HPLC法測定利爾眠膠囊中3種成分的含量

王雷　于榮

中圖分類號 R917 文獻標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）01-0062-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.01.16

摘 要 目的：建立同時測定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18，流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（23 ∶ 77，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測波長為345 nm（0～20 min，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀）和290 nm（>20～30 min，桂皮醛），柱溫為30 ℃，進樣量為10 μL。結(jié)果：鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛進樣量檢測線性范圍分別為0.036 80～0.736 0、0.016 76～0.335 2、0.004 140～0.082 80 μg（r≥0.999 5）；檢測限分別為0.110 4、0.050 3、0.124 2 ng，定量限分別為0.368 0、0.167 6、0.414 0 ng；精密度、穩(wěn)定性（12 h）、重復(fù)性試驗的RSD均<2.0%（n=6）；加樣回收率為96.16%～99.73%，RSD為0.99%～1.21%（n=6）。結(jié)論：建立的方法操作簡單、重復(fù)性好，適用于同時測定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿等3種成分的含量。

關(guān)鍵詞 利爾眠膠囊；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿；鹽酸巴馬?。还鹌と?；含量測定

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 3 components in Liermian capsule， including berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride and cinnamaldehyde. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Agilent Zorbax SB-C18 with mobile phase consisted of acetonitrile-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution （23 ∶ 77， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelengths were set at 345 nm （0-20 min， berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride） and 290 nm （>20-30 min， cinnamaldehyde）， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear ranges of berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride and cinnamaldehyde were 0.036 80-0.736 0， 0.016 76-0.335 2， 0.004 140-0.082 80 μg （r≥0.999 5）. The limits of detection were 0.110 4， 0.050 3，0.124 2 ng， and the limits of quantitation were 0.368 0， 0.167 6， 0.414 0 ng， respectively. RSDs of precision， stability （12 h） and reproducibility tests were all lower than 2.0% （n=6）. The recoveries were 96.16%-99.73% （RSD=0.99%-1.21%， n=6）. CONCLUSIONS： Established method is simple， reproducible and suitable for simultaneous determination of 3 components such as berberine hydrochloride in Liermian capsule.

KEYWORDS Liermian capsule； HPLC； Berberine hydrochloride； Palmatine hydrochloride； Cinnamaldehyde； Content determination

利爾眠膠囊是由黃連、肉桂兩味藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有清心降火、交通心腎的作用，用于心腎不交所致的失眠多夢、心悸不寧[1-2]等癥。其中黃連的主要成分為鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，這兩種成分具有抗菌、抗炎、抗焦慮、抗抑郁、治療心血管系統(tǒng)疾病等多種藥理作用[3-4]；肉桂的主要成分為桂皮醛，該成分具有鎮(zhèn)靜、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、改善心血管疾病、抗菌等藥理作用[5]。利爾眠膠囊收載于《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·內(nèi)科·心系分冊》，標(biāo)準(zhǔn)編號為WS-10171（ZD-0171）-2002[6]，其含量測定采用薄層掃描法測定鹽酸小檗堿的含量，方法專屬性不強，結(jié)果準(zhǔn)確性差，且樣品處理時間過長，步驟煩瑣。目前，有關(guān)利爾眠膠囊的質(zhì)量控制研究亦未見相關(guān)文獻報道。因此，筆者參考相關(guān)文獻[7-13]，采用高效液相色譜法（HPLC）建立了同時測定利爾眠膠囊黃連中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀，肉桂中桂皮醛含量的方法，以期為完善該制劑的質(zhì)量控制方法提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀，包括四元泵、紫外可變波長檢測器、自動進樣器、ChemStation化學(xué)工作站（美國Agilent公司）；Mettler AE240 型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

利爾眠膠囊（成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司，批號：160412、160921、170327，規(guī)格：0.35 g/粒）；鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212）、鹽酸巴馬汀對照品（批號：110732-201611）、桂皮醛對照品（批號：710-200011）均購自中國食品藥品檢定研究院，純度均>86%；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（23 ∶ 77，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：345 nm（0～20 min，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬?。?、290 nm（>20～30 min，桂皮醛）；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 分別精密稱取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛對照品58.95 、24.14、10.35 mg，加甲醇分別制成每1 mL含鹽酸小檗堿2.044 0 mg、鹽酸巴馬汀0.838 1 mg、桂皮醛0.414 0 mg的單一對照品貯備液；再分別精密量取鹽酸小檗堿對照品貯備液0.9 mL、鹽酸巴馬汀對照品貯備液1.0 mL、桂皮醛對照品貯備液0.5 mL，置于同一50 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約100 mg，精密稱定，置于200 mL量瓶中，加甲醇定容，稱定質(zhì)量，超聲（功率：150 W，頻率：40 kHz，下同）處理30 min，放冷至室溫，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按樣品處方比例和制備工藝分別配制缺黃連、缺肉桂的陰性樣品，再按“2.2.2”項下制備方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜。結(jié)果，在該色譜條件下，各待測成分間、待測成分與雜質(zhì)峰間均能達到基線分離，分離度均>1.5，其他成分對測定無干擾，理論板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計不低于3 000，詳見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分進樣量為橫坐標(biāo)（x，μg）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進行線性回歸，得鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的回歸方程分別為y=4 559x-15.05（r=0.999 6）、y=2 836x+7.529（r=0.999 8）、y=17 173x+28.62（r=0.999 5）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛進樣量檢測線性范圍分別為0.036 80～0.736 0、0.016 76～ 0.335 2、0.004 140～0.082 80 μg。

