氯硝柳胺聯(lián)合順鉑抑制腎上腺皮質(zhì)癌的實(shí)驗(yàn)研究*

王敏捷，王尉，朱沂，趙旭，胡衛(wèi)列

（1.解放軍第422醫(yī)院 泌尿外科，廣東 湛江 524009；2.廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院 泌尿外科，廣東 廣州 510010）

順鉑是腎上腺皮質(zhì)癌常用的化療藥物之一[1-2]，大劑量應(yīng)用易誘發(fā)骨髓抑制、腎功能損害，并產(chǎn)生耐藥性，降低療效[3]，所以降低其劑量，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)癌對(duì)其敏感性的研究有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。最新研究發(fā)現(xiàn)，氯硝柳胺有抗腫瘤活性，且能增強(qiáng)順鉑對(duì)三陰乳腺癌的毒性作用[4]。本實(shí)驗(yàn)聯(lián)用氯硝柳胺和順鉑，研究其對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌的療效及作用機(jī)制，為探索腎上腺皮質(zhì)癌新的治療方案提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 細(xì)胞 人腎上腺皮質(zhì)癌SW-l3細(xì)胞株（上海中國科學(xué)院細(xì)胞庫）。

1.1.2 藥物 氯硝柳胺、順鉑購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.1.3 試劑 胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）（美國MPBIO公司），胰酶、雙抗購自美國Gibco公司，L-15培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffer saline,PBS）購自上海Genom公司，兔抗人β-actin抗體、兔抗人Bcl-2抗體、Caspase-3抗體、Vimentin抗體、E-cadherin抗體購自美國Cell Signaling Technology公司，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, BCA）蛋白檢測試劑盒、二甲亞砜（Dimethyl sulfoxide, DMSO）購自美國Sigma-Aldrich公司，結(jié)晶紫染液（上海碧云天生物技術(shù)公司），基質(zhì)膠（美國Corning公司），CCK-8法細(xì)胞增殖檢測試劑盒、吖啶橙/溴化乙錠（acridine orange/ethidium bromide AO/EB）細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購自日本DOJINDO公司。

1.2 儀器與設(shè)備

8μl孔Transwell小室、流式細(xì)胞儀LSRII購自美國BD公司，培養(yǎng)瓶/皿、離心管購自美國Corning公司，倒置顯微鏡（日本Olympus公司），37℃無二氧化碳CO2恒溫孵箱（美國Thermo公司）。

1.3 SW-13細(xì)胞培育

SW-13細(xì)胞接種于25 cm2培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)液為L-15培養(yǎng)基（含10% FBS和1%雙抗），37℃無CO2恒溫孵箱常規(guī)培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期時(shí)用于實(shí)驗(yàn)。

1.4 SW-13細(xì)胞增殖檢測

將處于對(duì)數(shù)生長期的SW-13細(xì)胞按2×103個(gè)/孔，接種于96孔培養(yǎng)板，用不同濃度的氯硝柳胺（4.00、2.00、1.00、0.50和 0.25μmol/L）和順鉑（40、32、24、16、8和4 mg/L）處理細(xì)胞，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。分別于藥物處理24和48 h后加入10μl CCK-8，避光37℃恒溫?zé)oCO2孵箱培養(yǎng)4 h，用酶標(biāo)儀測定450 nm處吸光值（optical density, OD值）。然后，根據(jù)細(xì)胞對(duì)2種藥物的反應(yīng)，選取0.5和1.0μmol/L氯硝柳胺與不同濃度順鉑聯(lián)合處理細(xì)胞48 h，CCK-8法檢測OD值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)OD值計(jì)算細(xì)胞生存率、半抑制濃度（half maximal inhibitory concentration, IC50）并繪制細(xì)胞生存率曲線。細(xì)胞生存率（%）=（OD實(shí)驗(yàn)組-OD空白組）／（OD陰性組-OD空白組）×100%。

1.5 SW-13細(xì)胞凋亡檢測

1.5.1 Annexin V/PI染色 將SW-13細(xì)胞接種于25 cm2培養(yǎng)瓶，設(shè)對(duì)照組、氯硝柳胺組（1μmol/L氯硝柳胺）、順鉑組（16 mg/L順鉑）、聯(lián)合用藥組（1μmol/L氯硝柳胺＋16 mg/L順鉑），過夜培養(yǎng)后用藥物處理。48 h后按Annexin V/PI凋亡檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5.2 AO/EB染色 將SW-13細(xì)胞按5×105個(gè)/孔接種于6孔板。分組同1.5.1，過夜培養(yǎng)后進(jìn)行藥物處理。48 h后按照AO/EB凋亡染色試劑盒說明書進(jìn)行染色，熒光顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察結(jié)果、拍照，并且計(jì)數(shù)正常、早期、晚期凋亡細(xì)胞數(shù)，取平均值，根據(jù)結(jié)果計(jì)算凋亡率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 Transwell實(shí)驗(yàn)

