• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    桑葉茯磚茶多糖的響應(yīng)面提取工藝優(yōu)化及其體外抗氧化降血脂作用

    2018-10-16 10:09:52韋承伯韓國鋒韋文龍蔣佳琪
    食品工業(yè)科技 2018年18期
    關(guān)鍵詞:磚茶膽酸液料

    曾 橋,韋承伯,韓國鋒,韋文龍,蔣佳琪

    (1.陜西科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,陜西西安 710021;2.陜西科技大學(xué)輕工科學(xué)與工程學(xué)院,陜西西安 710021;3.陜西農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究院,陜西西安 710021;4.陜西樸道茯茶股份有限公司,陜西咸陽 713700)

    桑葉為???Moraceae)植物桑(MorusalbaL.)的葉,又名鐵扇子[1],兼具食藥用價(jià)值,《中國藥典》記載其有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目等功效,用于風(fēng)熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭痛、目赤昏花[2],由于食藥用歷史悠久,1993年原國家衛(wèi)生部將其列為藥食同源物質(zhì)?,F(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明,桑葉含有豐富的黃酮、多糖、氨基酸、生物堿等活性成分,具有降血糖[3]、降血脂[4]和膽固醇[5]、抗氧化[6]、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善消化系統(tǒng)[7]、抗腫瘤[8]等作用。桑葉在我國分布廣泛,產(chǎn)量巨大,除少量用于養(yǎng)蠶和藥用外,每年有大量的桑葉未得到有效的利用而浪費(fèi)。近年來,隨著人們對桑葉的研究及認(rèn)識的深入,以桑葉為原料開發(fā)具有一定保健功能的食品,從而提高其利用價(jià)值越來越受到人們的重視。

    隨著人們生活水平的提高和保健意識的增強(qiáng),具有保健功效和投資增值的傳統(tǒng)發(fā)酵茶受到了廣大消費(fèi)者的青睞,這其中尤其以茯磚茶的發(fā)展最為迅速,成為茶品市場上的新亮點(diǎn)。茯磚茶屬后發(fā)酵茶,是所有茶類中加工工藝最復(fù)雜、生產(chǎn)加工周期最長、工藝最獨(dú)特的黑茶類產(chǎn)品[9]。茯磚茶內(nèi)質(zhì)金花普茂,菌香濃郁,開湯后湯色紅濃,滋味醇和,香氣純正[10],具有消食健胃、降脂減肥、降血糖、抗腫瘤、保肝護(hù)肝等功效。桑葉屬于可再生資源、產(chǎn)量大、價(jià)格低廉,加之有制茶的歷史,是制作茯磚茶的理想原料。通過將桑葉發(fā)酵制作成桑葉茯磚茶,對于提高桑葉利用率,增加產(chǎn)品附加值,促進(jìn)農(nóng)民增收具有重要意義。

    本文前期以桑葉為原料,經(jīng)采摘、干燥、渥堆、汽蒸、成型、發(fā)花、陳化等工藝制作而成桑葉茯磚茶的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對桑葉茯磚茶多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究,并考察桑葉茯磚茶多糖的抗氧化活性及降血脂作用,從而為桑葉茯磚茶的飲用以及進(jìn)一步開發(fā)提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    桑葉茯磚茶 所用原料桑葉為霜桑葉,2016年11~12月采摘于陜西漢中勉縣,經(jīng)陜西科技大學(xué)藥學(xué)系鑒定為??浦参锷?MorusalbaL.)的葉,后在陜西樸道茯茶股份有限公司制作而成;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品 上海源葉生物科技有限公司,純度≥98%;胃蛋白酶 上海源葉生物科技有限公司,BR,1∶250;胰蛋白酶 上海源葉生物科技有限公司,USP級,1∶30000;濃硫酸、濃鹽酸、水楊酸 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;氫氧化鈉、30%雙氧水 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;苯酚、過硫酸鉀、無水乙醇、鐵氰化鉀、抗壞血酸(VC) 天津市天力化學(xué)試劑有限公司;硫酸亞鐵 廣東光華科技股份有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、ABTS二胺鹽、甘氨膽酸鹽、?;悄懰猁} 上海源葉生物科技有限公司。

    TU-1810紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;FA1004N電子分析天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司;DZ-2BC型真空干燥箱 天津市泰斯特儀器有限公司;RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;GZX-9246MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;TD5A大容量低速離心機(jī) 長沙英泰儀器有限公司;電熱恒溫水浴鍋 北京科偉永興儀器有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 桑葉茯磚茶預(yù)處理 取桑葉茯磚茶1塊(500 g),將其掰開捏碎,置于50 ℃真空干燥箱中干燥至恒重后,粉碎過60目篩,得桑葉茯磚茶粉末備用。

