IRF6基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂相關(guān)性的meta分析

馬 銳 孫慧慧 高 潔 葛振林

非綜合征型唇腭裂（non-syndromic cleft lip with or without cleft palate，NSCL/P）是指不伴有其他先天畸形的唇腭裂，在世界范圍內(nèi)其出生率約為1‰～2‰，是最常見的先天畸形[1]。不同地區(qū)NSCL/P新生兒患病率存在差異，中國出生率約為1.62‰，是NSCL/P的高發(fā)區(qū)[2]。因此探究NSCL/P的病因和危險因素，進(jìn)而預(yù)防其發(fā)生發(fā)展，對于提高我國出生人口素質(zhì)有著非常重要的意義。NSCL/P病因較為復(fù)雜，涉及環(huán)境與遺傳因素及其交互作用。目前研究并得到較多支持的有IRF6、MSX1、MTFR等基因和位點(diǎn)[3]。但I(xiàn)RF6基因是迄今發(fā)現(xiàn)的最有價值的、與NSCL/P致病有關(guān)的基因之一[4]。許多的研究表明IRF6基因和非綜合征型唇腭裂的發(fā)生有密切的關(guān)聯(lián)[5～7]。其中對于rs2235371位點(diǎn)SNPs的研究尤為突出，但各個研究得出結(jié)論并不一致[8～14]，因此本研究收集有關(guān)rs2235371位點(diǎn)SNPs與NSCL/P的病例對照研究進(jìn)行meta分析，以探究rs2235371位點(diǎn)SNPs與NSCL/P之間的關(guān)系。

資料和方法

1.納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究對象為確診為患有非綜合征型唇腭裂的中國患者；②研究類型為病例對照；③相關(guān)IRF6基因rs2235371位點(diǎn)SNPs與NSCL/P的研究；④臨床資料詳細(xì)且文獻(xiàn)中數(shù)據(jù)的完整文獻(xiàn)；⑤文獻(xiàn)僅限中英文。

（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：對于研究對象非中國患者；質(zhì)量低的文獻(xiàn)以及綜述；重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)報道；未提供充分原始數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)予以排除。

2.文獻(xiàn)檢索

計算機(jī)檢索 PubMed、VIP、CNKI 和 WanFang Date數(shù)據(jù)庫，檢索自各數(shù)據(jù)庫建庫至2016年2月公開發(fā)表的有關(guān)IRF6基因多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)的文獻(xiàn)。英文檢索詞：“interferon regulatory factor 6”“IRF6”“polymorphism”“NSCL/P”“non-syndrom ic cleft lip with or without cleft palate”，中文檢索詞：“IRF6”“基因多態(tài)性”“唇腭裂”“非綜合癥型唇腭裂”等。

3.文獻(xiàn)的篩選與數(shù)據(jù)提取

由兩名研究人員（馬銳和孫慧慧）獨(dú)立地篩選文獻(xiàn)，嚴(yán)格地按照此次研究的納入排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行文獻(xiàn)的篩選，然后進(jìn)行交叉核對篩選結(jié)果。若遇到分歧，則通過與第三方研究者（高潔）討論解決。兩名研究者獨(dú)立地對原始文獻(xiàn)中記錄數(shù)據(jù)的收集。提取作者和時間、研究地區(qū)及種族、病例組對照組基因型分布、對照組基因型分布是否符合Hardy-Weinberg（H-W）平衡、納入文獻(xiàn)研究的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。制作并完成文獻(xiàn)數(shù)據(jù)提取表格根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道[15]對各個納入文獻(xiàn)研究的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的評估，本次研究的文獻(xiàn)質(zhì)量評估內(nèi)容：①樣本量大小；②研究中的病例診斷是否充分；③病例組與對照組的基線資料是否匹配；④對照組H-W平衡；⑤基因檢測是否準(zhǔn)確可靠；⑥一般信息是否充分。以上6項，每1項記1分，其中單篇評分總計＞3分者為質(zhì)量可靠。

