基于氣相色譜法的帕瑞昔布鈉中殘留溶劑測定

聶忠莉， 毛玉萍， 王曉玲， 蕭茂玲， 張 勇， 黃金玉， 郭 瑞

(1.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 四川 成都 610106； 2.成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司， 四川 成都 610041)

0 引 言

帕瑞昔布鈉，是伐地昔布的水溶性前體，其存在形式為鈉鹽，主要用于手術(shù)后疼痛的短期治療以及中度或重度術(shù)后急性疼痛的治療.帕瑞昔布鈉作為第一代可肌注和靜脈注射使用的選擇性COX-2抑制劑，于2008年在我國上市.臨床試驗表明，其對手術(shù)術(shù)后的恢復(fù)效果較佳，且副反應(yīng)較小，有利于需要經(jīng)非胃腸給藥的手術(shù)患者的恢復(fù)[1-2].

通過對帕瑞昔布鈉的合成工藝以及相關(guān)合成文獻[3-4]和專利[5]分析發(fā)現(xiàn)，其在合成及精制的過程中使用的有機溶劑包括乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶.根據(jù)各溶劑性質(zhì)和沸點的不同，本研究通過參考帕瑞昔布鈉的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)以及《中國藥典》2015年版四部中氣相色譜法操作、殘留溶劑測定法和藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則，建立了帕瑞昔布鈉殘留溶劑的氣相色譜測定方法，并對其進行了方法學(xué)驗證.

1 材料與儀器

1.1 材 料

實驗所用材料包括：帕瑞昔布鈉(批號，20171201、20171202、20171203)，購自成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司；N，N-二甲基甲酰胺(批號，141171101，HPLC級)、正己烷(批號，121171202，HPLC級)，購自上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?；無水乙醇(批號，2015051401，HPLC級)、二氯甲烷(批號，2017091901，HPLC級)，購自成都科龍化工試劑廠；乙酸乙酯(批號，20150128，HPLC級)、三乙胺(批號，20170925，HPLC級)，購自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；4-二甲氨基吡啶(批號，20171113-2629，HPLC級)，購自上海易勢化工有限公司.

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：Agilent 7890A氣相色譜儀(美國Agilent公司)，BP-210D型電子天平(德國Sartorius公司)等.

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 供試品溶液.

取本品約100 mg，精密稱定，置頂空瓶中，加入N,N-二甲基甲酰胺1.0 mL，溶解，搖勻，作為供試品溶液.

2.1.2 對照品溶液.

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶適量，分別加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋，制成每1 mL約含0.55 mg的乙醇、0.029 mg的正己烷、0.06 mg的二氯甲烷、0.5 mg的乙酸乙酯、0.032 mg的三乙胺、0.5mg的4-二甲氨基吡啶溶液，作為對照品溶液.

2.2 色譜條件的選擇

由于三乙胺具有較強的堿性，且4-二甲氨基吡啶沸點(211 ℃)較高，不宜與其他溶劑一起采用氣相色譜法進行檢測，因此將三乙胺和4-二甲氨基吡啶分別單獨進行質(zhì)量控制研究. 由預(yù)實驗結(jié)果可知(見表1)，在色譜條件3下，乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯的分離度更好，故選取色譜條件3來檢測本品中的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯.另外，在不同柱溫下三乙胺的保留時間變化不大，但隨溫度的升高，理論塔板數(shù)不斷增加，當(dāng)柱溫為210 ℃其理論塔板數(shù)達到100 000以上，拖尾因子為1.016，且空白無干擾，故選取色譜條件6作為本品三乙胺的檢查條件.雖然色譜條件7和色譜條件8峰型均較好，但后者的出峰時間比前者提前了將近5 min，且空白均無干擾，故選取色譜條件8作為本品4-二甲氨基吡啶的檢查條件.

表1帕瑞昔布鈉殘留溶劑分析方法色譜條件比較

2.3 系統(tǒng)適用性

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯對照品溶液各0.25 mL，置于頂空瓶中，作為乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯的混合溶液.在色譜條件3下，分別取對照品乙醇溶液、正己烷溶液、二氯甲烷溶液、乙酸乙酯溶液和混合溶液頂空進樣，另取空白溶劑同法進樣，記錄色譜圖(見圖1、2).結(jié)果顯示，乙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯依次出峰，且色譜峰之間均能完全分離、空白溶劑對測定無干擾.

圖1乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯系統(tǒng)適用性色譜圖

圖2 N,N-二甲基甲酰胺空白色譜圖

2.4 檢測限

取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶各適量，分別加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，頂空進樣，記錄色譜圖，以信噪比為3時(S/N=3)的濃度作為最低檢測限濃度，以信噪比為10時(S/N=10)的濃度作為定量檢測限濃度，結(jié)果見表2.

