吉林省不同產(chǎn)地北蒼術(shù)的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

肖春萍，夏 炎，張 強(qiáng)

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

藥用植物是中藥材的重要來源，其有效利用為人類健康做出了巨大貢獻(xiàn)。中藥產(chǎn)業(yè)是中國(guó)最具特色、優(yōu)勢(shì)和發(fā)展?jié)摿Φ漠a(chǎn)業(yè)之一。為了加快我國(guó)中藥產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)代化和國(guó)際化進(jìn)程，國(guó)家啟動(dòng)了“中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)行動(dòng)計(jì)劃”，并提出中藥“安全、有效、穩(wěn)定、可控”的發(fā)展目標(biāo)[1]。由于中藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣、產(chǎn)量高低及規(guī)范化栽培程度不同，直接影響中藥的臨床療效及中藥產(chǎn)品的質(zhì)量[2]。研究[3-11]表明，不同產(chǎn)地甚至同一產(chǎn)地的中藥材藥效成分及其含量的不穩(wěn)定，嚴(yán)重影響了中藥產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及其臨床療效的發(fā)揮，如許多植物類中藥材主要藥效成分含量不同產(chǎn)地相差很大，甚至達(dá)到數(shù)倍之差。為此，闡明不同產(chǎn)地植物類中藥材質(zhì)量變化規(guī)律，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)中藥材質(zhì)量的穩(wěn)定可控，已成為藥用植物資源評(píng)價(jià)研究領(lǐng)域的重大科學(xué)問題之一。

蒼術(shù)為多年生菊科植物北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.） Koidz.和茅蒼術(shù)Atractylodes lancea （Thunb.）DC.的干燥根莖[12]。其中，北蒼術(shù)喜溫涼、潮濕氣候，耐寒能力較強(qiáng)，但忌強(qiáng)光照射，主要分布于我國(guó)吉林省、遼寧省及河北省等省區(qū)[13]。北蒼術(shù)藥材中的化學(xué)成分主要是揮發(fā)油，如β -桉葉醇和蒼術(shù)素是蒼術(shù)藥材中最主要的2大類活性成分[14-16]。北蒼術(shù)主要具有影響消化系統(tǒng)、降血糖、抗炎、利尿、抗腫瘤及增強(qiáng)免疫等功效[17-18]。目前，隨我國(guó)中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，北蒼術(shù)藥材需求量不斷增加，北蒼術(shù)野生資源量日益枯竭，人工栽培已成為蒼術(shù)藥材的主要來源。然而，各地種植的北蒼術(shù)藥材是否達(dá)到道地藥材或中藥材相關(guān)規(guī)定的要求，從而保證臨床用藥安全有效是當(dāng)前爭(zhēng)議的熱點(diǎn)。

相關(guān)文獻(xiàn)[9]表明，中藥材的化學(xué)成分隨產(chǎn)地、采收季節(jié)和加工方法的不同而變化，并進(jìn)一步顯著影響療效。因此，比較吉林省不同產(chǎn)地北蒼術(shù)質(zhì)量是評(píng)價(jià)北蒼術(shù)產(chǎn)地的重要依據(jù)。蒼術(shù)素為蒼術(shù)藥材中活性成分之一，因其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[12]將其作為藥材質(zhì)量的重點(diǎn)評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。本研究主要采用性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別及含量測(cè)定等鑒定手段，分別對(duì)吉林省8個(gè)北蒼術(shù)產(chǎn)地（敦化、蛟河、柳河、通化、集安、靖宇、舒蘭）種植的北蒼術(shù)藥材質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定，旨在為吉林省區(qū)域內(nèi)北蒼術(shù)的合理種植區(qū)域選擇提供理論參考，也為北蒼術(shù)品質(zhì)評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 3年生北蒼術(shù)的原藥材，分別采自吉林省敦化、蛟河、柳河、通化、集安、靖宇、舒蘭、白山8個(gè)產(chǎn)地，即有8份北蒼術(shù)樣品，采集時(shí)間為2016年9月，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張強(qiáng)副教授鑒定為菊科植物北蒼術(shù)（Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.）的干燥根莖。

1.1.2 儀器及試劑 島津LC-2010A HT高效液相色譜儀（島津有限公司），奧林巴斯BX51型顯微鏡（北京奧林巴斯銷售服務(wù)有限公司），F(xiàn)A1004B 型分析天平（上海佑科儀器儀表有限公司）。北蒼術(shù)對(duì)照品蒼術(shù)素（蒼術(shù)素≥98%，20 mg，上海源葉生物科技有限公司），甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技有限公司），其他試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的預(yù)處理 8份吉林省不同產(chǎn)地北蒼術(shù)樣品均在統(tǒng)一條件下處理，除去其表面泥土，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥。

