青陽參總苷對社會挫敗應(yīng)激模型大鼠的抗抑郁作用研究

張萌 高博 李勇輝 楊慶雄

【摘 要】 目的：評價青陽參總苷（QYS）的抗抑郁活性。方法：60只大鼠分為對照組、模型組、QYS低中高劑量組，氟西汀作為陽性對照組。首先進(jìn)行10d社會挫敗應(yīng)激，第5天開始灌胃給藥，然后測試糖水偏愛、曠場、驚跳反射和前脈沖抑制等行為。結(jié)果：與模型組相比，QYS和氟西汀能顯著抑制應(yīng)激8 d的糖水偏愛下降，曠場試驗大鼠自主活動性和不動時間沒有顯著變化，而QYS高劑量組和陽性對照組能增加大鼠僵直時間；大鼠驚跳反射和前脈沖抑制沒有顯著變化，而QYS高劑量組能顯著降低大鼠105dB驚跳反射幅值；與模型組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：QYS對社會挫敗應(yīng)激大鼠抑郁行為具有調(diào)節(jié)作用。

【關(guān)鍵詞】 青陽參總苷；社會挫敗應(yīng)激；抗抑郁

【中圖分類號】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）15-0017-04

Abstract：Objective To evaluate the antidepressant activity of Qingyangshen glycosides （QYS）. Methods 60 rats were divided into control group， model group and QYS treatment group， and fluoxetine wasused as positive control group. Firstly， rats were stressed 10 days by a social defeat stress program， and drugs were administered intragastrically on the 5th day of the stress. Thebehavioral effectswere tested using syruppreference， open field， startle reflexand prepulse inhibitiontests. Results QYS and fluoxetine could significantly inhibit the decrease of syrup preference value induced by stress， and no significant change was observed in the autonomic activity and immobility of rats. However， the freezing time was increased in high dose of QYS and positive control groups in the open field tests.Nodifference was observed between startle reflex and prepulseinhibition in rats after stress， but the startle reflex amplitude of rats on 105 dB was significantly inhibited in the high dose of QYS group， being comparing with the stress group. And the difference was statistically significant between the model group（P<0.05）.Conclusion QYS showed an antidepressanteffect onsocial defeat stress rats.

Keywords：Qingyangshen Glycosides； Social Defeat Stress； Antidepressant

隨著當(dāng)今社會壓力上升，焦慮癥、抑郁癥等慢性應(yīng)激相關(guān)的精神障礙受到研究者的特別關(guān)注。抑郁癥是一種慢性的反復(fù)發(fā)作的精神疾病，臨床核心癥狀表現(xiàn)為快感缺失，患者甚至產(chǎn)生自殺傾向，社會危害性很大。由于抑郁癥的病理機(jī)制較為復(fù)雜，所以不同作用機(jī)制的藥物對抑郁癥的治療效果也不一樣[1-3]，故從不同作用機(jī)制出發(fā)，開發(fā)抗抑郁藥物，具有重要意義。

青陽參（Cynanchum otophyllum）為蘿藦科鵝絨藤屬植物，是西南地區(qū)的重要的民族藥之一，具有抗癲癇[4-5]、抗抑郁[6]等藥理活性作用，研究發(fā)現(xiàn)青陽參的抗抑郁活性成分為C21甾體苷類[7-8]。青陽參總苷對強(qiáng)迫游泳和懸尾等絕望篩選模型[6]和慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型動物[9]的抑郁具有顯著的調(diào)節(jié)作用?；谝钟舭Y病理機(jī)制的多樣性，不同的篩選模型代表了不同病理機(jī)制下的抑郁癥表現(xiàn)。所以，本研究采用較強(qiáng)應(yīng)激的社會挫敗應(yīng)激模型，考察青陽參總苷的抗抑郁作用。

1 材料

1.1 動物 雄性SD大鼠60只，雄性Long-Evans大鼠30只，均為清潔級，體重（250±10）g。動物購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物合格證：SCXK（京）2016-0011。光周期8：00-20：00，溫度20～24℃，濕度40%～70%，自由飲水進(jìn)食。