    1.2.2 桑葉茯磚茶多糖水提工藝流程 精密稱定桑葉茯磚茶粉末→熱水提取→冷卻至室溫→離心(4000 r/min)15 min→取上清液→抽濾→得多糖提取液。

    1.2.3 多糖含量的測定

    1.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取干燥至恒重葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用蒸餾水溶解定容至100 mL,得0.1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液備用。精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分別置于10 mL容量瓶中,加蒸餾水稀釋定容,搖勻,得濃度分別為0、10、20、30、40、50、60 μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液。精密量取各濃度葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液2 mL至具塞錐形瓶中,加入5%苯酚溶液1 mL,搖勻,迅速加入濃硫酸5 mL,搖勻,于沸水浴中水解15 min,取出,冷卻至室溫,待測。另取蒸餾水2 mL按上述條件處理作空白對照。于490 nm處測吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(X)為橫坐標(biāo),吸光度(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.2.3.2 桑葉茯磚茶多糖含量的測定 精密稱取1.2.1中的桑葉茯磚茶粉末2 g,按1.2.2中的方法進(jìn)行操作獲得桑葉茯磚茶多糖提取液,用蒸餾水定容至100 mL,進(jìn)一步精密吸取1.0 mL至50 mL容量瓶中,用蒸餾水定容;進(jìn)一步地精密吸取2 mL至具塞錐形瓶中,按1.2.3.1“加入5%苯酚溶液1 mL……待測”操作,另取蒸餾水2 mL按上述條件處理作空白對照。于490 nm處測吸光度。將所測吸光度值代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中,計(jì)算得樣品溶液中多糖的濃度,按稀釋倍數(shù)計(jì)算得多糖含量。

    1.2.3.3 桑葉茯磚茶多糖得率的計(jì)算

    多糖得率(%)=[(Y×V×D)/(B×106)]×100

    式中:Y為多糖濃度(μg/mL);V為樣品溶液體積(mL);D為稀釋倍數(shù);B為原料重量(g);106為質(zhì)量換算系數(shù)。

    1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 以桑葉茯磚茶多糖得率為考察指標(biāo),分別考察提取溫度、提取時(shí)間、液料比以及提取次數(shù)對得率的影響。

    1.2.4.1 提取溫度對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 精密稱取桑葉茯磚茶試樣2 g,在提取次數(shù)為1次,提取時(shí)間為2 h,液料比為20 mL/g下,分別考察提取溫度40、50、60、70、80、90 ℃對桑葉茯磚茶多糖得率的影響。

    1.2.4.2 提取時(shí)間對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 精密稱取桑葉茯磚茶試樣2 g,在提取次數(shù)為1次,提取溫度為80 ℃,液料比為20 mL/g下,分別考察提取時(shí)間為0.5、1、1.5、2、2.5 h對桑葉茯磚茶多糖得率的影響。

    1.2.4.3 液料比對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 精密稱取桑葉茯磚茶試樣2 g,在提取次數(shù)為1次,提取時(shí)間為2 h,提取溫度為80 ℃下,分別考察液料比為8∶1、12∶1、16∶1、20∶1、24∶1、28∶1、32∶1 mL/g對桑葉茯磚茶多糖得率的影響。

    1.2.4.4 提取次數(shù)對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 精密稱取桑葉茯磚茶試樣2 g,在提取時(shí)間為2 h,液料比為20 mL/g,提取溫度為80 ℃下,分別考察提取次數(shù)為1、2、3次對桑葉茯磚茶多糖得率的影響。

    1.2.5 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以提取溫度,提取時(shí)間以及液料比為自變量,利用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行三因素三水平的Box-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),其實(shí)驗(yàn)因素和水平設(shè)計(jì)見表1。

    表1 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素和水平表Table 1 Factors and levels of Box-Behnken design

    1.2.6 體外抗氧化活性研究

    1.2.6.1 DPPH自由基清除活性測定 參照文獻(xiàn)[11]稍加改進(jìn)。稱取一定量DPPH粉末,用無水乙醇配制成濃度為0.1 mmol/L的DPPH溶液。用蒸餾水將桑葉茯磚茶多糖母液稀釋成8、16、24、32、40、48、56、64、72、80 μg/mL的濃度梯度。取10支潔凈具塞試管,分別依次加入DPPH溶液2 mL,各濃度梯度桑葉茯磚茶多糖溶液2 mL,劇烈振搖,室溫放置30 min,以蒸餾水調(diào)零,于517 nm處測吸光度記為A樣品。用蒸餾水代替DPPH溶液按上述方法處理測定吸光度記為A對照,以蒸餾水代替桑葉茯磚茶多糖提取液按上述方法處理測定吸光度記為A空白。同時(shí),以VC為陽性對照。按下式計(jì)算DPPH自由基清除率:

    DPPH自由基清除率(%)=[1-(A樣品-A對照)/A空白]×100

    1.2.6.2 ABTS+·清除活性測定 參照文獻(xiàn)[12]和[13]稍加改進(jìn)。將8.1 mmol/L ABTS溶液與3.2 mmol/L過硫酸鉀溶液等體積混合,暗處放置16 h,使用時(shí)用無水乙醇稀釋至其在734 nm 波長處A為0.70左右。分別取質(zhì)量濃度為10、30、50、70、90、110、130 μg/mL桑葉茯磚茶多糖提取液1 mL置于具塞試管中,加入4 mL ABTS+·溶液,室溫避光反應(yīng)6 min,在734 nm下,測其吸光度記為A樣品;以1 mL蒸餾水代替桑葉茯磚茶多糖溶液為空白組,測吸光度記為A空白,以上測定時(shí)均以蒸餾水調(diào)零。同時(shí),以VC為陽性對照。按下式計(jì)算ABTS+·清除率:

