當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑提取工藝研究

彭永政

【摘 要】 目的：優(yōu)選當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑的提取工藝。方法：以馬錢(qián)苷的含量和提取液的相對(duì)密度為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法考察加水量，提取時(shí)間，提取次數(shù)，獲得當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑的優(yōu)選提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為加水8倍，煎煮2次，每次1.5小時(shí)。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝合理可行，可作為當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑的提取工藝。

【關(guān)鍵詞】 當(dāng)歸；調(diào)經(jīng)；養(yǎng)血；工藝

【中圖分類(lèi)號(hào)】R944.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）11-0022-04

Abstract：Objective To optimize the extraction process of Angelica regulating menstruation and nourishing mixture.Methods Using the content of loganin and the relative density of the extract as an index， the orthogonal experiment was used to investigate the optimum extraction conditions of water， extraction time and extraction times.Results The best extraction process is to add water 8 times， boiling 2 times， each time for 1.5 hours.Conclusion The optimal extraction process is reasonable and feasible， and it can be used as an extraction process for the nourishing mixture of Angelica sinensis.

Keywords：Angelica； Tiaojing； Nourishing； Technology

當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑為我院婦科常用的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由山茱萸[1]等13味中藥組成，具有補(bǔ)血，益氣、填精功效、治氣血衰弱，腎精不足所致月經(jīng)后期、月經(jīng)過(guò)少、閉經(jīng)、痛經(jīng)、更年期綜合癥、不孕等癥。馬錢(qián)苷為方中主藥山茱萸的主要有效成分，具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎、降血糖等多種功效[2]。本研究采用正交實(shí)驗(yàn)法，以水煎提取液中馬錢(qián)苷的含量和相對(duì)密度為考察指標(biāo)，對(duì)當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑的水提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，為其進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津公司LC-20AD高效液相色譜儀（LabSolutions色譜工作）站；SB25-12DTD型數(shù)控超聲清洗器（上海新芝生物科技股份有限公司）；AB 135-S十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多）；AB204-N型萬(wàn)分之一天平（梅特勒-托利多）；超純水機(jī)（北京歷元電子儀器）。

1.2 材料 馬錢(qián)苷對(duì)照品（批號(hào)110640-201606，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，批號(hào)：1307184A，默克股份兩合公司）；甲醇（色譜純，批號(hào)：1301095A，默克股份兩合公司）；所用試劑水均為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)及生產(chǎn)實(shí)踐，當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑提取工藝采用水煎煮提取的方式，影響水提效果的主要因素為加水量（A），提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）[3-4]。 選用L9（34）正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)。見(jiàn)表1。

2.2 樣品提取液的制備 按處方比例稱(chēng)取9份混合中藥飲片，按擬定的正交試驗(yàn)方案進(jìn)行水煎煮提取。每份加水后均浸泡1 h，所得煎煮液濃縮至100 mL，相當(dāng)于每1 mL含生藥0.77 g。

2.3 相對(duì)密度 按《中國(guó)藥典》2015年版第四部通則0601相對(duì)密度測(cè)定法測(cè)定。

2.4 馬錢(qián)苷含量測(cè)定[5-7]

2.4.1 色譜條件 ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（10∶90）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；柱溫；25 ℃；進(jìn)樣量：10μL。馬錢(qián)苷對(duì)照品，當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑樣品和缺山茱萸的陰性對(duì)照樣品的HPLC色譜。如圖1所示。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取馬錢(qián)苷對(duì)照品6.64 mg，置100 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（質(zhì)量濃度為0.0664 mg/mL）。精密量取3 mL對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，置10 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0.0199 mg/mL）。

2.4.3 供試品溶液的制備 分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下濃縮液各5 mL，置于50 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，取過(guò)濾液為供試品溶液。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1、2、3、4、5、6 mL分別置于10 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，配制成0.0066、0.0133、0.0199、0.0265、0.0332、0.0398 mg/mL的系列溶液，分別吸取上述溶液各10 μL，進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，以縱坐標(biāo)（Y）為峰面積，以橫坐標(biāo)（X）為質(zhì)量濃度（mg/mL）進(jìn)行線性回歸，得線性方程為Y=21905X-0.9030，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。線性范圍在0.0066～0.0398 mg/mL，呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算，RSD值為0.23%（n=6）。結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別放置0、1、2、4、8、24 h后，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，RSD值為1.13%（n=6），結(jié)果顯示在24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性相對(duì)良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同批次樣品各6份，按“2.4.3”供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算馬錢(qián)苷含量，結(jié)果含量的RSD值為0.01%（n=6），結(jié)果表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的同一批供試品溶液6份，分別加入相當(dāng)于各對(duì)照品溶液80%、100%和120%的量，在“2.4.1”色譜條件下檢測(cè)馬錢(qián)苷的回收率分別為99.13%、100.45%、100.93%，平均回收率為100.21 %；RSD值為3.68 %（n=6），該方法回收率良好。見(jiàn)表2。

