艾炭炮制工藝研究

呂佳美，李曦凝，王俊桐，甄翱翾，王昌輝，李 勇*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117；2.長春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，長春 130031）

艾葉為菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥葉，性溫，味苦，具有理氣、溫經(jīng)脈等作用。因艾葉有小毒，需經(jīng)過炮制加工處理可降低或消除毒副作用[1-9]。漢代《華氏中藏經(jīng)》最早記載于“艾葉，炒”，至明代提出了“存性”的要求，且艾葉在炒炭后具有祛瘀止血，驅(qū)寒止痛的功效[10-11]?，F(xiàn)代炮制方法以醋制和制炭2種方法，各炮制品質(zhì)量良莠不齊。本研究以艾炭中總黃銅的含量為評價指標，同時結(jié)合古代炮制過程中外觀形狀特征，不僅量化了炮制關(guān)鍵影響參數(shù)，優(yōu)選出了最佳艾炭炮制工藝，為艾葉炭工業(yè)化生產(chǎn)加工提供了科學(xué)依據(jù)，而且也為炒炭存性的中醫(yī)藥理論提供了強有力的客觀依據(jù)，為進一步建立國家標準奠定了基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥材 艾葉購于吉深大藥房，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室張景龍教授鑒定，樣品均為菊科植物艾（Artemisia argy Levl. Et Vant.）的干燥葉。

1.2 儀器 FA105型十萬分之一電子天平（上海精科實驗有限公司）；TP-A500電子天平（福州華至科學(xué)有限公司）；KQ-C型玻璃儀器氣流烘干器（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；HL-2B型手提式中藥粉碎機（杭州華菱設(shè)備有限公司）；W210D型恒溫水浴鍋（上海申順科技公司）；ST80型紅外溫度儀為（哈爾濱市側(cè)電器廠）；CYJ型滾筒式炒藥機（江陰市鑫達藥化機械制造有限公司）；101型鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）；UV-1780紫外可見分光光度計（島津儀器蘇州有限公司）。

1.3 試藥與試劑 盧丁對照品（購于中國藥品生物制品檢定所，3:100080-200707）；亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉及其他試劑均為分析純（購于北京化工廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平設(shè)計 設(shè)計正交L9（34）因素水平表,考察加熱溫度、加熱時間對艾葉炒炭質(zhì)量的影響。將炒藥機轉(zhuǎn)速定為20 r/min，將炒制溫度、炒制時間作為考察因素，因素設(shè)計，見表1。

表1 因素水平

2.2 試驗方法 照正交設(shè)計方案，取吉深大藥房凈艾葉50 g，輕揉至散，將炒藥機定為20 r/min，按照因素設(shè)計的溫度和時間進行炒炭，取出，放涼，即得。

2.3 考察指標及指標選擇依據(jù)

2.3.1 質(zhì)量評價指標的選擇 飲片傳統(tǒng)的質(zhì)量評價是在傳統(tǒng)中醫(yī)藥發(fā)展的過程中慢慢形成，直到現(xiàn)代中藥加工的研究，也在一定程度上顯示中藥飲片的質(zhì)量。按照傳統(tǒng)炮制外觀質(zhì)量的標準，能在一定程度上顯示炮制品的質(zhì)量，因此將其作為正交試驗的評價指標之一。根據(jù)《中華人民共和國藥典》（2015版）對艾炭飲片的描述，確定艾炭外觀達到“呈不規(guī)則碎片，表面黑褐色”為最佳品，將此最佳品定為100分，炮制后的艾炭請有經(jīng)驗的炒藥師傅，按照炒炭后顏色、片形及完整度分為5等：100、80、60、40、20 分。

2.3.2 內(nèi)在質(zhì)量評價指標的選擇 根據(jù)傳統(tǒng)的炒炭存性要求，參考相關(guān)文獻，艾葉中黃酮是其有效成分之一，具有抗菌、抗過敏、消炎等多種生物活性。因此，艾葉及其炮制品種選用總黃酮類成分的含量作為內(nèi)在的評價指標，將測定黃酮含量為選擇依據(jù)[12-18]。

2.3.3 對照品溶液的制備 精密稱取蘆?。?5.03 mg），轉(zhuǎn)移到量瓶中（25 mL），加適量乙醇試劑，放置水浴鍋上，微熱、溶解、放冷，加乙醇至刻度，搖勻，取20 mL轉(zhuǎn)移到100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻得到蘆丁0.2 mg/mL。