4.統(tǒng)計分析

應(yīng)用Stata12.0軟件對納入的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行Mata分析，用OR值和其95%CI表示其效應(yīng)量?？梢岳每ǚ綑z驗(yàn)檢驗(yàn)納入的各研究間異質(zhì)性的大小，此次檢驗(yàn)的水準(zhǔn)是α＝0.1，即當(dāng)P≤0.1時，表示各研究之間的異質(zhì)性較大。并且利用I2檢驗(yàn)對其異質(zhì)性進(jìn)行定量的分析。當(dāng)各研究之間的異質(zhì)性較小時，可以應(yīng)用固定效應(yīng)模型對研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析：當(dāng)存在較大的統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性時，可以采用隨機(jī)效應(yīng)模型對研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析。為分析異質(zhì)性來源，可根據(jù)納人研究的某些特征分層，最終進(jìn)行亞組分析。采用漏斗圖檢驗(yàn)是否存在發(fā)表偏倚，并采用Begg法對發(fā)表偏倚進(jìn)行定量分析[16，17]。

結(jié) 果

1.納入研究的一般情況

初檢出相關(guān)文獻(xiàn)296篇，查重之后剩下193篇。閱讀題目和摘要，并經(jīng)過小組討論，確定基本符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)共25篇。進(jìn)一步查找和仔細(xì)閱讀全文，剔除篇18，最終納入完全符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)共7篇[8～14]。包含969例患者和783例對照。納入研究的一般情況和質(zhì)量評價分?jǐn)?shù)見表1，文獻(xiàn)篩選流程見圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

表1 納入研究基本信息表

2.分析結(jié)果

（1）meta分析結(jié)果：如表 2所示 GA vs GG：P＝0.000，OR＝0.629 （95%CI：0.519～0.762）；GA+AA vs GG：P ＝0.000，OR ＝0.615 （95%CI：0.512 ～0.738），有統(tǒng)計學(xué)意義，提示GA和GA+AA型可降低中國人罹患非綜合征型唇腭裂的風(fēng)險（圖2、3）。AA vs GG ：P＝0.063，OR＝0.598（95%CI：0.349～1.025）；GA+GG vs AA：P＝0.304，OR＝1.355（95%CI：0.794～2.312），無統(tǒng)計學(xué)意義，同時其異質(zhì)性檢驗(yàn)定性P為0.032，0.006均小于0.1，定量I2（%）為56.6和66.9均大于50?？紤]其異質(zhì)性來源為種族差異引起，因此進(jìn)行亞組分析。

圖2 IRF6基因多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的meta分析：GA vs GG

圖3 IRF6基因多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的meta分析：GA+AA vs GG

圖4 亞組分析：漢族與非漢族AA vs GG

（2）亞組分析：如表2所示，亞組分析后其異質(zhì)性明顯減小，可采用固定效應(yīng)模型。漢族AA vs GG ：P＝0.000，OR＝0.384（95%CI：0.256～0.577），有統(tǒng)計學(xué)意義，提示AA型可降低漢族罹患NSCL/P的風(fēng)險。漢族GA+GG vs AA：P＝0.000，OR＝2.129（95%CI：1.457～3.111），有統(tǒng)計學(xué)意義，提示GA+GG型可增加漢族罹患NSCL/P的風(fēng)險。非漢族AA vs GG：P＝0.857，OR＝1.050（95%CI：0.619～1.782）；GA+GG vs AA：P＝0.287，OR＝0.760（95%CI：0.461～1.253），無統(tǒng)計學(xué)意義（圖 4、5）。

表2 IRF6基因rs2235371位點(diǎn)SNPs與NSCL/P的meta分析結(jié)果

圖5 亞組分析：漢族與非漢族GA+GG vs AA

圖6 IRF6基因多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的發(fā)表性偏倚：GA vs GG

