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    新兵HIV抗體篩查酶聯(lián)免疫法和金標(biāo)法的比較

    2018-09-22 08:21:00李鵬宇
    武警醫(yī)學(xué) 2018年9期
    關(guān)鍵詞:初篩新兵試劑

    李鵬宇,采 云,郗 科

    艾滋病(AIDS),又稱獲得性免疫缺陷綜合征,主要是由艾滋病病毒(HIV)攻擊人體免疫系統(tǒng)而引起的[1]。近年來,我國(guó)艾滋病流行趨勢(shì)正處于上升階段,對(duì)部隊(duì)選取健康兵員,保證戰(zhàn)斗力提出了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。為此部隊(duì)投入了大量的人力物力來對(duì)新兵進(jìn)行健康復(fù)檢工作,艾滋病的篩查就是其中非常重要的一項(xiàng)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)室診斷HIV感染的常規(guī)手段是檢測(cè)HIV抗體,以往經(jīng)典的檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫法,隨著技術(shù)的發(fā)展,金標(biāo)法也逐漸被醫(yī)院和體檢中心等機(jī)構(gòu)應(yīng)用于HIV抗體篩查工作中。筆者對(duì)兩種方法檢測(cè)HIV抗體的結(jié)果進(jìn)行比較分析,以為新兵復(fù)檢工作提供可靠的檢驗(yàn)方法。

    1 臨床資料

    1.1 一般資料 選擇武警某部2017年度新兵共9325例為檢測(cè)者,其中男9275例,女50例,年齡18~21歲,平均為18.9歲,檢測(cè)時(shí)間為2017年9—10月。收集檢測(cè)者3~5 ml靜脈血樣本,離心分離出血清備用。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器與試劑 選用北京金豪公司的ELISA-雙抗原夾心法試劑,儀器為 Anthos2010型酶標(biāo)儀,全自動(dòng)洗板機(jī),進(jìn)口10~200 μl規(guī)格的微量移液器,37 ℃水浴恒溫箱。金標(biāo)法采用廈門英科新創(chuàng)公司的HIV抗體膠體金免疫層析快速診斷試劑。

    1.2.2 檢測(cè)方法 (1)酶聯(lián)免疫法:嚴(yán)格按照試劑盒中的操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè),使用酶標(biāo)儀對(duì)樣品的吸光度(A)值進(jìn)行測(cè)量,并和所用試劑的臨界值(CUT OFF)進(jìn)行對(duì)比,使用比較得出的S/CO值對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷,所測(cè)定的A 值高于CO值則判斷為陽性[2]。陽性標(biāo)本排除溶血、血清分離不完全等干擾因素,單獨(dú)進(jìn)行復(fù)測(cè),并采用手工洗板,判定標(biāo)準(zhǔn)不變。(2)金標(biāo)法嚴(yán)格按照說明書來進(jìn)行檢測(cè)和判斷結(jié)果,初篩陽性結(jié)果同樣排除干擾因素進(jìn)行復(fù)測(cè),標(biāo)本不合格的重新抽血進(jìn)行檢測(cè)。用兩種方法分別對(duì)9325份標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),測(cè)試人員有操作經(jīng)驗(yàn)并相對(duì)固定,試劑批號(hào)為同一批號(hào)。兩種方法復(fù)測(cè)后的陽性標(biāo)本送上級(jí)確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    1.4 結(jié)果 酶聯(lián)免疫法初篩首次陽性標(biāo)本為18例,出現(xiàn)假陽性原因分別為洗板機(jī)清洗不徹底8例,嚴(yán)重溶血5例,血清分離不完全2例。初篩陽性標(biāo)本排除干擾因素(重新抽血、離心徹底、手工洗板)在使用相同試劑的情況下進(jìn)行復(fù)檢,初篩陽性率0.032%;金標(biāo)法首次初篩檢測(cè)出陽性標(biāo)本10例,初篩陽性率0.096%。兩種方法的篩查陽性率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由表1可以看出,酶聯(lián)免疫法的初篩陽性率較高,排除干擾后假陽性率為0.021%(2/9325),金標(biāo)法假陽性率為0.086%(8/9325),兩種方法對(duì)比,酶聯(lián)免疫法假陽性率較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 9325例新兵酶聯(lián)免疫法和金標(biāo)法HIV抗體篩查結(jié)果 (n; %)

    注:與金標(biāo)法相比,①P<0.05

    2 討 論

    新兵是一個(gè)特殊的群體,具有年輕,身體健康狀況普遍良好的特點(diǎn),因此新兵的HIV抗體篩查既要保證檢測(cè)質(zhì)量、避免漏檢,又要減少經(jīng)濟(jì)消耗,選擇高效、高質(zhì)量的篩查手段尤為關(guān)鍵。

    金標(biāo)法在進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)時(shí),具有敏感性高、快捷、方便等優(yōu)點(diǎn),不需要特殊的儀器設(shè)備,所以衛(wèi)生隊(duì)(所)的衛(wèi)生員經(jīng)簡(jiǎn)單培訓(xùn)就能熟練掌握,適用于平時(shí)小批量的標(biāo)本或遠(yuǎn)離體系醫(yī)院的偏遠(yuǎn)地區(qū)使用。不過金標(biāo)法也具有特異性低、假陽性率高等缺點(diǎn)[3]。新兵入伍集訓(xùn)人員較集中,檢測(cè)量較大,這就對(duì)檢測(cè)方法的特異性和經(jīng)濟(jì)性提出較高的要求,因此金標(biāo)法不太適用于新兵的HIV抗體集中篩查。

    酶聯(lián)免疫法的特異性及敏感性都相對(duì)金標(biāo)法要高,且試劑成本低,可以批量操作,通量較大,因此是新兵HIV抗體篩查的首選方法。本實(shí)驗(yàn)中我們選用的ELISA試劑為HIV三代試劑盒,主要檢測(cè)HIV(1+2)抗體。近年來,隨著HIV檢測(cè)技術(shù)的提高,ELISA方法的HIV四代試劑正逐漸取代HIV三代試劑,它能在同一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)HIV(1+2)抗體與P24抗原[4]。HIV感染機(jī)體后,自身各種抗原隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而先后出現(xiàn),其中P24抗原為早期感染的檢測(cè)指標(biāo)。P24抗原是HIV的核心蛋白,主要特點(diǎn)在于急性感染的開始階段其滴度相當(dāng)高,而且其出現(xiàn)早于特異性抗體[5]。比較第三代試劑,第四代試劑可以大大縮短窗口期,檢測(cè)時(shí)間提前了8~10 d。P24抗原檢測(cè)用于HIV感染的早期檢測(cè)和HIV新近感染的檢測(cè)都具有積極的意義[6,7]。酶聯(lián)免疫法也存在局限性,比如操作相對(duì)復(fù)雜,干擾因素多,需要各種儀器設(shè)備,且要求操作人員具有一定的專業(yè)技能等[8]。

    針對(duì)上述問題,我們總結(jié)出幾點(diǎn)處理措施:(1)制訂完整的操作規(guī)范,認(rèn)真對(duì)待工作中的每一個(gè)細(xì)節(jié),保證高效率地完成檢測(cè)工作;(2)選擇靈敏度高、特異性好的三代乃至四代試劑,從而避免由于檢測(cè)中所用試劑的原因造成假陽性結(jié)果和窗口期漏檢的發(fā)生;(3)先期對(duì)工作人員進(jìn)行培訓(xùn),以保證采集血液樣本的合格率,標(biāo)本處理流程的科學(xué)性,完善試驗(yàn)條件的同一性,最大限度地提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率、減少假陽性率。

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