海南本地油茶組培體系的建立

賈效成 陳良秋 劉小玉

摘要 以海南本地油茶優(yōu)良品種熱研2號的嫩芽為外植體，開展了油茶組培體系建立的研究。結(jié)果表明，促進(jìn)愈傷組織分化形成的最優(yōu)條件是以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+Silwet L-77 0.05%；促進(jìn)發(fā)芽及生根的最優(yōu)條件是以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.8 mg/L+蔗糖3%。

關(guān)鍵詞 油茶；組培體系；海南省

中圖分類號 S794.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）12-0001-01

油茶是山茶屬（Camellia）植物中種子含油率較高樹種的統(tǒng)稱，是我國特有的木本油料樹種，油茶與油橄欖、油棕、椰子并稱為世界四大木本油料作物[1-2]。海南將本地的油茶果稱為“山柚”，其茶籽油稱為“山柚油”，山柚油具有廣泛的用途與神奇的功效，被海南人民視為珍品[3]。同時，油茶林是良好的生態(tài)林，油茶也是農(nóng)林業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整、精準(zhǔn)扶貧的重要經(jīng)濟(jì)作物，發(fā)展海南油茶產(chǎn)業(yè)具有很高的經(jīng)濟(jì)效益、社會效益和生態(tài)效益。大陸省份，油茶栽培最多的物種是普通油茶（Camellia oleifera Abel），海南種植的主要是越南油茶（Camellia vietnamensis T. C. Huang ex Hu）。越南油茶主要分布在海南省、廣東南部以及越南、老撾等地，也稱為陸川油茶，民間俗稱高州油茶、大果油茶、白花油茶。

海南油茶雖然種植歷史悠久，但在品種選育、良種繁育、豐產(chǎn)栽培和加工利用等方面的研究起步較晚，組織培養(yǎng)對油茶優(yōu)良種質(zhì)資源快速繁育和保存、生物技術(shù)育種等方面有著深遠(yuǎn)而重大的意義，對油茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展影響巨大。前人對普通油茶的組織培養(yǎng)進(jìn)行了大量研究[4-5]，以生長在海南的越南油茶為研究材料的很少。本文以熱研2號油茶優(yōu)良無性系為材料，開展了越南油茶促愈傷組織分化和促進(jìn)發(fā)芽生根組培體系的研究[6]，為海南本地油茶優(yōu)良單株再生體系的建立奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料來自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院油茶研究中心油茶種質(zhì)資源圃（海南文昌），為油茶優(yōu)良無性系熱研2號（良種編號：瓊R-SC-CO-005-2017）優(yōu)樹。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體處理。于2017年4月，采集長10～25 cm的油茶枝條帶回實驗室，取長1.0～2.0 cm的頂芽或腋芽，置于流水下沖洗1 h備用。

1.2.2 外植體接種。將沖洗后的外植體置于無菌超凈臺上，先用75%酒精快速滅菌10 s，然后用無菌水沖洗3次，接著用0.1% HgCl2消毒2 min，用無菌水沖洗3次，再用0.1% HgCl2消毒3 min，最后用無菌水沖洗5次后接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。誘導(dǎo)發(fā)芽發(fā)根時，在無菌條件下將誘導(dǎo)出的愈傷組織進(jìn)行轉(zhuǎn)接。

1.2.3 培養(yǎng)條件。培養(yǎng)基中瓊脂為7 g/L。培養(yǎng)基用1 mol/L NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH值為5.5～6.5，在恒溫120 ℃和恒壓1.1個大氣壓下消毒滅菌20 min。培養(yǎng)室溫度（25±3）℃，光照時間12 h/d，光照強(qiáng)度2 000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對油茶愈傷組織誘導(dǎo)成功率的影響

從表1可以看出，就不同基本培養(yǎng)基類型的誘導(dǎo)成功相比較，WPM基本培養(yǎng)基不同配方的愈傷誘導(dǎo)成功率平均值為96.74%，而MS基本培養(yǎng)基不同配方的愈傷誘導(dǎo)成功率平均值僅為77.11%；從誘導(dǎo)效果看，WPM基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)的愈傷組織數(shù)量多，增殖系數(shù)大（圖1a、b）。綜合比較各配方因子的具體誘導(dǎo)效果，其最優(yōu)的促進(jìn)愈傷分化的培養(yǎng)基配方為以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+Silwet L-77 0.05%。

2.2 不同培養(yǎng)基對油茶發(fā)芽生根誘導(dǎo)成功率的影響

從表2可以看出，就不同基本培養(yǎng)基類型的誘導(dǎo)成功相比較，WPM基本培養(yǎng)基不同配方的發(fā)芽生根誘導(dǎo)成功率平均值為90.05%，而MS基本培養(yǎng)基不同配方的發(fā)芽生根誘導(dǎo)成功率平均值僅為56.32%；從誘導(dǎo)效果看，WPM基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)的無菌苗芽多，植株生長健壯（圖1c、d）。綜合比較各配方因子的具體誘導(dǎo)效果，其最優(yōu)的促進(jìn)發(fā)芽生根的培養(yǎng)基配方為以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.8mg/L+蔗糖3%。

3 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，對于海南本地油茶優(yōu)良品種熱研2號而言，促進(jìn)愈傷組織分化形成的最優(yōu)條件是以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+Silwet L-77 0.05%；促進(jìn)其發(fā)芽及生根的最優(yōu)條件是以WPM為基本培養(yǎng)基，其他因子組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.8 mg/L+蔗糖3%。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 李振紀(jì).油茶[M].北京：中國林業(yè)出版社，1981.

[2] 莊瑞林.中國油茶[M].第2版.北京：中國林業(yè)出版社，2008.

[3] 陳良秋，楊偉波，李艷，等.海南島油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷程及展望[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012（1）：374.

[4] 王瑞，陳永忠，王湘南，等.油茶組培苗高效增殖體系的建立[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2015，35（10）：40-43.

[5] 唐國濤，張漢永，黃錦榮，等.油茶組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)初步研究[J].廣東林業(yè)科技，2014，30（3）：25-29.

[6] 吳幼媚，王以紅，蔡玲，等.油茶單芽組培生根研究[J].西部林業(yè)科學(xué)，2012，41（4）：25-28.