（3）發(fā)表性偏倚：如圖6～7，應(yīng)用Stata12.0Begg法對發(fā)表偏倚進(jìn)行定量分析：GA vs GG：P＝1.000；GA+AA vs GG：P＝0.764。P 值均大于 0.5，且漏斗圖結(jié)果對稱，涂點(diǎn)均在95%CI內(nèi)，提示發(fā)表偏倚較小，結(jié)果較為可靠。

圖7 IRF6基因多態(tài)性與NSCL/P相關(guān)性的發(fā)表性偏倚：GA+AA vs GG

討 論

本次研究共納入7篇文獻(xiàn)，其中Yongchu Pan2010[8]和王玲2015[13]的研究指出IRF6基因rs2235371位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率分布在NSCL/P組與對照組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，但李夢潔2012[11]和姚旺2013[14]的研究卻指出明rs2235371位點(diǎn)的A等位基因突變與NSCL/P的發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，該突變降低了NSCL/P的發(fā)病危險。經(jīng)過合并分析得出IRF6基因rs2235371位點(diǎn)GA和GA+AA基因型在NSCL/P組與對照組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義，可降低中國人罹患非綜合征型唇腭裂的風(fēng)險。AA vs GG和GA+GG vs AA這兩組meta分析時，其異質(zhì)性較大，由于納入的7個研究中，有4個來自漢族，3個來自其它民族，考慮種族可能是異質(zhì)性來源之一，因此進(jìn)行亞組分析。亞組分析后，異質(zhì)性明顯減小，且AA vs GG和GA+GG vs AA基因型在漢族NSCL/P組與對照組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義。此結(jié)果提示：IRF6基因rs2235371位點(diǎn)SNPs與NSCL/P之間的關(guān)系存在種族差異，且AA型可降低漢族罹患NSCL/P的風(fēng)險，GA+GG型可增加漢族罹患NSCL/P的風(fēng)險。

IRF6基因是通過研究伍德綜合征而被發(fā)現(xiàn)的，1987年，Bocian等[18]通過染色體分析首次報道了伍德綜合征患者有染色體lq32-lq41的缺失。隨后一些學(xué)者們在位于lq32-1q41區(qū)域內(nèi)的IRF6基因上找到了與伍德綜合征表型一樣的基因突變。伍德綜合征患者臨床表現(xiàn)與單純唇裂或腭裂難以區(qū)別，因此對伍德綜合征致病基因的研究，為NSCL/P致病基因的探索提供了有利的線索。同時該基因編碼干擾素調(diào)節(jié)因子6，其蛋白結(jié)構(gòu)包括N端高度保守的DNA結(jié)合域以及C端相對保守的蛋白結(jié)合域，這種蛋白結(jié)合域是可以介導(dǎo)TGF-β信息通路的其中一種轉(zhuǎn)錄因子[19]，所以IRF6基因的變異導(dǎo)致此種重要的發(fā)育通路受到影響，許多研究分析表明伍德綜合征在相關(guān)的頜面部、生殖器以及皮膚等部位中都有比較高表達(dá)，基于此將IRF6基因作為NSCL/P的候選基因來研究。2004年，Zucchero等[20]的研究證實(shí)NSCL/P的發(fā)生在遺傳學(xué)方面12%歸因于IRF6的基因突變，尤其是G等位基因變異作為一種危險因素。近年來，關(guān)于IRF6基因rs2235371位點(diǎn)的變異（由G到A的替換）日益增多，但各個研究得出的結(jié)論并不一致，因此本次研究采用meta分析的方法定量評價IRF6基因rs2235371位點(diǎn)SNPs與中國非綜合征型唇腭裂患者的相關(guān)性。

另外此次研究同時存在一些局限性：本次二次研究的對象僅僅為中國患者，未考慮年齡、性別、飲食及其他基因因素的影響。這些因素都有可能會對此次結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。所以，對于此次的研究結(jié)果還需要更多的大樣本，同質(zhì)性的臨床病例研究去驗(yàn)證，以便對lRF6基因多態(tài)性與非綜合征型唇腭裂相關(guān)性做出更可靠、更合理的結(jié)論。