    ABTS+·清除率(%)=(1-A樣品/A空白)×100

    1.2.6.3 ·OH清除活性測定 參照文獻(xiàn)[14]稍加改進(jìn)。于不同試管中分別加入質(zhì)量濃度為0.175、0.35……1.75、1.925 mg/mL桑葉茯磚茶多糖溶液2 mL,每支試管依次加6 mmol/L 的FeSO4溶液2 mL,6 mmol/L的H2O2溶液2 mL,搖勻,靜置10 min,進(jìn)一步加入6 mmol/L的水楊酸溶液2 mL 搖勻,于37 ℃水浴30 min,0.45 μm微孔濾膜濾過,以蒸餾水調(diào)零,于510 nm 測吸光值,記為A樣品。以蒸餾水代替桑葉茯磚茶多糖提取液按上述方法測定吸光度,記為A空白;用蒸餾水代替水楊酸按上述方法測定吸光度,記為A對照。同時(shí),以VC為陽性對照,按下式計(jì)算·OH清除率:

    ·OH清除率(%)=[1-(A樣品-A對照)/A空白]×100

    1.2.7 降血脂作用研究

    1.2.7.1 繪制膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線 參照文獻(xiàn)[15]的方法,略作修改,分別繪制甘氨膽酸鹽和?;悄懰猁}標(biāo)準(zhǔn)曲線。取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液(甘氨膽酸鹽0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mmol/L,?;悄懰猁}0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mmol/L)2 mL分別置于不同具塞試管中,分別加入6 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%的H2SO4溶液于70 ℃水浴20 min,取出冰浴5 min,在387 nm波長處測定吸光度。以膽酸鹽含量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)分別繪得甘氨膽酸鹽和?;悄懰猁}標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    1.2.7.2 膽酸鹽結(jié)合實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[15]的方法,略作修改,移取質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL桑葉茯磚茶多糖溶液3 mL于100 mL具塞三角瓶中,每個三角瓶分別加入10 mg/mL胃蛋白酶溶液3 mL和0.01 mol/L的HCl溶液1 mL,在37 ℃下恒溫水浴振蕩消化1 h(模擬胃消化環(huán)境)。隨后以0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.3,加入10 mg/mL胰蛋白酶溶液4 mL,在37 ℃下恒溫水浴振蕩消化1 h(模擬腸道環(huán)境)。每個樣品中加入0.4 mmol/L甘氨膽酸鹽4 mL或0.5 mmol/L?;悄懰猁}4 mL,繼續(xù)恒溫水浴振蕩1 h,于4000 r/min離心20 min,取上清液,于387 nm處測定吸光度值,按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算剩余甘氨膽酸鹽和?;悄懰猁}含量,所加入甘氨膽酸鹽或?;悄懰猁}總量減去剩余量所得差值與總量的比值即為結(jié)合率,以百分比表示。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次,響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Design-Expert 8.0.6軟件進(jìn)行二次回歸分析及方差分析,其余實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用Graph Pad Prism軟件進(jìn)行處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    按1.2.3.1項(xiàng)下規(guī)定所繪制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為:y=0.0671x+0.0021,相關(guān)系數(shù)R2=0.9998,線性關(guān)系良好。

    圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of glucose

    2.2 單因素對桑葉茯磚茶多糖得率的影響

    2.2.1 提取溫度對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 如圖2所示,提取溫度在40~50 ℃區(qū)間內(nèi)時(shí),桑葉茯磚茶多糖得率隨溫度的升高而增大,在50 ℃時(shí),得率最大,這是由于溫度越高,分子熱運(yùn)動越快,多糖溶出速度也就快,此外,溫度升高還能增加多糖溶解度。當(dāng)溫度超過50 ℃繼續(xù)升高時(shí),多糖得率則開始緩慢下降,這是因?yàn)檫^高的溫度會使得多糖部分水解從而造成得率下降。因此,合理的提取溫度為50 ℃,這與文獻(xiàn)[16-17]研究的多糖最適提取溫度為70~80 ℃不同,可能的原因包括桑葉多糖和其他種類多糖在結(jié)構(gòu)上可能有區(qū)別,另外,茯磚茶制作過程中,由于高溫高濕的環(huán)境以及微生物的作用,可能導(dǎo)致糖的組成和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化[18],從而使得桑葉茯磚茶多糖的最佳提取溫度發(fā)生變化。

    圖2 提取溫度對桑葉茯磚茶多糖得率的影響Fig.2 The effect of extraction temperature on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    2.2.2 提取時(shí)間對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 由圖3可知,隨著提取時(shí)間的延長,桑葉茯磚茶多糖的得率先呈較快的增長,但是當(dāng)提取時(shí)間增加到1.5 h后,得率趨于平穩(wěn)甚至有緩慢下降趨勢。由于在初始階段,提取液中多糖濃度較低,因而溶出就較快,隨著提取時(shí)間的延長,提取液中多糖濃度逐漸增大,溶液逐步趨于飽和達(dá)到平衡狀態(tài),從而導(dǎo)致多糖溶出速率降低,因此,在后期延長提取時(shí)間,得率變化不大。綜合考慮能耗和節(jié)約時(shí)間等因素,選擇最佳提取時(shí)間為1.5 h。