1.2 藥品 氟西?。ㄅ枺篔20160029，禮來蘇州制藥有限公司），分析純蔗糖（批號：20160106，北京化工廠），青陽參總苷（自制）。

2 方法

2.1 動物分組 清潔級SD大鼠60只，根據(jù)應(yīng)激前糖水偏愛基線值對動物進(jìn)行平均分組，分為6組，每組10只。分別為：對照組、模型組、青陽參總苷低、中、高（5、15、45mg/kg）劑量組和陽性對照組（氟西汀，1.8mg/kg）。

2.2 藥物制備 QYS提取方法[8]，取青陽參塊根10kg，粉碎，80%乙醇提取3次，合并提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋，石油醚萃取3次，水層再用氯仿萃取3次，合并氯仿部分?；厥章确拢脺\黃色青陽參總苷粉末230g，得率為2.3%。

2.3 社會挫敗應(yīng)激模型的建立[11] 將SD大鼠放入到Long-Evans大鼠的飼養(yǎng)盒中，Long-Evans大鼠作為居住者會主動攻擊SD大鼠，每次打斗1h，前30min讓其任意打斗，后30min在飼養(yǎng)盒中間放置一個鐵絲網(wǎng)制成的隔板，使兩只動物無法直接接觸，但存在視覺、嗅覺、觸覺的接觸，1h后SD大鼠回籠。此后隔天按照上述方法進(jìn)行應(yīng)激，共應(yīng)激10d。

2.4 給藥方法 QYS和氟西汀粉末分別溶于蒸餾水，QYS低、中、高給藥劑量分別為5、15、45mg/kg，陽性對照組氟西汀劑量為1.8mg/kg，應(yīng)激前1小時灌胃給藥。應(yīng)激第5天開始每隔一天，QYS灌胃給藥1次，共給藥6次，同時陽性對照組大鼠每天灌胃給藥1次，對照組每天給蒸餾水。

2.5 糖水偏愛行為測試 按照文獻(xiàn)方法[10]，單籠大鼠進(jìn)行1周糖水適應(yīng)訓(xùn)練，第1天適應(yīng)雙瓶1%的蔗糖水，第2天后均換成一瓶清水和一瓶1%的蔗糖水，在第8天測試糖水偏愛基線值（糖水偏愛=糖水消耗量/（糖水消耗量+清水消耗量）×水消耗量×100%），測試前限制飲水24h。應(yīng)激前糖水偏愛基線值作為應(yīng)激0天數(shù)據(jù)，然后以同樣方法在應(yīng)激第4、8、10天分別測試各組大鼠糖水偏愛值。

2.6 曠場行為測試 曠場測試箱規(guī)格：100cm×60cm×50cm。QYS給藥結(jié)束后用陌生情境曠場箱測試動物的新穎尋求行為，記錄10min內(nèi)大鼠在曠場中僵直行為時間、不動時間和運動距離行為指標(biāo)。

2.7 驚跳反射行為測試 測試前大鼠放入驚跳反射箱的透明束縛盒進(jìn)行環(huán)境適應(yīng)，第2天將大鼠全部放入箱內(nèi)，箱內(nèi)持續(xù)65dB白噪音直至實驗結(jié)束，適應(yīng) 300s 后，給予90dB、100dB、110dB，50ms的白噪音刺激各 10 次，刺激順序隨機(jī)，刺激間隔10～50s。記錄小鼠在聲音刺激開始前200ms至聲音結(jié)束后 1000ms 的驚跳反射幅值，考察QYS能否抑制應(yīng)激引發(fā)的驚跳反射增強(qiáng)現(xiàn)象。

2.8 前脈沖抑制行為測試 前脈沖抑制（PPI）指在驚嚇刺激之前給予輕微刺激（前脈沖）可以抑制動物對刺激反應(yīng)的現(xiàn)象，而強(qiáng)應(yīng)激后動物會出現(xiàn)PPI缺失行為。驚跳反射行為測試3h后，動物在驚跳反射箱進(jìn)行前脈沖抑制測試，首先給予30dB前刺激，記錄在68dB、71dB 和77dB聲音刺激下的驚跳反射幅值[13]，其他程序參數(shù)與驚跳反射行為測試一致?？疾霶YS對應(yīng)激后動物的PPI行為的影響。

