正常認(rèn)知功能老年人群載脂蛋白E基因多態(tài)性分布特征分析

王景濤 李 凌 袁 晶

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450052 2)北京協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)科，北京 100760

許多研究已經(jīng)證實(shí)，載脂蛋白E(apolipoprotien E，ApoE)基因多態(tài)性與人類多種疾病，如冠心病(coronary heart disease，CHD)、高脂血癥、缺血性腦血管病、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)等有密切的關(guān)系[1-2]。研究顯示，ApoE ε4等位基因顯著增加了AD患病風(fēng)險(xiǎn)[3]，同時(shí)也降低了遲發(fā)性AD的發(fā)病年齡[4]。薈萃分析顯示，ApoE ε4等位基因也與血管性癡呆密切相關(guān)，增加了其患病風(fēng)險(xiǎn)[5]。以上提示該基因在人體正常代謝和疾病狀態(tài)下?lián)?fù)著重要使命。國外研究顯示，不同人群和種族該基因的分布存在較大差異。本研究選取一個(gè)正常認(rèn)知功能老人群，以探討我國正常認(rèn)知功能老人群中ApoE基因的分布特征。

1 對象與方法

1.1樣本樣本來源于1921—1941年、1948—1954年在北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科病房出生的人群[6]。從中選取認(rèn)知功能正常的、資料齊全的500例作為樣本。

所有研究對象在認(rèn)知障礙門診須完成詳細(xì)的臨床資料評(píng)估和認(rèn)知功能測評(píng)，完成頭顱CT或頭顱海馬像檢查。臨床資料包括癡呆患者的人口學(xué)資料(包括姓名、性別、年齡、民族、出生地、目前居住地、教育程度和年限、職業(yè)等一般情況)、現(xiàn)病史、既往史、吸煙飲酒史、家族史，系統(tǒng)體格檢查和神經(jīng)系統(tǒng)?？茩z查。認(rèn)知功能測試量表包括簡易精神狀態(tài)評(píng)分(MMSE)、物體記憶測驗(yàn)(FOM)、語言流暢性測驗(yàn)(RVR)，WISC積木測驗(yàn)、WAIS數(shù)字廣度測驗(yàn)、Hachinski缺血量表(Hachinski Ischemic Score，HIS)評(píng)分、漢密爾頓抑郁量表評(píng)分、日常生活能力量表(ADL)等。

1.2 DNA提取抽取研究對象晨空腹血4～5 mL，加入EDTA抗凝管內(nèi)，應(yīng)用飽和鹽沉淀-氯仿抽提法提取DNA，并應(yīng)用分光光度計(jì)測定DNA濃度。

1.3 ApoE基因型測定應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法測定ApoE基因型。本課題所用試劑和儀器的廠家、測定詳細(xì)步驟和ApoE的電泳圖見課題組相關(guān)論文[7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料采取均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，等位基因頻率和基因型頻率采用基因計(jì)數(shù)法，應(yīng)用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)探討ApoE基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡。不同地區(qū)ApoE基因頻率比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1一般情況500例研究對象，男256例(51.2%)，年齡(66.5±6.3)歲，其中<60歲75例(15%)，60～69歲254例(50.8%)，≥70歲171例(34.2%)；受教育程度<7 a 17例(3.4%)，7～12 a 140例(28.0%)，>12 a 343例(68.6%)；有癡呆家族史38例(7.6%)。認(rèn)知功能：MMSE評(píng)分(26.2±3.4)分，MoCA評(píng)分 (23.5±3.8)分。

2.2 ApoE基因分布ε2、ε3、ε4等位基因頻率分別為7.20%、86.00%、6.80%；基因型頻率分別為ε2/2(0.80%)、ε2/3(12.20%)、ε2/4(0.60%)、ε3/3(73.60%)、ε3/4(12.60%)、ε4/4(0.20%)。χ2檢驗(yàn)顯示其基因分布符合Hardy-Weinberg平衡。

表1顯示，挪威、澳大利亞、智利和英國人群ε3頻率低于比本研究(分別為χ2=44.71、10.49、28.30、10.388，P<0.05)，ε4頻率高于本研究(分別為χ2=32.10、22.44、46.12、10.403，P<0.05)。伊朗和日本人群ε3頻率與本研究差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=2.74、1.26，P>0.05)，ε4頻率差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為χ2=0.118、3.174，P>0.05)。

表1 不同國家和地區(qū)正常老年人ApoE基因分布比較

注：與本研究相比，*P<0.05；與本研究比較，#P>0.05

3 討論

多個(gè)研究顯示，不同種族的ApoE基因型分布不同。高加索人群的ApoE等位基因和基因表型分布基本一致，而芬蘭人群較高的ε4頻率是顯著例外[8]。冰島人群的ε4頻率也較其他高加索人群略高[9]。來自挪威和荷蘭人群的研究顯示，其ε4頻率也低于芬蘭[10]?？偟膩碚f，亞洲人群ε4頻率較歐洲低[11-26]。北歐的ε4頻率高于南歐，而亞洲則未觀察到南北方的這種ε4頻率變化趨勢[27-45]。

本研究顯示，500例認(rèn)知功能正常的老年人群中，ε2、ε3、ε4等位基因頻率、基因型頻率與此前報(bào)道的北京老年人群的等位基因頻率無顯著差異。挪威、澳大利亞、英國、智利等[11-13]國家的正常老年人群ε3頻率在74.0%～78.0%，顯著低于本研究；而其ε4頻率在14.0%～19.0%，則顯著高于本研究。日本[14]和伊朗[15]正常老年人ε3 頻率在80.8%～91.2%，ε4頻率在6.1%～12.9%，與本研究差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示挪威、英國、智利、澳大利亞等歐美大洋洲國家正常老年人群的ε4等位基因頻率明顯高于我國漢族老年人群，而日本、伊朗和等亞洲國家正常老年人群ε3、ε4等位基因頻率則無顯著差異。

就全球水平而言，非洲和大洋洲的ε2等位基因頻率較高(分別為0.099±0.083 和 0.111±0.052)；同樣，大洋洲和非洲的ε4等位基因均數(shù)也較高(分別為0.221±0.149和0.221±0.149)，而印度和亞洲人群則顯示了最高的ε3等位基因頻率。盡管大洋洲和非洲的基因多樣性最高(分別為48.7%、46.3%)，但南美洲的基因變異系數(shù)最高(9.6%)。就人種而言，黑皮膚人群ε4等位基因明顯高于含黑色素少的人群；高度半島化地區(qū)，如地中海、東亞和中北美洲南部等地的輕中度膚色人群的ε4頻率最低(5%～10%)[16]。有研究顯示，南部伊朗健康人群中ε3和ε4頻率分別為0.886、0.051，其ε4頻率是世界最低的[17，46-52]。

本研究再次證實(shí)不同種族之間ApoE基因分布存在較大差異，亞洲人群ε4頻率低于歐美人群，ε3頻率則高于歐美人群。