    圖3 提取時(shí)間對桑葉茯磚茶多糖得率的影響Fig.3 The effect of extraction time on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    2.2.3 液料比對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 由圖4可知,當(dāng)液料比小于12∶1 mL/g時(shí),桑葉茯磚茶多糖的得率隨著液料比的增加顯著增大,當(dāng)液料比大于12∶1 mL/g時(shí),多糖得率繼續(xù)緩慢增加,當(dāng)液料比大于16∶1 mL/g時(shí),多糖得率明顯降低,而當(dāng)液料比大于24 mL/g時(shí),桑葉茯磚茶多糖的得率則呈緩慢降低的趨勢。這可能是由于水量過大導(dǎo)致后續(xù)工序能耗增加,效率降低[19]。因此,桑葉茯磚茶多糖提取的最佳液料比確定為16∶1 mL/g。

    圖4 液料比對桑葉茯磚茶多糖得率的影響Fig.4 The effect of liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    2.2.4 提取次數(shù)對桑葉茯磚茶多糖得率的影響 由圖5可知,當(dāng)提取次數(shù)為1時(shí),桑葉茯磚茶多糖得率為11.10%,復(fù)提之后合并提取液,多糖得率為11.80%,得率變化極顯著(p<0.01),累計(jì)3次,多糖總得率為11.79%,得率變化不顯著(p>0.05)。雖然提取2次和1次相比,多糖得率變化極顯著(p<0.01),然而得率僅增加0.70%,若以最大得率11.80%為對照,提取1次即可獲得桑葉茯磚茶中94.07%的多糖,而增加提取次數(shù)不僅增加能耗,而且浪費(fèi)時(shí)間,從經(jīng)濟(jì)角度考慮,選擇提取1次為宜。

    圖5 提取次數(shù)對桑葉茯磚茶多糖得率的影響Fig.5 The effect of extraction times on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick Tea

    2.3 響應(yīng)面優(yōu)化桑葉茯磚茶多糖提取工藝

    2.3.1 Box-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,確定以提取時(shí)間(A)、液料比(B)、提取溫度(C)為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)三因素三水平共17組響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)因素和水平設(shè)計(jì)見表1,實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

    表2 Box-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Design and results of Box-Behnken experiment

    2.3.2 回歸模型的建立及顯著性分析 以桑葉茯磚茶多糖得率為響應(yīng)值,對中心組合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸分析,獲得一個二次多項(xiàng)回歸方程:

    Y=-71.46543+9.44485A+1.01308B+2.60778C-0.071741AB-0.015790AC+1.10438×10-3BC-2.34874A2-0.029232B2-0.025601C2

    表3 回歸方程方差分析Table 3 Variance analysis of regression equation

    2.3.3 響應(yīng)面優(yōu)化分析 采用Design Expert 8.0.6軟件繪制得響應(yīng)面曲面圖和等高線圖,如圖6~圖8,分別表示提取時(shí)間(A)和液料比(B)、提取時(shí)間(A)和提取溫度(C)、液料比(B)和提取溫度(C)的交互作用的響應(yīng)曲面圖和等高線圖。

    圖6 提取時(shí)間和液料比對桑葉茯磚茶多糖得率影響的響應(yīng)面圖Fig.6 Response surface of effects of extraction time and liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    圖7 提取時(shí)間和提取溫度對桑葉茯磚茶多糖得率影響的響應(yīng)面圖Fig.7 Response surface of effects of extraction time and extraction temperature on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    圖8 提取溫度和液料比對桑葉茯磚茶多糖得率影響的響應(yīng)面圖Fig.8 Response surface of effects of extraction temperature and liquid-solid ratio on the polysaccharide extraction rate from mulberry leaves of fu brick tea

    由圖6a可知,提取時(shí)間和液料比對桑葉茯磚茶多糖得率的影響較顯著,當(dāng)液料比一定時(shí),多糖得率隨提取時(shí)間的延長而增加,但是當(dāng)時(shí)間延長到一定程度后繼續(xù)延長時(shí)間,多糖得率則開始下降。圖6b等高線圖表明,在液料比和提取時(shí)間兩個因素中,時(shí)間對多糖得率的影響較液料比大。圖7a和圖8a響應(yīng)面圖表明,提取溫度和提取時(shí)間以及提取溫度和液料比對桑葉茯磚茶多糖得率的影響均較顯著,當(dāng)提取溫度一定時(shí),多糖得率隨提取時(shí)間的延長先增大后減小,隨液料比的增大先增大后減小。圖7b等高線圖表明,當(dāng)液料比一定時(shí),等高線圖呈圓形,表明提取時(shí)間和溫度交互作用不顯著。圖8b等高線圖表明,在液料比和提取溫度兩個因素中,溫度對多糖得率的影響較液料比大。

    在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法對桑葉茯磚茶多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,經(jīng)模型預(yù)測,最佳提取條件為:提取時(shí)間1.59 h,液料比為16.34∶1 mL/g,提取溫度50.80 ℃,提取次數(shù)為1次,在此最佳工藝條件下,桑葉茯磚茶多糖得率為10.55%。考慮到實(shí)際操作可行性和方便性,對各個工藝參數(shù)稍作修改,即最佳工藝條件為:提取時(shí)間1.6 h,液料比16∶1 mL/g,提取溫度51 ℃,提取次數(shù)1次,平行進(jìn)行3次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn),桑葉茯磚茶多糖得率為10.43%(SD=0.1123),與預(yù)測值相對誤差為1.14%,表明該最佳條件參數(shù)準(zhǔn)確、可行。

