生津片對(duì)口干癥模型大鼠唾液分泌的影響

張燚曼，馮 青，呂宏亮，王 云，于智莘

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

口干癥是一種多以口干為主的自覺病癥[1]，而其唾液分泌減少主要原因是由于分泌唾液腺體出現(xiàn)異常，常見口腔干燥并伴有舌部燒灼感、口唇干裂、表面結(jié)痂等[2]。臨床統(tǒng)計(jì)顯示，口干癥患者以老年人居多，并且在大于65歲的老齡人群中，口干癥患者的比率約為30%～40%[3-4]。由于口干癥病因較為復(fù)雜，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要以局部對(duì)癥治療為主[5-6]。中醫(yī)治療口干癥有養(yǎng)陰活血生津法、氣陰雙補(bǔ)法、調(diào)理陰陽(yáng)法等[7-9]，療效顯著。生津片中主藥為麥冬，具有益胃生津、滋陰潤(rùn)燥的功效[10]。本實(shí)驗(yàn)主要通過建立免疫誘導(dǎo)模型，觀察生津片對(duì)口干癥大鼠模型所致口干癥的治療作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試劑 清潔級(jí)SD大鼠（2月齡）60只，SD大鼠（8月齡）5只，雌性，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SCXK（吉）2009-0006。生津片，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心制備，弗氏完全佐劑（Sigma公司），考馬斯亮藍(lán)G-250（上海赫彭生物有限公司），卡介苗（長(zhǎng)春生物制品研究所），小牛血清（上海依赫科技有限公司），強(qiáng)的松（浙江仙琚有限公司，批號(hào)：20160321）。

1.2 造模方法與分組給藥 將大鼠隨機(jī)分為 6 組，正常對(duì)照組（生理鹽水 20 mL/kg），模型組（生理鹽水20 mL/kg），生津片低、中、高12、24、36 g/（kg·d）劑量組，可的松組（0.30 mg/d）。將5只SD大鼠（8月齡），取頜下腺，將其中的組織和包膜取0.1 g 放入10 mL無(wú)菌試管中，加入氯化鈉注射液2 mL，在冰水浴下勻漿，4 ℃低溫離心機(jī)離心后通過考馬斯亮藍(lán)比色法對(duì)蛋白含量進(jìn)行測(cè)定。將上清液加至滅菌生理鹽水中配制濃度為0.4 g/L，再與弗氏完全佐劑混合，制成質(zhì)量濃度為0.3 g/L乳化抗原液。于大鼠后足足趾部及兩側(cè)腹股溝注射乳化抗原，每只0.2 mL（含卡介苗3.25 g/L），同時(shí)注射百日咳疫苗，每只0.3 mL。在免疫后的第3、7、21天時(shí)，用抗原對(duì)模型組及各給藥組進(jìn)行二次免疫，用量與首次一致[11-14]。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1.3.1 唾液分泌量 給藥后一定時(shí)間間隔測(cè)定各組大鼠的唾液分泌量。測(cè)量前稱量棉球干重，測(cè)定唾液分泌時(shí)將稱重后的棉球塞至各組大鼠口頰內(nèi)，3 min后稱取濕重[15-18]。 濕重-干重=唾液分泌量（mg）

1.3.2 頜下腺指數(shù)的測(cè)定 首次免疫31 d后頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取出大鼠的頜下腺，稱重，計(jì)算頜下腺指數(shù)。 頜下腺指數(shù)=頜下腺的重量（mg）/體質(zhì)量（g）。

1.3.3 組織形態(tài)學(xué)觀察評(píng)價(jià)（HE染色） 將大鼠頜下腺制成切片，HE染色。通過光鏡觀察頜下腺的病變情況[19]。病變類型共分4個(gè)等級(jí)，參照文獻(xiàn)[20]方法評(píng)價(jià)：0分，頜下腺體正常，幾乎無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；1分，腺體稍有萎縮，并有少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；2分，腺體萎縮至正常形態(tài)三分之一左右，淋巴細(xì)胞輕度浸潤(rùn)；3分，腺體中度萎縮，腺泡部分壞死并伴有中度損傷；4分，腺體重度萎縮，腺泡完全壞死并伴有重度損傷。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)均用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠唾液分泌量變化比較 見表1。

表1 各組大鼠唾液分泌量變化比較（x± s ，n = 10）

2.2 各組大鼠頜下腺指數(shù)變化比較 見表2。

表2 各組大鼠頜下腺指數(shù)變化比較（x± s ，n = 10）

2.3 各組大鼠組織形態(tài)學(xué)變化比較 造模31 d時(shí)，將大鼠頸動(dòng)脈放血處死，光鏡下觀察一側(cè)頜下腺形態(tài)特征。結(jié)果表明，正常對(duì)照組的頜下腺無(wú)變化，淋巴細(xì)胞無(wú)浸潤(rùn)，腺泡正常，未見病理變化。模型組有多數(shù)腺體發(fā)生病理收縮，半數(shù)以上淋巴細(xì)胞異常且腺泡出現(xiàn)壞死情況。組織學(xué)評(píng)分為（2.89±0.64）分。給藥中、高劑量組及強(qiáng)的松組腺體萎縮程度減輕，頜下腺腺體輕度萎縮，腺泡周圍組織有輕度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，3組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 小結(jié)

生津片由黨參、麥冬、山豆根、天花粉、生地黃、射干、甘草7味藥組成，功能清熱降燥，增液生津，能調(diào)節(jié)體內(nèi)陰陽(yáng)失衡，補(bǔ)充體內(nèi)津液來(lái)源，促進(jìn)口鼻等腺體分泌[21]，進(jìn)而治療口干癥。

本實(shí)驗(yàn)采用免疫誘導(dǎo)法對(duì)大鼠進(jìn)行造模，通過觀察與唾液分泌有關(guān)腺體病理狀態(tài)，檢測(cè)各組大鼠唾液分泌量動(dòng)態(tài)變化以及頜下腺指數(shù)變化探究生津片治療口干癥的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)表明，與模型組相比，生津片中高劑量組能促進(jìn)大鼠唾液的增加，并減輕頜下腺損傷程度，說明生津片具有治療口干癥的療效。本實(shí)驗(yàn)為今后探究生津片激動(dòng)受體的途徑及作用位點(diǎn)打下基礎(chǔ)，為進(jìn)一步研究生津片涉及的信號(hào)傳導(dǎo)通路提供了有力證據(jù)。