2.5 檢測限與定量限考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3 ∶ 1時，得檢測限；當(dāng)信噪比為10 ∶ 1時，得定量限。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的檢測限分別為0.110 4、0.050 3、0.124 2 ng，定量限分別為0.368 0、0.167 6、0.414 0 ng。

2.6 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛峰面積的RSD分別為0.41%、0.37%、0.85%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：160412）適量，分別在室溫下放置0、1、2、4、8、12 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛峰面積的RSD分別為1.48%、0.99%、1.63%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批（批號：160412）樣品內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛含量的平均值分別為68.85、32.13、7.57 mg/g，RSD分別為0.85%、1.89%、1.35%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（批號：160412）適量，共6份，每份約50 mg，分別置于200 mL量瓶中，各加入待測成分對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定

取3批樣品內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 提取條件的選擇

筆者參考相關(guān)文獻[4]，比較了加熱回流和超聲兩種提取方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用上述兩種提取方法鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量相當(dāng)；而采用超聲提取時桂皮醛的含量較高，這可能與桂皮醛具有揮發(fā)性，長時間加熱導(dǎo)致其損失有關(guān)。綜合考慮選擇超聲提取為本試驗的提取方法。筆者還比較了甲醇及不同比例甲醇-水作為溶劑的提取效果，結(jié)果顯示甲醇為提取溶劑時，上述3種成分的提取含量最高，色譜中雜質(zhì)峰最少，故確定甲醇為本試驗的提取溶劑。

3.2 檢測波長的選擇

參考相關(guān)文獻[14-18]可知，鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的特征吸收波長為345 nm[8-10]，桂皮醛的特征吸收波長為290 nm。因此，本試驗通過HPLC儀的波長切換功能，選擇上述各待測成分的特征吸收波長進行含量測定。

3.3 對結(jié)果的討論

利爾眠膠囊標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿計，不得少于17.5 mg。本研究3批樣品中的鹽酸小檗堿含量均>17.5 mg/粒，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]。

綜上所述，本研究建立的方法操作簡單、重復(fù)性好，適用于同時測定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的含量。

參考文獻

[ 1 ] 陳曉英，彭艷梅. HPLC法測定利爾眠片中鹽酸小檗堿的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，14（12）：62-64.

[ 2 ] 高美超，張洋.綜合療法治療頑固性失眠41例[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9（17）：30-31.

[ 3 ] 張月月，王君明，崔瑛，等.中藥生物堿類成分抗焦慮或抑郁活性及黃連生物堿藥理作用研究進展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30（4）：1184-1187.

[ 4 ] 王利紅，唐文照，辛義周.黃連中生物堿成分及藥理作用研究進展[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，39（4）：389-392.

[ 5 ] 張明發(fā)，沈雅琴.肉桂的藥理作用及溫里功效[J].陜西中醫(yī)，1995，16（1）：39-42.

[ 6 ] 國家藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編：內(nèi)科：心系分冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：92-95.

[ 7 ] 袁學(xué)剛，王戰(zhàn)國，胡慧玲，等. HPLC測定連梔礬溶液中表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量[J].中藥與臨床，2016，7（1）：31-33.

[ 8 ] 涂星，唐洪梅，柴玉娜，等.反相高效液相色譜法測定腸激安膠囊中芍藥苷、鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀含量[J].藥物分析雜志，2015，35（1）：115-120.

[ 9 ] 徐志紅，陳磊垚，劉欣怡.小青龍貼中桂皮醛含量測定的研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，8（6）：576-584.

[10] 鄧六勤，鐘鳴. RP-HPLC法測定黃連上清片中鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀的含量[J].中國藥房，2011，22（16）：1514-1516.

[11] 李翔，劉皈陽，馬建麗，等. HPLC法測定梔子黃柏口服液中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量[J].中國藥師，2013，16（8）：1180-1182.

[12] 吳海偉，賈燕花，王曉青，等. HPLC法測定復(fù)方氯霉素醇溶液中氯霉素和水楊酸的含量[J].實用藥物與臨床，2014，17（7）：878-881.

[13] 胡安青. HPLC法測定金雞片中鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量[J].中國藥師，2012，15（11）：1590-1592.

[14] 郗洋，張熙潔，劉曉紅. HPLC法同時測定連翹敗毒丸中5種成分的含量[J].中國藥房，2016，27（6）：815-818.

[15] 劉會，彭艷梅，吳艷，等. HPLC法測定芍桂散寒顆粒中桂皮醛的含量[J].湖南中醫(yī)雜志，2016，32（12）：157-158.

[16] 賈曉斌，王麗靜，陳彥，等. HPLC測定肉桂、木香中桂皮醛、木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯[J].中成藥，2010，32（2）：459-462.

[17] 劉宏明，張葉，聶磊. HPLC法同時測定小兒柴桂退熱顆粒中葛根素、大豆苷、黃芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黃芩素的含量[J].藥物分析雜志，2014，34（6）：1038-1042.

[18] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：136、303.

（收稿日期：2017-06-14 修回日期：2017-08-14）

（編輯：劉 柳）