將 SW-13細(xì)胞按 1×104個(gè) /室接種于 8μl孔Transwell小室的上室，分組同1.5.1。下室加入500μl含30% FBS的L-15培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng)后按分組藥物處理，24 h后用0.1%結(jié)晶紫室溫下染色5～10 min，顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察結(jié)果，并拍照、計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞侵襲力。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

將SW-13細(xì)胞接種于6孔板，密度掌握為過夜培育后板底無空隙，分組同1.5.1。過夜培養(yǎng)后用100μl槍頭垂直于底壁，力量均勻劃痕3～5道。用PBS洗去脫落細(xì)胞和細(xì)胞碎片，藥物處理后24 h顯微鏡下拍照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)細(xì)胞間距計(jì)算遷移率，細(xì)胞遷移率=（1-愈合后間距/起始間距）×100%。

1.8 Western blot檢測

將SW-13細(xì)胞接種于25 cm2培養(yǎng)瓶，分組同1.5.1。過夜培養(yǎng)后進(jìn)行藥物處理，48 h后按BCA蛋白檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作，結(jié)果條帶用Image-Pro軟件分析灰度值，β-actin作為內(nèi)參蛋白。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件和Graphpad Prism 5.0作圖軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用單因素方差分析或重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析，兩兩比較用Dunnett-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 氯硝柳胺和順鉑抑制SW-13細(xì)胞的增殖

2.1.1 氯硝柳胺 氯硝柳胺各濃度處理組24和48 h細(xì)胞存活率比較，采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞存活率有差別（F=114.614，P=0.000）；②各濃度處理組細(xì)胞生存率有差別（F=293.883，P=0.000），隨藥物濃度的升高對(duì)SW-13細(xì)胞增殖的抑制作用越強(qiáng)；③各濃度處理組的細(xì)胞生存率變化趨勢有差別（F=4.841，P=0.02）。氯硝柳胺24和48 h的IC50為1.825和1.250μmol/L。見圖1。

2.1.2 順鉑 順鉑各濃度處理組24和48 h細(xì)胞存活率比較，采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞存活率有差別（F=2135.204，P=0.000）；②各濃度處理組細(xì)胞生存率有差別（F=137.885，P=0.000），隨藥物濃度的升高對(duì)SW-13細(xì)胞增殖的抑制作用越強(qiáng)；③各濃度處理組的細(xì)胞生存率變化趨勢有差別（F=159.979，P=0.000）。順鉑24和48 h的IC50為43.94和25.97 mg/L見圖2。

2.2 氯硝柳胺增強(qiáng)順鉑對(duì)SW-13細(xì)胞增殖的抑制作用

順鉑組、順鉑+0.5μmol/L氯硝柳胺組、順鉑+1.0μmol/L氯硝柳胺組在4、8、16、24、32和40 mg/L順鉑中48 h細(xì)胞存活率比較，采用重復(fù)測量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同濃度順鉑的細(xì)胞存活率有差別（F=1072.297，P=0.000），②各組細(xì)胞生存率有差別（F=201.336，P=0.000），③各組的細(xì)胞生存率變化趨勢有差別（F=37.443，P=0.000）。氯硝柳胺可以增強(qiáng)順鉑對(duì)SW-13的毒性作用，且隨著氯硝柳胺濃度的升高毒性作用越強(qiáng)。見圖3。

圖2 不同劑量順鉑對(duì)SW-13細(xì)胞增殖的影響 （±s）

圖3 氯硝柳胺增強(qiáng)順鉑對(duì)SW-13細(xì)胞增殖的抑制作用（±s）

2.3 氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑促進(jìn)SW13細(xì)胞凋亡

Annexin V/PI染色流式細(xì)胞儀檢測早期凋亡細(xì)胞位于右下象限，晚期凋亡細(xì)胞位于右上象限（見圖4）。48 h對(duì)照組、氯硝柳胺組、順鉑組、聯(lián)合用藥組細(xì)胞總凋亡率分別為（5.1±3.9）%、（28.5±6.01）%、（26.89±5.11）%和（50.53±9.87）%，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=12.354，P=0.007）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的細(xì)胞總凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.797和6.031，P=0.019和0.004），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組低（見圖5）。