    2.4 桑葉茯磚茶多糖體外抗氧化降血脂活性研究

    2.4.1 體外抗氧化活性評價(jià)

    2.4.1.1 DPPH自由基清除作用 從圖9可以看出,桑葉茯磚茶多糖對DPPH自由基具有較好的清除作用,其對DPPH自由基的清除效果隨濃度的增大而增大,當(dāng)桑葉茯磚茶多糖濃度大于56 μg/mL時(shí),繼續(xù)增大濃度,清除率增加緩慢。當(dāng)桑葉茯磚茶多糖濃度達(dá)到80 μg/mL時(shí),其對DPPH自由基的清除率達(dá)到84.35%。

    圖9 不同質(zhì)量濃度桑葉茯磚茶多糖對DPPH自由基清除作用Fig.9 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against DPPH free radicals

    2.4.1.2 ABTS+·清除作用 由圖10可以看出,桑葉茯磚茶多糖對ABTS+具有較好的清除作用,清除能力較VC弱。隨著桑葉茯磚茶多糖質(zhì)量濃度的增大,對ABTS+的清除率呈上升趨勢。當(dāng)質(zhì)量濃度大于70 μg/mL時(shí),繼續(xù)增大濃度,清除率增加緩慢,當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到130 μg/mL時(shí),其對ABTS+的清除率可達(dá)72.30%。

    圖10 不同質(zhì)量濃度桑葉茯磚茶多糖對ABTS+·清除作用Fig.10 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against ABTS+·

    2.4.1.3 對·OH的清除作用 由圖11可知,隨著桑葉茯磚茶多糖和VC質(zhì)量濃度的上升,對·OH的清除率呈上升趨勢,當(dāng)質(zhì)量濃度為0.875 mg/mL時(shí),桑葉茯磚茶多糖對·OH的清除率為56.10%,繼續(xù)增大濃度,清除能力增加緩慢。當(dāng)桑葉茯磚茶多糖濃度為1.75 mg/mL時(shí),對·OH的清除率為74.08%,此時(shí)清除能力達(dá)到最大值,繼續(xù)增大濃度,清除率不再增加。

    圖11 不同質(zhì)量濃度桑葉茯磚茶多糖對·OH自由基清除作用Fig.11 Scavenging activity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea at various concentrations against ·OH

    2.4.2 體外降血脂研究

    2.4.2.1 甘氨膽酸鹽和牛磺膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線 甘氨膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=3.4857x+0.0047,R2=0.9995,線性關(guān)系良好。

    牛磺膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=2.3696x+0.0051,R2=0.9992,線性關(guān)系良好。

    2.4.2.2 桑葉茯磚茶多糖對膽酸鹽的結(jié)合能力 研究表明,膽汁酸能夠促進(jìn)脂類水解和吸收,若膽汁酸被其他物質(zhì)結(jié)合,則膳食中脂肪的吸收和利用便會得到抑制,從而達(dá)到降低血脂的目的。此外,一些食品成分能與膽汁酸結(jié)合,加速體內(nèi)膽固醇的分解,有效降低人體血清和肝中膽固醇的含量。正常人膽汁酸中90%為結(jié)合型膽汁酸,在體內(nèi)一般以鈉鹽形式存在,本研究選取甘氨膽酸鈉和?;悄懰徕c為結(jié)合對象,模擬人胃和腸道的環(huán)境,考察桑葉茯磚茶多糖對二者的結(jié)合能力,從而評價(jià)其降血脂效果[15,20]。

    圖12 甘氨膽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.12 Standard curve of glycine sodium cholate

    圖13 ?;悄懰猁}標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.13 Standard curve of taurine sodium cholate

    從圖14可以看出,桑葉茯磚茶多糖和甘氨膽酸鹽、牛磺膽酸鹽的結(jié)合量均隨多糖濃度的增大而增大。當(dāng)多糖濃度達(dá)到2.5 mg/mL時(shí),桑葉茯磚茶多糖和?;悄懰猁}、甘氨膽酸鹽的結(jié)合率分別達(dá)到58.28%和39.95%,繼續(xù)增加濃度,結(jié)合率上升緩慢。當(dāng)濃度達(dá)到3.5 mg/mL時(shí),桑葉茯磚茶多糖和?;悄懰猁}、甘氨膽酸鹽的結(jié)合率分別達(dá)到59.96%和41.97%。桑葉茯磚茶多糖與牛磺膽酸鹽的結(jié)合量比甘氨膽酸鹽的結(jié)合量多,即桑葉茯磚茶多糖與?;悄懰猁}的結(jié)合能力更強(qiáng)。膽酸鹽結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,桑葉茯磚茶多糖降血脂作用較好。

    圖14 桑葉茯磚茶多糖對膽酸鹽結(jié)合能力Fig.14 The capacity of polysaccharide from mulberry leaves of fu brick tea to bind sodium cholate

