃素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述各供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各5μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，預(yù)飽和30分鐘，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑[1]，展開，展距9cm，取出，晾干，氨熏后日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。重現(xiàn)性良好，陰性無干擾。

1.3枳實(shí)的薄層色譜鑒別

取清熱祛濁膠囊及陰性對(duì)照品內(nèi)容物各4g，加石油醚（30～60℃）20ml，超聲處理15分鐘，靜置后棄去醚層，同法再提取一次，藥渣揮干，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液加0.3g活性炭水浴回流10分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇適量制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各5μl、橙皮苷對(duì)照品溶液25μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，預(yù)飽和30分鐘，以乙酸乙酯-甲醇-水（100：17：13）為展開劑[2]，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置2小時(shí)后，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。重現(xiàn)性良好，陰性無干擾。

2 高效液相法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量

2.1 供試品溶液及對(duì)照品溶液的制備

按照1.1項(xiàng)下做成供試品溶液及對(duì)照品溶液。

2.2色譜條件

色譜柱：依利特Hypersil ODS2 C18（250mm×4.6mm，5um）

流動(dòng)相：乙腈：0.05mol/L磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH=3）=30：70

柱溫：25℃，流速：1ml/min，波長(zhǎng)345nm

2.3線性關(guān)系考察

分別取對(duì)照品溶液1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，置1OmL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻配制成濃度分別為30μg/mL、60μg/mL、90μg/mL、120μg/mL、150μg/mL、180μg/mL的溶液，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行分析，測(cè)定其峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）（x）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為：Y=71249X+84810，r=0.9995在2.5-50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行分析，測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示鹽酸小檗堿對(duì)照品峰面積平均值為1595571.443，RSD為0.16%。表明儀器精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL和供試品溶液各10μL，于Oh、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿對(duì)照品在24 h內(nèi)峰面積穩(wěn)定，RSD為0.16%。

2.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取清熱祛濁膠囊內(nèi)容物，按1.1項(xiàng)下操作制備六份樣品供試品溶液，分別進(jìn)行測(cè)定。測(cè)得其濃度的RSD值為0.10%（n=6），結(jié)果表明，該方法的重現(xiàn)性良好。

2.7加樣回收試驗(yàn)

精密稱取清熱祛濁膠囊內(nèi)容物6份，精密加入一定量的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按1.1項(xiàng)下操作制成供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析。采用加樣回收率試驗(yàn)，取同一批樣品設(shè)高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度平行3份，各濃度水平加入對(duì)照品的量與所取供試品含量之比分別為1：1.5、1：1、1：0.5。按“1.1”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定峰面積，計(jì)算得平均回收率為99.58%，RSD為1.17%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

清熱祛濁膠囊主要用于肥胖型2型糖尿病，“胖人多濕，濕則有瘀，瘀而化熱”。中醫(yī)用藥治病采用辨證論治，因此清熱去濁類的藥物被常用于糖尿病的治療。該藥中黃連作為君藥主清熱燥濕之功，且通過現(xiàn)代研究得到業(yè)界的廣泛認(rèn)可[3]。

通過薄層色譜法對(duì)方中藥材定性，用高效液相色譜法對(duì)清熱祛濁膠囊中鹽酸小檗堿的含量的測(cè)定，制訂出本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，方法穩(wěn)定，精密度高，重現(xiàn)性好，可作為該制劑質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)

[1]張守堯，周本杰，汪艷.補(bǔ)陽還五丹的薄層色譜鑒別，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2001，12（2），128

[2]賀江萍，楊天坤.薄層掃描法測(cè)定保和散中橙皮苷的含量，中成藥，1999，21（6），290

[3]李濤. 中藥治療2型糖尿病效果的臨床觀察[J].中國醫(yī)藥指南. 1671-8194（2013）02-0275-02

作者簡(jiǎn)介

楊美娜，女，1984年生，主管中藥師，執(zhí)業(yè)中藥師， 2008年畢業(yè)于河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院（現(xiàn)河北中醫(yī)學(xué)院）?，F(xiàn)工作于河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥藥學(xué)部，從事中藥調(diào)劑和中藥鑒別工作。