1.2.2 性狀鑒別 參照《中華人民共和國(guó)藥典》[12]規(guī)定，觀察不同產(chǎn)地北蒼術(shù)藥材的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地及氣味等特征，對(duì)北蒼術(shù)樣品進(jìn)行性狀鑒別。

1.2.3 顯微鑒別 參照文獻(xiàn)[12]規(guī)定，分別取8份吉林省不同產(chǎn)地的北蒼術(shù)藥材粉末少量，放置于載玻片上，滴加1～2滴水合氯醛試液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下對(duì)北蒼術(shù)樣品進(jìn)行顯微鑒別。

1.2.4 薄層鑒別 參照文獻(xiàn)[12]蒼術(shù)項(xiàng)下的薄層法（通則0502），配置對(duì)照品及供試品溶液，并進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與北蒼術(shù)對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)。

1.2.5 含量測(cè)定

1.2.5.1 色譜條件 色譜柱：SinoChrom ODS-BP（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（79：21）；流量體積：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；色譜柱溫度：35 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL。

1.2.5.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取蒼術(shù)素對(duì)照品2.01 mg于燒杯中，加甲醇（色譜純）定量轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，配制成濃度為20.1 μg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2.5.3 供試品溶液的配制 取北蒼術(shù)粉末（過3號(hào)篩）0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

1.2.5.4 線性關(guān)系考察 取1.2.5.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，分別精密吸取 2 、8 、14 、20 、24 、30 μL，依次注入高效液相色譜儀，按1.2.5.1項(xiàng)下所示的色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品的含量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y = 15 619 545.54 X - 19 887.47，r = 0.999 9，蒼術(shù)素對(duì)照品在0.04 ～0.6 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

1.2.5.5 精密度試驗(yàn) 取1.2.5.2項(xiàng)下的蒼術(shù)對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量為10 μL，測(cè)得其峰面積并計(jì)算RSD值為0.04%，表明儀器精密度良好。

1.2.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0 、3 、6 、9 、12 、15 、18 、24 h 時(shí)間段依次進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為10 μL，測(cè)定其峰面積并計(jì)算RSD值為0.13%，表明供試品溶液在0～24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.5.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一產(chǎn)地蒼術(shù)樣品粉末6份，依1.2.5.3項(xiàng)下的方法制備，依次注入高效液相色譜儀，按1.2.5.1項(xiàng)下所示的色譜條件測(cè)定，計(jì)算RSD值為1.5%，說明試驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

1.2.5.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一產(chǎn)地蒼術(shù)樣品粉末6份，每份0.2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，向其中加入適量的蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品，按1.2.5.3項(xiàng)下的方法制備，測(cè)定其蒼術(shù)素的含量，計(jì)算回收率，其RSD值為1.27%，說明樣品回收率良好。

1.2.5.9 樣品含量測(cè)定 分別取8個(gè)不同產(chǎn)地的蒼術(shù)藥材粉末，照1.2項(xiàng)下方法處理檢測(cè)，平行3份，計(jì)算吉林省不同產(chǎn)地北蒼術(shù)樣品中所含蒼術(shù)素的百分含量。

2 結(jié)果

2.1 性狀鑒別結(jié)果 8份吉林省不同產(chǎn)地的北蒼術(shù)樣品的性狀鑒別結(jié)果，見表1。

表1 吉林省不同產(chǎn)地北蒼術(shù)藥材的性狀鑒別

表1結(jié)果表明，北蒼術(shù)樣品呈疙瘩塊狀，長(zhǎng)約為4～9 cm，直徑1～2.5 cm。表面黑棕色，除去外皮后，其表面為黃棕色，質(zhì)地較疏松，斷面有明顯的黃棕色油點(diǎn)。氣清香，味辛、苦。吉林省不同產(chǎn)地蒼術(shù)樣品在外觀顏色、斷面、氣味及質(zhì)地都有一定程度的差異，說明吉林省8個(gè)產(chǎn)地蒼術(shù)藥材的質(zhì)量不同。