    3 結(jié)論

    在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化了桑葉茯磚茶多糖的提取工藝,結(jié)果表明,最佳提取工藝為提取時(shí)間1.6 h,液料比16∶1 mL/g,提取溫度51 ℃,提取次數(shù)1次,在此最佳條件下,桑葉茯磚茶多糖得率為10.43%。體外抗氧化研究結(jié)果表明,桑葉茯磚茶多糖具有較好的抗氧化活性,其對DPPH自由基、ABTS+、·OH的清除能力隨多糖濃度的增大而增大,呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。膽酸鹽結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,桑葉茯磚茶多糖對甘氨膽酸鹽和?;悄懰猁}均有較強(qiáng)的結(jié)合能力,相較于甘氨膽酸鹽,桑葉茯磚茶多糖對牛磺膽酸鹽的結(jié)合能力較強(qiáng),說明桑葉茯磚茶多糖具有較好的降血脂作用。

    本文所用桑葉為霜桑葉,即初霜后采收干燥而得,此階段的桑葉藥用價(jià)值最高。采用茯磚茶加工工藝制作而成的桑葉茯磚茶具有普通茯磚茶金花普茂,菌香濃郁,開湯后湯色紅濃,滋味醇和,香氣純正等特征[10],其品質(zhì)較普通桑葉茶大大提高。桑葉茯磚茶多糖含量豐富,具有較好的抗氧化活性和降血脂等保健作用,長期飲用對身體有益。采用水提法對所用桑葉原料中的多糖進(jìn)行提取,得率為12.83%,較桑葉茯磚茶多糖含量高,這可能是由于茯磚茶發(fā)酵過程中,冠突散囊菌部分利用了其中所含的多糖[21]。冠突散囊菌是茯磚茶發(fā)酵過程中的優(yōu)勢菌,其生長繁殖能產(chǎn)生大量有益的次生代謝產(chǎn)物,因而冠突散囊菌的數(shù)量是評價(jià)茯磚品質(zhì)的重要指標(biāo)。后續(xù)研究過程中,應(yīng)進(jìn)一步探討桑葉茯磚茶發(fā)酵過程中多糖的含量變化與冠突散囊菌生長繁殖的相關(guān)性,從而調(diào)控冠突散囊菌的生長代謝過程,這對于指導(dǎo)桑葉茯磚茶的生產(chǎn)具有重要作用,可以在保證產(chǎn)品品質(zhì)的同時(shí),盡量減少多糖的損失,以最大程度發(fā)揮桑葉茯磚茶的保健功效。