圖4 各組SW-13細(xì)胞的凋亡

2.4 各組SW-13細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征

AO/EB染色后熒光顯微鏡下正常SW-13細(xì)胞呈毛玻璃樣，均勻染綠色；早期凋亡細(xì)胞胞質(zhì)、胞核呈綠色，但胞核固縮呈圓珠狀；晚期凋亡細(xì)胞呈桔紅色，胞核固縮呈圓珠狀（見圖6）。48 h對(duì)照組、氯硝柳胺組、順鉑組、聯(lián)合用藥組的細(xì)胞總凋亡率分別為（5.8±4.2）%、（28.1±5.03）%、（27.1±4.98）%和（54.5±8.12）%，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.602，P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的細(xì)胞總凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.525和6.180，P=0.001和0.000），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組低（見圖7）。

圖5 各組SW-13細(xì)胞總凋亡率比較 （±s）

圖6 各組SW-13細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征 （AO/EB染色×100）

2.5 氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑降低SW-13細(xì)胞侵襲能力

Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藥物處理24 h后，對(duì)照組、氯硝柳胺組、順鉑組、聯(lián)合用藥組隨機(jī)5個(gè)視野平均細(xì)胞數(shù)分別為（63.5±9.1）、（20.6±8.0）、（22.2±7.8）和（9.4±3.6）個(gè)，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.341，P=0.022）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的平均細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.870和3.338，P=0.021和0.010），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組高。見圖8、9。

圖7 各組SW-13細(xì)胞總凋亡率比較 （±s）

圖8 各組藥物作用24 h后SW-13細(xì)胞的侵襲能力 （結(jié)晶紫染色×100）

圖9 各組藥物作用24 h后SW-13侵襲細(xì)胞數(shù)比較 （±s）

2.6 氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑降低SW-13細(xì)胞遷移能力

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，藥物處理24 h后，對(duì)照組、氯硝柳胺、順鉑組、聯(lián)合用藥組遷移率分別為（43.25±5.48）%、（16.65±3.26）%、（17.74±3.13）%和（8.81±1.25）%，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.715，P=0.013）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的遷移率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.226和4.589，P=0.031和0.010），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組高。見圖10、11。

2.7 氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Caspase-3的表達(dá)

2.7.1 Bcl-2 Western blot檢測結(jié)果顯示，對(duì)照組、氯硝柳胺組、順鉑組、聯(lián)合用藥組的Bcl-2相對(duì)表達(dá)量分別為（87.91±8.89）、（75.98±9.26）、（71.73±6.77）和（24.82±9.13），經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=33.716，P=0.001）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的Bcl-2相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.811和7.143，均P=0.002），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組高。見圖12、13。

圖10 各組SW-13細(xì)胞的遷移能力 （×100）

圖11 各組SW-13細(xì)胞遷移率比較 （±s）

圖12 各組Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)

2.7.2 Caspase-3 Western blot檢測結(jié)果顯示，對(duì)照組、氯硝柳胺組、順鉑組、聯(lián)合用藥組的Caspase-3相對(duì)表達(dá)量分別為（15.48±5.14）、（27.52±3.26）、（35.74±5.08）和（64.52±5.09），經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=54.406，P=0.000）。進(jìn)一步兩組、氯硝柳胺、順鉑組、聯(lián)合用藥組的E-cadherin相對(duì)表達(dá)量分別為（18.58±6.01）、（9.32±2.15）、（9.72±1.78）和（3.84±0.513），經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=12.131，P=0.008）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的E-cadherin相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.846和5.387，P=0.008和0.006），氯硝兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的Caspase-3相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=10.593和6.929，P=0.000和0.002），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組低。見圖12、14。

2.8 氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑促進(jìn)E-cadherin的表達(dá)，抑制Vimentin的表達(dá)

2.8.1 E-cadherin Western blot檢測結(jié)果顯示，對(duì)照柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組高。見圖15、16。

圖13 各組Bcl-2蛋白表達(dá)水平比較 （±s）

圖14 各組Caspase-3蛋白表達(dá)水平比較 （±s）

2.8.2 Vimentin Western blot檢測結(jié)果顯示，對(duì)照組、氯硝柳胺、順鉑組、聯(lián)合用藥組的Vimentin相對(duì)表達(dá)量分別為（13.48±2.14）、（19.42±5.27）、（26.64±2.83）和（38.25±8.08），經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=54.406，P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較經(jīng)Dunnett-t檢驗(yàn)，氯硝柳胺組、順鉑組與聯(lián)合用藥組的Vimentin相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.514和4.304，P=0.005和0.013），氯硝柳胺組、順鉑組較聯(lián)合用藥組低。見圖15、17。

圖15 各組E-cadherin、Vimentin蛋白的表達(dá)

圖16 各組E-cadherin蛋白表達(dá)水平比較 （±s）

圖17 各組Vimentin蛋白表達(dá)水平比較 （±s）

3 討論

腎上腺皮質(zhì)癌是一種起源于腎上腺皮質(zhì)的惡性腫瘤，病程進(jìn)展迅速。該病早期診斷困難，導(dǎo)致大多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期，治療仍以根治手術(shù)為主[5]。由于缺乏有效的輔助治療手段，使該病預(yù)后極差，病死率達(dá)40%[6]。因此，為有效提高腎上腺皮質(zhì)癌患者的生存率，手術(shù)聯(lián)合藥物治療是一項(xiàng)重要的研究課題。