2.2 顯微鑒別結(jié)果 8份吉林省不同產(chǎn)地的北蒼術(shù)樣品的根莖粉末顯微鑒別結(jié)果表明，不同產(chǎn)地北蒼術(shù)樣品中均可見草酸鈣針晶、木纖維石細(xì)胞、導(dǎo)管、菊糖及油管碎片。其中，草酸鈣針晶較為細(xì)小，不規(guī)則的充塞于薄壁細(xì)胞中；纖維常成束存在，長(zhǎng)梭形，直徑約為40 μm，壁甚厚，木質(zhì)化；導(dǎo)管多為網(wǎng)紋導(dǎo)管，較短；石細(xì)胞數(shù)量較多，呈多角形或類長(zhǎng)方形，壁極厚，木質(zhì)化，有時(shí)同木栓細(xì)胞相連，直徑約為20～80 μm；菊糖多數(shù)，呈塊狀或扇形，其表面有放射狀的紋理；油管碎片多見。

2.3 含量測(cè)定結(jié)果 8份吉林省不同產(chǎn)地的北蒼術(shù)樣品中所含蒼術(shù)素的含量結(jié)果，見表2。

表2 不同產(chǎn)地蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》[12]規(guī)定，蒼術(shù)藥材含蒼術(shù)素不得少于0.3%。研究結(jié)果表明，吉林省敦化、靖宇及白山地區(qū)的蒼術(shù)樣品中蒼術(shù)素含量小于0.30%，說明敦化、靖宇及白山3個(gè)產(chǎn)地本次提供的北蒼術(shù)樣品質(zhì)量不合格，吉林省其他6個(gè)產(chǎn)地蒼術(shù)藥材質(zhì)量合格，其中通化和集安種植的北蒼術(shù)質(zhì)量最好，蒼術(shù)素含量分別為0.77%和0.80%。

3 討論

隨著人們對(duì)中藥材關(guān)注度的提升，野生中藥資源被不斷破壞，為了使中藥材資源能得以持續(xù)發(fā)展，人工栽培技術(shù)不可或缺[20]。目前，人工栽培的中藥材質(zhì)量參差不齊，臨床藥效穩(wěn)定性差。為了使北蒼術(shù)藥材栽培品能發(fā)揮更好的藥用價(jià)值，人們不斷地了解北蒼術(shù)藥材本身的生長(zhǎng)習(xí)性，尋找其適宜生長(zhǎng)的環(huán)境。本試驗(yàn)采集吉林省內(nèi)8個(gè)產(chǎn)地北蒼術(shù)藥材，依據(jù)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中關(guān)于蒼術(shù)藥材的鑒別方法，采用性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別和含量測(cè)定的方法對(duì)吉林省內(nèi)8個(gè)不同產(chǎn)地的8份北蒼術(shù)藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，對(duì)比分析不同產(chǎn)地北蒼術(shù)藥材質(zhì)量的差異。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地北蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量分別為0.24%（敦化）、0.35%（蛟河）、0.58%（柳河）、0.77%（通化）、0.80%（集安）、0.27%（靖宇）、0.45%（舒蘭）、0.22%（白山），其中通化和集安地區(qū)的北蒼術(shù)質(zhì)量最好。通化、柳河、集安、蛟河、舒蘭5個(gè)產(chǎn)地的北蒼術(shù)藥材的各項(xiàng)指標(biāo)均符合《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，而敦化、白山、靖宇3個(gè)產(chǎn)地的北蒼術(shù)藥材中蒼術(shù)素的含量未達(dá)到藥典要求，本次實(shí)驗(yàn)選取的通化、集安等5個(gè)產(chǎn)地的北蒼術(shù)藥材合格，敦化、靖宇等3個(gè)產(chǎn)地的北蒼術(shù)藥材不合格。

同時(shí)，試驗(yàn)還綜合考查了8個(gè)不同產(chǎn)區(qū)的氣候、降雨量等環(huán)境因素，發(fā)現(xiàn)通化、集安一帶降雨量較小，溫差變化不明顯；白山一帶降雨量大，白天有強(qiáng)光照射，晚上濕度很高，對(duì)比蒼術(shù)喜陰涼干燥，怕高溫高濕環(huán)境的生長(zhǎng)習(xí)性，綜合分析表明，北蒼術(shù)生長(zhǎng)發(fā)育及質(zhì)量形成受到環(huán)境、氣候等各方面因素的影響，導(dǎo)致北蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量有所不同。此外，影響北蒼術(shù)質(zhì)量不一的原因也可能是因?yàn)楦鞯貐^(qū)人工種植區(qū)域、播種時(shí)間、種植方式等因素的影響。該試驗(yàn)的完成為今后吉林省內(nèi)北蒼術(shù)的種植和發(fā)展提供一定的理論基礎(chǔ)，同時(shí)也為北蒼術(shù)藥材臨床用藥的選取提供了一定的依據(jù)。