    猜你喜歡
    磚茶膽酸液料
    高效液相色譜法測定復(fù)方胰酶片中膽酸和?;秦i去氧膽酸的含量
    新型多功能飲品復(fù)合調(diào)配分離瓶的研發(fā)
    科技視界(2018年22期)2018-10-08 01:41:38
    涇陽茯磚茶
    磚茶型氟鋁聯(lián)合應(yīng)用對大鼠牙齒和骨代謝生化指標(biāo)的影響
    血清甘膽酸測定在急性心肌梗死時(shí)對肝臟損傷的診斷價(jià)值
    痰熱清注射液中熊膽氧化成分的推測
    中成藥(2014年4期)2014-04-01 08:43:42
    茯磚茶中優(yōu)勢微生物在不同培養(yǎng)基的差異性比較
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:07
    熊去氧膽酸治療重度慢性乙型肝炎伴膽汁淤積的療效觀察
    陳年茯磚茶品質(zhì)分析
    茶葉通訊(2014年4期)2014-02-27 07:55:52
    混砂機(jī)液料流量的精確控制
    国产成人影院久久av| 国产精品久久久人人做人人爽| 此物有八面人人有两片| 日本黄大片高清| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲美女视频黄频| 国产精品久久久av美女十八| 日韩国内少妇激情av| 十八禁网站免费在线| 久久99热这里只有精品18| 国产毛片a区久久久久| 无人区码免费观看不卡| 99精品久久久久人妻精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美在线黄色| 精品国产美女av久久久久小说| 美女黄网站色视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产成人影院久久av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 99久久精品一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 狠狠狠狠99中文字幕| 夜夜夜夜夜久久久久| 成人精品一区二区免费| 男人舔女人的私密视频| a级毛片a级免费在线| 成年女人永久免费观看视频| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品一区二区免费欧美| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 88av欧美| 精品一区二区三区视频在线 | 亚洲电影在线观看av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 搡老妇女老女人老熟妇| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成人永久免费在线观看视频| 成人三级黄色视频| 欧美成人性av电影在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲黑人精品在线| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品国产高清国产av| 美女大奶头视频| 国产精品av久久久久免费| 午夜激情欧美在线| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美在线黄色| 岛国在线免费视频观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲激情在线av| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产一区在线观看成人免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 黄色视频,在线免费观看| 国产黄色小视频在线观看| www.www免费av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 91麻豆av在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 一级毛片高清免费大全| 亚洲国产精品合色在线| 999精品在线视频| 美女免费视频网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| а√天堂www在线а√下载| 亚洲人成电影免费在线| 欧美高清成人免费视频www| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 91麻豆av在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲熟妇熟女久久| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品野战在线观看| 在线视频色国产色| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品一区二区三区av网在线观看| 成人国产一区最新在线观看| or卡值多少钱| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 波多野结衣高清作品| 精品一区二区三区视频在线 | 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 啦啦啦免费观看视频1| 91av网站免费观看| 国产激情久久老熟女| 亚洲色图av天堂| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 麻豆av在线久日| 欧美大码av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产熟女xx| 日韩成人在线观看一区二区三区| 男女视频在线观看网站免费| 国产成人av激情在线播放| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久大精品| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 国产亚洲av嫩草精品影院| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲 国产 在线| 偷拍熟女少妇极品色| www国产在线视频色| 国产毛片a区久久久久| 久久久成人免费电影| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产激情欧美一区二区| 精品久久久久久,| 国产高清有码在线观看视频| 91老司机精品| 亚洲精品一区av在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产一区二区三区视频了| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲色图av天堂| 在线免费观看的www视频| 久9热在线精品视频| 午夜日韩欧美国产| 男人舔女人下体高潮全视频| 日韩高清综合在线| 亚洲午夜理论影院| 国产一区二区在线观看日韩 | 9191精品国产免费久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 成人国产一区最新在线观看| 99久久精品热视频| 极品教师在线免费播放| 久久性视频一级片| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美一级a爱片免费观看看| 激情在线观看视频在线高清| 国产男靠女视频免费网站| 天堂动漫精品| 免费观看人在逋| 精品欧美国产一区二区三| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 少妇的逼水好多| 国产午夜福利久久久久久| 一a级毛片在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久精品91无色码中文字幕| 国产激情久久老熟女| 国产乱人伦免费视频| 久久久国产欧美日韩av| 午夜免费激情av| 成人精品一区二区免费| 1024香蕉在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 小说图片视频综合网站| 综合色av麻豆| 一本精品99久久精品77| 久久人人精品亚洲av| 男女视频在线观看网站免费| 人妻久久中文字幕网| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 黄频高清免费视频| 两性夫妻黄色片| 欧美成人免费av一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 成人国产综合亚洲| 亚洲真实伦在线观看| 午夜福利免费观看在线| tocl精华| 91老司机精品| 久久精品91蜜桃| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲av第一区精品v没综合| aaaaa片日本免费| 国产精品野战在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 国产成年人精品一区二区| 久久久久九九精品影院| 高清在线国产一区| 麻豆成人av在线观看| 国产精品一及| 搡老岳熟女国产| 国产高潮美女av| 亚洲七黄色美女视频| 91老司机精品| 草草在线视频免费看| 99精品久久久久人妻精品| 日本熟妇午夜| a级毛片a级免费在线| 国产精品 欧美亚洲| 午夜福利高清视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 最近在线观看免费完整版| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| www.自偷自拍.com| 久久精品91无色码中文字幕| 中文字幕av在线有码专区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 岛国在线免费视频观看| 99热只有精品国产| 亚洲国产欧美人成| 成人av在线播放网站| 久久热在线av| 国产成+人综合+亚洲专区| 青草久久国产| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久热在线av| 国内精品久久久久精免费| av福利片在线观看| 亚洲最大成人中文| 国产男靠女视频免费网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| av女优亚洲男人天堂 | 国产成人系列免费观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线a可以看的网站| 亚洲国产看品久久| 国产成人精品久久二区二区91| 99热6这里只有精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 成人无遮挡网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 成人特级黄色片久久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 好男人在线观看高清免费视频| 国产视频内射| 国产淫片久久久久久久久 | 日本黄色视频三级网站网址| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产成人精品无人区| 国产97色在线日韩免费| 人人妻人人看人人澡| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 无人区码免费观看不卡| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产美女午夜福利| 一区二区三区国产精品乱码| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 美女大奶头视频| 男女视频在线观看网站免费| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美日韩黄片免| 一二三四社区在线视频社区8| 麻豆国产av国片精品| 亚洲午夜理论影院| 少妇丰满av| 俺也久久电影网| 黄色片一级片一级黄色片| 一级作爱视频免费观看| netflix在线观看网站| 日本 av在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 看片在线看免费视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩欧美在线二视频| 精品国产亚洲在线| 久久久久久大精品| 两人在一起打扑克的视频| 窝窝影院91人妻| 身体一侧抽搐| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 成人永久免费在线观看视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲无线观看免费| 美女午夜性视频免费| 麻豆av在线久日| 成人一区二区视频在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 黄频高清免费视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 