順鉑是臨床治療腎上腺皮質(zhì)癌依托泊甘+順鉑+表柔比星+米托坦方案的重要成分，但大劑量順鉑誘發(fā)的骨髓抑制、腎功能損害等副作用嚴(yán)重影響其臨床應(yīng)用，而且隨著順鉑劑量的增大，能夠明顯增加其耐藥率[7]，所以降低順鉑的劑量，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的研究有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，氯硝柳胺和不同濃度的順鉑聯(lián)合作用于SW-13細(xì)胞后，可以提高順鉑對(duì)SW-13細(xì)胞的毒性作用，對(duì)低劑量順鉑的殺傷作用促進(jìn)尤為明顯。在凋亡實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，氯硝柳胺增強(qiáng)低劑量順鉑抑制SW-13細(xì)胞的增殖作用與促進(jìn)細(xì)胞凋亡相關(guān)，聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率達(dá)50.53%，較氯硝柳胺和順鉑組的28.5%和26.89%提高。AO/EB凋亡實(shí)驗(yàn)中不僅進(jìn)一步證實(shí)該促凋亡作用，而且能直觀地觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。在細(xì)胞凋亡過程中，Bcl-2家族成員起至關(guān)重要的作用。Bcl-2是細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)節(jié)因子，受到外界刺激時(shí)能保護(hù)細(xì)胞免于凋亡[8]，而活化的Caspase-3是啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的標(biāo)志。Western blot檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組的Bcl-2蛋白表達(dá)水平較氯硝柳胺組、順鉑組明顯抑制，而Caspase-3表達(dá)較氯硝柳胺組、順鉑組升高。說明氯硝柳胺聯(lián)合低劑量順鉑有可能是通過抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)和促進(jìn)凋亡啟動(dòng)蛋白Caspase-3的表達(dá)，來發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，并通過促進(jìn)凋亡，抑制SW-13細(xì)胞的增殖。通過Transwell實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)，氯硝柳胺和順鉑聯(lián)合應(yīng)用可以降低SW-13細(xì)胞的侵襲和遷移能力，聯(lián)合用藥組較氯硝柳胺組、順鉑組對(duì)SW-13細(xì)胞侵襲和遷移能力的抑制作用更明顯。研究發(fā)現(xiàn)，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與多種腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移，是腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要分子機(jī)制[9]。腫瘤細(xì)胞E-cadherin的缺失是促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的重要表現(xiàn)[10]，隨著E-cadherin表達(dá)減少，Vimentin蛋白表達(dá)增加，腫瘤惡性程度增加[11]。通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合用藥組較氯硝柳胺組、順鉑組可以明顯抑制Vimentin的表達(dá)，促進(jìn)E-cadherin的表達(dá)，表明氯硝柳胺和低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用有可能是通過對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，降低SW-13細(xì)胞的侵襲和遷移能力。

細(xì)胞的增殖和凋亡都是多基因調(diào)控的復(fù)雜過程。研究發(fā)現(xiàn)，氯硝柳胺可以通過抑制Wnt/β-catenin、mTORC1、STAT3、NF-κB、Notch、HEDGEHOG 等信號(hào)通路，發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用[12-14]。已知外在的死亡受體通路或內(nèi)在的線粒體通路都可以促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在此過程中有多種蛋白質(zhì)參與，如JNK信號(hào)通路蛋白、p53、抗凋亡蛋白及Bcl-2家族蛋白[15]。因此，氯硝柳胺與順鉑聯(lián)用的抗腫瘤機(jī)制是相當(dāng)復(fù)雜的過程，仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。

綜上所述，本研究在體外聯(lián)合氯硝柳胺和低劑量順鉑作用于SW-13細(xì)胞，通過對(duì)其細(xì)胞增殖、凋亡，以及細(xì)胞侵襲力和遷移能力的多角度觀察，認(rèn)為氯硝柳胺和低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用可以抑制SW-13細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，降低其侵襲和遷移能力。并且這種抑制增殖和促進(jìn)凋亡作用是通過抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)Caspase-3的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，同時(shí)氯硝柳胺和低劑量順鉑聯(lián)合應(yīng)用通過對(duì)Vimentin和E-cadherin的表達(dá)影響，降低SW-13細(xì)胞的侵襲和遷移能力。希望通過本研究可以對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌的治療提供理論支持，在提高順鉑的抗腫瘤作用的同時(shí)，降低由于大劑量應(yīng)用順鉑而造成的副作用和細(xì)胞耐藥。