2.5 結(jié)果與分析

2.5.1 水煎提取正交試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)L9（34）正交試驗(yàn)，以馬錢(qián)苷含量和水提取液相對(duì)密度為主要考核指標(biāo)，設(shè)定權(quán)重系數(shù)分別為0.6、0.4，綜合評(píng)分=（相對(duì)密度/最大相對(duì)密度）×0.4×100+（馬錢(qián)苷含量/最大馬錢(qián)苷含量）×0.6×100。研究選擇提取次數(shù)、加水量、提取時(shí)間為主要考察因素，由表3可見(jiàn)其影響順序?yàn)镃（提取次數(shù)）>A（加水量）>B（提取時(shí)間），水平影響次序?yàn)锳3>A2>A1，B3>B2>B1，C2>C3>C1，故最佳提取工藝為A3B3C2。再經(jīng)方差分析結(jié)果（表4）可知提取次數(shù)（C）和加水量（A）對(duì)提取效果影響顯著，為主要因素，提取時(shí)間（B）對(duì)提取效果無(wú)明顯影響，為次要因素?？紤]節(jié)約成本，將B3調(diào)整為B2。調(diào)整最優(yōu)的提取工藝為A3B2C2，即8倍的加水量，煎煮2次，每次煎煮1.5 h。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱(chēng)取與正交試驗(yàn)等量飲片3份，按優(yōu)選的提取工藝提取，測(cè)得相對(duì)密度的RSD為0.08%，馬錢(qián)苷含量RSD為0.81%，表明優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。見(jiàn)表5。

3 討論

有研究曾以方中君藥當(dāng)歸中的阿魏酸作為含量測(cè)定指標(biāo)成分，發(fā)現(xiàn)阿魏酸含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證中專(zhuān)屬性不強(qiáng)，陰性對(duì)照液相色譜圖的干擾成分除了來(lái)自川芎的阿魏酸成分干擾，還來(lái)自其它藥材的阿魏酸成分干擾[9-10]。故沒(méi)有選擇當(dāng)歸中的阿魏酸為提取工藝指標(biāo)，而選擇臣藥山茱萸中的馬錢(qián)苷作為提取工藝的指標(biāo)。

山茱萸主要成分有環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，而馬錢(qián)苷是山茱萸補(bǔ)益肝腎的主要藥效物質(zhì)，且其水溶性和熱穩(wěn)定性相對(duì)良好，故研究選擇馬錢(qián)苷含量作為提取工藝主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分。另外方中飲片成分水溶性強(qiáng)，出膏率大，故選擇能反映出膏率大小的相對(duì)密度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，并在綜合加權(quán)評(píng)分賦予相對(duì)密度40%的比重。此外，綜合分析本組研究情況，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)和驗(yàn)證試驗(yàn)等結(jié)果均良好，正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果也準(zhǔn)確可靠，達(dá)到了優(yōu)選出當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑的最佳提取工藝的目的。當(dāng)歸調(diào)經(jīng)養(yǎng)血合劑中山茱萸主要成分馬錢(qián)苷的最佳提取工藝為8倍的加水量，煎煮2次，每次煎煮1.5 h，可作為后續(xù)相關(guān)提取研究的基礎(chǔ)和參考。

實(shí)驗(yàn)未對(duì)提取液的最佳pH條件進(jìn)行分析，僅以馬錢(qián)苷作為指標(biāo)成分和相對(duì)密度進(jìn)行優(yōu)選，研究仍存在一定局限性。但本次工藝研究最大的意義在于采用水溶液為提取溶劑，既能最大限度地節(jié)約成本，同時(shí)也能高效提取馬錢(qián)苷，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

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