2.9 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)均以（x±s）表示，采用雙因素及單因素方差分析，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 青陽參總苷對社會挫敗應(yīng)激大鼠糖水偏愛的影響 由表1可知，隨應(yīng)激時間的延長，社會挫敗應(yīng)激誘發(fā)大鼠糖水偏愛值下降。在應(yīng)激8d，與對照組相比，模型組糖水偏愛值顯著下降（P<0.001），QYS低、中、高劑量均能夠逆轉(zhuǎn)糖水偏愛值下降（P<0.01，P<0.001，P<0.001），并呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系，氟西汀同樣能反轉(zhuǎn)應(yīng)激后大鼠糖水偏愛下降（P<0.001）。應(yīng)激第10天，與模型組相比，對照組和QYS給藥組糖水偏愛值均沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

3.2 青陽參總苷對社會挫敗應(yīng)激大鼠曠場行為的影響 由表2可知，曠場行為結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僵直時間、不動時間及活動距離3個指標(biāo)，對照組與模型組無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），而QYS高劑量組大鼠僵直時間增加（P<0.01），陽性對照組大鼠僵直時間也出現(xiàn)增加（P<0.01）。

3.3 青陽參總苷對社會挫敗應(yīng)激大鼠驚跳反射的影響 由表3可知，模型組與對照組相比，對3個不同強(qiáng)度聲音刺激誘發(fā)的驚跳反射無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），但QYS高劑量組對105dB中等刺激誘發(fā)驚跳反射有一定的抑制作用（P<0.05），青陽參總苷給藥組對95dB、115dB聲音刺激誘發(fā)驚跳反射沒有影響。

3.4 青陽參總苷對社會挫敗應(yīng)激大鼠前脈沖抑制的影響 由表2可知，68 dB、71 dB、77dB 刺激下的PPI，各實驗處理組間沒有顯著變化，模型組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。

4 討論

抑郁樣行為反應(yīng)包括快感缺失、自發(fā)活動減少、行為絕望或習(xí)得性無助等[14-15]。社會挫敗模型中，利用有較強(qiáng)的領(lǐng)地或食物爭奪意識的Long-Evans大鼠，誘導(dǎo)動物之間發(fā)生激烈爭斗，反復(fù)應(yīng)激導(dǎo)致 SD大鼠屈服出現(xiàn)抑郁樣行為，與人在社會中經(jīng)常受到挫敗而導(dǎo)致的抑郁行為的誘因類似。社會挫敗包括軀體和心理上雙重應(yīng)激，易誘發(fā)抑郁樣行為。該應(yīng)激范式能更好地模擬抑郁個體的情緒特征，可避免反復(fù)應(yīng)激導(dǎo)致動物的適應(yīng)性，抑郁樣行為可持久保持，因此該模型對抗抑郁藥物研究具有重要作用[11， 16] 研究中發(fā)現(xiàn)，社會挫敗應(yīng)激8 d可導(dǎo)致大鼠糖水偏愛值下降，而與模型組相比QYS組和陽性對照組能顯著恢復(fù)應(yīng)激后的糖水偏愛，說明QYS著抑制社會挫敗應(yīng)激導(dǎo)致的快感缺失癥狀，而10 d糖水偏愛值反彈，可能是由于應(yīng)激時間短、次數(shù)少不足以維持穩(wěn)定的抑郁樣行為。曠場結(jié)果中，模型組大鼠的自主活動性沒有顯著變化。與模型組相比，QYS高劑量組和陽性對照組增加大鼠曠場中的僵直時間，這與高劑量QYS給藥半小時后動物易現(xiàn)鎮(zhèn)定行為符合，可能與大劑量QYS對動物活動的抑制作用有關(guān)。除此之外，考慮到該社會挫敗應(yīng)激屬于較強(qiáng)烈應(yīng)激，因此對應(yīng)激后的驚跳反射增強(qiáng)及PPI缺失行為進(jìn)行考察。驚跳反射和PPI測試發(fā)現(xiàn)，對照組與模型組沒有顯著差異，這也說明該社會挫敗應(yīng)激未達(dá)到急性應(yīng)激的強(qiáng)度，不足以誘發(fā)應(yīng)激后驚跳反射增強(qiáng)和PPI缺失行為。但與模型組相比，QYS高劑量組能顯著抑制大鼠105dB驚跳反射幅值，說明青陽參總苷對較弱刺激誘發(fā)的驚跳反射行為具有一定抑制作用，提示青陽參可能對驚跳反射有一定抑制作用。實驗結(jié)果表明，QYS具有逆轉(zhuǎn)快感缺失、抑制驚跳反射增強(qiáng)作用，具有一定抗抑郁活性。