2.3.4 供試品溶液的制備 取艾葉及各批次艾葉炮制品，稱取0.5 g粉末，精密稱定、分別置于圓底燒瓶中（100 mL）。精密加入乙醇（40%）50 mL，再次稱重，用水浴進行回流提取，放置1 h，放涼，再次稱重，用乙醇（40%）補定減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 測定波長的選擇 取蘆丁對照品溶液1 mL，轉(zhuǎn)移到5 mL容量瓶，進行顯色處理，首先加入5%亞硝酸鈉0.2 mL，搖勻后放置6 min，接著加入10%硝酸鋁0.2 mL，搖勻后靜置6 min，再加入5%氫氧化鈉2 mL，加水定容，搖勻。靜置15 min后放入紫外分光光度計中，進行光譜掃描模式。結(jié)果對照品溶液在511 nm處有最大吸收。

2.4.2 標準曲線的制備 精密稱取蘆丁標準品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，按2.4.1項下進行顯色處理后放入紫外分光光度計中。以相應(yīng)試劑為空白，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標。結(jié)果表明：Y = 12.418 X - 0.012 7，r =0.999，蘆丁濃度在0.014 8～0.051 8 mg/mL 范圍內(nèi)與吸收呈良好的線性關(guān)系。

2.4.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1 mL，照上述方法連續(xù)測定6次。結(jié)果，蘆丁對照品溶液吸光度的RSD值為0.04%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取艾葉供試品溶液1 mL，分別于0、2、4、6、8、12 h，照上述方法測定，供試品溶液的RSD值為0.06%，表明艾葉提取溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 重復(fù)性試驗 取同批艾葉供試品5份，分別采用上述供試品溶液和對照品溶液的制備方法，并依法顯色進行紫外測定，測得總黃酮含量的平均質(zhì)量分數(shù)為16.30%，RSD值為0.02%，表明本法重復(fù)性良好。2.4.6 回收率試驗 取同一批已知含量的艾葉供試品9份，分為3組。將3組分別各精密加入蘆丁標準品，相當于樣品濃度的80%、100%、120%。按供試品溶液的提取方法提取，另取蘆丁標準品溶液測定作對照，并計算蘆丁低、中、高3個濃度的加樣回收率。結(jié)果見表2。

2.5 綜合評分標準 在艾炭樣品中總黃酮含量的測定發(fā)現(xiàn)，艾炭中的黃酮含量較生艾葉下降，其下降率在44%～81%。并聯(lián)系傳統(tǒng)外觀性狀進行分析，確定艾炭總黃酮下降率在65%者為炮制佳品。因此，本工藝研究將內(nèi)在指標下降65%者定為滿分，總黃酮下降率每增加或減少0.37%減1分。根據(jù)正交表綜合性評分中外觀評分和總黃酮下降率的分各占權(quán)重系數(shù)0.5，并計算綜合得分，結(jié)果見表3，表4。

表2 回收率試驗結(jié)果

表3 正交設(shè)計方案及炮制結(jié)果

表4 正交試驗各指標評分結(jié)果

2.6 結(jié)果分析 由正交試驗直觀分析表分析，從極差（R）值可以分析出在該正交試驗設(shè)定的因素、水平條件中，各因素對綜合得分的影響程度依次為A＞B，即A因素最大，B因素影響次之；A因素選擇水平2、B因素選擇水平2。且結(jié)合外在指標正交5中的研究外觀和得率，聯(lián)系分析結(jié)果，選擇最佳炮制工藝組合為 A2B2。且在方差分析中表明,炒制時間、炒制溫度2項因素都是影響的顯著性因素，見表5，表6。

表5 艾炭正交試驗結(jié)果分析（直觀分析）

表6 艾炭正交試驗結(jié)果分析（方差分析）

2.7 工藝驗證 為了驗證工藝，稱取吉深大藥房艾葉3份 （每份50 g），按照研究的工藝參數(shù)制備艾葉炭飲片，并對其黃酮含量進行測定，結(jié)果第1批含量為5.950 4%，第二批含量為5.951 2%，第3批含量為5.948 4%。RSD值為0.02%，表明工藝穩(wěn)定可行。

3 小結(jié)

為了更全面的反映溫度和時間對艾葉炭質(zhì)量的影響，利用外在指標（傳統(tǒng)質(zhì)量評價），內(nèi)在指標（黃酮含量）雙重的綜合評分對炮制品進行分析，經(jīng)過對工藝的研究，確定具體參數(shù)。

艾葉炮制炭化和灰化有本質(zhì)差別，艾葉炭中的總黃酮成分再次證明了炒炭存性，是炭化而不是灰化。現(xiàn)代藥理學(xué)研究[19-20]亦表明，黃酮具有止血功能，這與“炒炭止血”的傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論相一致。綜上所述，本項研究為建立科學(xué)合理的艾炭質(zhì)量控制標準提供了實驗依據(jù)，同時，也表明艾炭的化學(xué)和藥理學(xué)等系統(tǒng)研究還有待進一步深化。