动漫黄色视频在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 丰满的人妻完整版| 欧美日韩乱码在线| 校园春色视频在线观看| www日本在线高清视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 99riav亚洲国产免费| 国产探花在线观看一区二区| 好男人电影高清在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 色av中文字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲国产高清在线一区二区三| 九九热线精品视视频播放| 精品久久蜜臀av无| 日本黄色视频三级网站网址| 俺也久久电影网| 国产乱人伦免费视频| 51午夜福利影视在线观看| 看黄色毛片网站| 亚洲熟妇熟女久久| 一级毛片精品| 久久久久久国产a免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 三级国产精品欧美在线观看 | 91麻豆av在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| a在线观看视频网站| 久久精品国产综合久久久| 丰满人妻一区二区三区视频av | 一本一本综合久久| 超碰成人久久| 亚洲av美国av| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品在线美女| cao死你这个sao货| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品一及| 国产亚洲精品久久久com| 高清在线国产一区| 久久人人精品亚洲av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲自拍偷在线| 麻豆av在线久日| 一区二区三区国产精品乱码| 色综合亚洲欧美另类图片| e午夜精品久久久久久久| 亚洲国产高清在线一区二区三| 制服丝袜大香蕉在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 最好的美女福利视频网| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美乱色亚洲激情| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产精品久久电影中文字幕| 老汉色∧v一级毛片| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 99久久精品热视频| 午夜激情欧美在线| 欧美日韩精品网址| 极品教师在线免费播放| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 真人一进一出gif抽搐免费| 国语自产精品视频在线第100页| 日韩欧美免费精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品久久久久久精品电影| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲色图av天堂| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 日本a在线网址| 99热精品在线国产| 美女午夜性视频免费| 久9热在线精品视频| 91在线观看av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日韩高清综合在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品久久久人人做人人爽| 女警被强在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 哪里可以看免费的av片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久九九精品影院| 免费观看精品视频网站| 国产av麻豆久久久久久久| 婷婷精品国产亚洲av在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 欧美乱妇无乱码| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲片人在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| www.www免费av| 真人做人爱边吃奶动态| 精品国产三级普通话版| 女警被强在线播放| 麻豆成人av在线观看| 黄频高清免费视频| 日日夜夜操网爽| 久久久成人免费电影| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲美女黄片视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 免费观看精品视频网站| a级毛片a级免费在线| 亚洲无线观看免费| 91久久精品国产一区二区成人 | 日韩免费av在线播放| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美又色又爽又黄视频| 无人区码免费观看不卡| 日韩欧美 国产精品| 午夜福利视频1000在线观看| 悠悠久久av| bbb黄色大片| 国产精品影院久久| 国产单亲对白刺激| 他把我摸到了高潮在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品一及| 亚洲在线观看片| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美乱码精品一区二区三区| 我要搜黄色片| 欧美三级亚洲精品| 99热这里只有是精品50| 免费av毛片视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 91麻豆精品激情在线观看国产| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩欧美三级三区| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品国产美女av久久久久小说| 无人区码免费观看不卡| 日韩有码中文字幕| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久中文看片网| 成人性生交大片免费视频hd| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 日韩欧美免费精品| 国产精品野战在线观看| 免费高清视频大片| 在线播放国产精品三级| 久久这里只有精品中国| 人妻久久中文字幕网| 搡老岳熟女国产| 男插女下体视频免费在线播放| 精品福利观看| 一夜夜www| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久水蜜桃国产精品网| 日本一本二区三区精品| 国产成人系列免费观看| 久久久久性生活片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 香蕉国产在线看| 国产精品久久久久久久电影 | 黄色成人免费大全| 在线观看美女被高潮喷水网站 | ponron亚洲| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 91在线精品国自产拍蜜月 | 日本黄大片高清| 亚洲,欧美精品.| 夜夜夜夜夜久久久久| 熟女电影av网| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 精品电影一区二区在线| 免费搜索国产男女视频| 成人18禁在线播放| 成年版毛片免费区| 国产一区二区在线av高清观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老汉色∧v一级毛片| 91久久精品国产一区二区成人 | 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产高清三级在线| 18禁观看日本| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产精品九九99| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美一级a爱片免费观看看| 色在线成人网| 男人和女人高潮做爰伦理| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 免费av不卡在线播放| 俺也久久电影网| 网址你懂的国产日韩在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 一本综合久久免费| 国产成人福利小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲成人中文字幕在线播放| 又爽又黄无遮挡网站| 久久人人精品亚洲av| 午夜激情福利司机影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久午夜亚洲精品久久| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产精品一区二区精品视频观看| 在线观看午夜福利视频| 国产乱人视频| 国产精品久久电影中文字幕| 19禁男女啪啪无遮挡网站| www日本在线高清视频| 成年人黄色毛片网站| www.自偷自拍.com| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 好男人在线观看高清免费视频| 日韩欧美精品v在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲九九香蕉| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美3d第一页| 日本精品一区二区三区蜜桃| 特级一级黄色大片| 99riav亚洲国产免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 在线免费观看的www视频| 日本一本二区三区精品| 亚洲熟妇熟女久久| 在线国产一区二区在线| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产综合久久久| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精华国产精华精| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久国产成人免费| 男人舔奶头视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产亚洲欧美98| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品 欧美亚洲| 天堂动漫精品| 脱女人内裤的视频| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲无线观看免费| 免费搜索国产男女视频| 99视频精品全部免费 在线 | 搡老熟女国产l中国老女人| 91av网站免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产黄片美女视频| 久久久久国内视频| 亚洲精品在线美女| av女优亚洲男人天堂 | 高清毛片免费观看视频网站| 国产一级毛片七仙女欲春2| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美激情在线99| 少妇熟女aⅴ在线视频| 丁香欧美五月| 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 天堂网av新在线| av在线天堂中文字幕| 欧美最黄视频在线播放免费| 听说在线观看完整版免费高清| 国产欧美日韩精品一区二区| 偷拍熟女少妇极品色| 国产成+人综合+亚洲专区| 91av网站免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中国美女看黄片| 两个人的视频大全免费| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产男靠女视频免费网站| 久久久国产成人精品二区| avwww免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久中文看片网| 丁香六月欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲,欧美精品.| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品久久久久久,| 国产激情久久老熟女| АⅤ资源中文在线天堂| 人人妻人人看人人澡| 国产成人福利小说| 无限看片的www在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 日本黄大片高清| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| avwww免费| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 91av网站免费观看| 无限看片的www在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 |