表2 帕瑞昔布鈉殘留溶劑檢測限、定量限實驗

2.5 線性與范圍

分別精密量取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶適量，加入N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋成適宜的濃度，分別作為線性溶液1、2、3、4、5、6.分別精密量取上述供試品溶液各1 mL，置頂空進樣瓶中，密封，頂空進樣，記錄色譜圖，以各溶劑濃度對峰面積進行線性回歸并計算相關(guān)系數(shù).結(jié)果表明：在0.00965～6.372 mg/mL范圍內(nèi)，乙醇(Y=101.27X+2.5014，R2=0.9997)、正己烷(Y=2647.6X+1.896，R2=0.9997)、二氯甲烷(Y=80.325X+0.5648，R2=0.9998)、乙酸乙酯(Y=207.53X+10.242，R2=0.9995)、三乙胺(Y=363.18X+2.4124，R2=0.9994)、4-二甲氨基吡啶(Y=1045.9X-35.25，R2=0.9994)的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系.

2.6 重復(fù)性

取帕瑞昔布鈉約1.0 g，分別取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液10 mL使其溶解，搖勻后，分別精密量取1 mL 6份，分別置頂空進樣瓶中，密封，頂空進樣，記錄色譜圖，計算出無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶結(jié)果的RSD分別為0.78%、1.97%、1.15%、0.41%、2.27%、1.35%.結(jié)果表明，方法的重復(fù)性良好.

2.7 穩(wěn)定性

取帕瑞昔布鈉約1.0 g，分別取無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液10 mL使其溶解，搖勻后，分別精密量取1 mL 5份，分別置頂空進樣瓶中，密封，分別在0、2、4、6、8 h頂空進樣，記錄色譜圖，計算樣品中乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶殘留量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(見表3).結(jié)果表明，溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

表3 帕瑞昔布鈉殘留溶劑穩(wěn)定性實驗(n=6)

2.8 回收率

取帕瑞昔布鈉(批號，20171201)各約0.1 g(共11份)，精密稱定，分別置頂空進樣瓶中，分別精密加入無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶的80%對照品溶液、100%對照品溶液、120%對照品溶液1.0 mL各3份，使樣品溶解，分別作為80%、100%、120%的供試品溶液；剩余2份加入1.0 mL空白溶劑使溶解，作為供試樣品溶液.分別取對照品溶液、供試品溶液、供試樣品溶液頂空進樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶測得量及回收率(見表4).結(jié)果表明，殘留溶劑回收率滿足要求.

表4 帕瑞昔布鈉殘留溶劑平均回收率

2.9 耐用性

取帕瑞昔布鈉(批號，20171201)約0.1 g，精密稱定，置量瓶中，分別加入1.0 mL無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶對照品溶液使溶解，搖勻，作為供試樣品溶液.分別取上述對照品溶液、供試品溶液1 μL進樣，微小改變色譜條件，測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三乙胺、4-二甲氨基吡啶含量(見表5).結(jié)果表明，方法的耐用性良好.

表5 帕瑞昔布鈉殘留溶劑耐用性實驗

2.10 無水乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯檢測

分別取3批帕瑞昔布鈉按“2.1.1"項下方法制得供試品溶液，按“2.1.2"項下方法制得對照品溶液，精密量取供試品溶液與對照品溶液，分別以相應(yīng)的條件頂空進樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算各溶劑殘留量.結(jié)果顯示，批號20171201和20171202中的乙醇含量為0.16%，批號20171203中的乙醇含量為0.18%，其他有關(guān)物質(zhì)在3批試樣中均未檢出.

3 討論與結(jié)論

本研究采用氣相色譜法對相關(guān)溶劑進行測定.因本品需要檢測的有機溶劑的極性應(yīng)與色譜柱的極性相似，所以采用中極性的6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷和交聯(lián)聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱為色譜柱，用FID檢測器，選擇以N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，采用頂空法進行檢測[6].本品中所使用的有機溶劑多為揮發(fā)性的物質(zhì)，頂空進樣的方式與直接進樣的方式相比，可以減少色譜系統(tǒng)的污染.三乙胺屬于強堿性溶劑，不易與其他溶劑同時進行檢測，但仍采用相同的方法和條件.而4-二甲氨基吡啶較為特殊，其沸點較其他5種溶劑沸點更高，極性較大，所以單獨采用交聯(lián)聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱作為色譜柱，采用直接進樣的方式進行檢測[7-8].

在帕瑞昔布合成及精制的過程中用到的溶劑有乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、4-二甲氨基吡啶、三乙胺，三乙胺的堿性很強，4-二甲氨基吡啶的沸點較高，所以在進行方法學(xué)驗證的時候需要分開測定，才能對其準(zhǔn)確地判斷.乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷的物理化學(xué)性質(zhì)較為相似，因此，可把這4種溶劑放在一起測定.在采用氣相色譜法測定時，首先先確定進樣條件，選擇最佳條件，采用頂空進樣法；三乙胺的堿性很強，所以對三乙胺單獨驗證，條件與前面的條件基本相似，依然采用頂空進樣；4-二甲氨基吡啶的沸點過高，所以采用直接進樣法；最終確保了每一種溶劑的方法都是最合適的.實驗結(jié)果顯示，各檢測項目均符合檢測要求，殘留量測定結(jié)果均符合藥典中對于殘留溶劑的規(guī)定.本方法操作簡便、準(zhǔn)確度高、分離效果好、靈敏度高、分析速度快，適合用于帕瑞昔布鈉中殘留溶劑的質(zhì)量控制，進而確保帕瑞昔布鈉產(chǎn)品的質(zhì)量.