電針不同腧穴對急慢性結腸炎大鼠模型血清IL-6含量的影響

閆麗萍 ，薛美婷 ，呂竹青 ，謝保弟 ，韓國偉

（1.山西中醫(yī)藥大學，山西晉中 030619； 2.遵義市中醫(yī)院，貴州遵義563000）

結腸炎為臨床常見病，有急性與慢性兩種類型。無論是急性還是慢性結腸炎，腸黏膜炎癥為其主要病理改變。大量文獻表明，針灸對于腸道炎癥有很好的療效。本文以急性與慢性結腸炎模型大鼠為研究對象，電針大腸俞、天樞、足三里、上巨虛4個不同的特定穴，觀察電針不同特定穴對急、慢性結腸炎大鼠模型血清IL-6含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 急性結腸炎實驗：清潔級SD大鼠 60 只，體質量（190±10）g，雌雄各半，購自北京海淀興旺實驗動物養(yǎng)殖場，許可證號：SCXK-（京）2014-0013。慢性結腸炎實驗：清潔級SD大鼠120只，余同前。適應性飼養(yǎng)1 w后實驗。實驗室通風良好，溫度22～24℃，相對濕度50%～60%。

1.1.2 試劑與儀器 華佗牌SDZ-Ⅱ型電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）、CP214電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］、Spectramax全波長酶標儀（美國分子儀器有限公司）、DHG-9243BS數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海博訊實業(yè)有限醫(yī)療設備廠）、02-0510勻漿機（美國PRO）、L535R-1低速冷凍離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）、DW-HL388超低溫冷凍儲存箱（中科美菱低溫科技有限責任公司）、冰乙酸（天津市光復科技發(fā)展有限公司）、水合氯醛（天津市科密歐化學試劑有限公司）、甲醛溶液（成都市科龍化工試劑廠）、IL-6試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 電針不同腧穴對急性結腸炎模型大鼠血清IL-6含量的影響 60只清潔級大鼠隨機分為空白組、模型組、大腸俞組、天樞組、足三里組和上巨虛組，每組10只。選用6%冰乙酸溶液灌腸制備急性結腸炎大鼠模型［1］。造模前24 h，大鼠禁食不禁水。除空白組外，大鼠固定后，將石蠟油潤滑過的直徑為2 mm的聚氯乙烯管插入大鼠肛門8 cm，緩慢注入6%冰乙酸溶液1 mL，立即捏緊肛門，定時15 s后，反折軟管，接裝有5 mL生理鹽水的注射器，松開反折的軟管，注入生理鹽水沖洗，1次即可?？瞻捉M生理鹽水1 mL灌腸，余處理不變。各腧穴組造模后即刻固定，電針相應穴位［2］（雙側）。大腸俞：第4腰椎棘突下，旁開5 mm；天樞：神闕穴旁開5 mm；足三里：膝關節(jié)后外側，在腓骨小頭下5 mm；上巨虛：足三里向下5 mm。電針選用疏密波，以電針局部微微顫動為度，1次/d，30 min/次，共3 d?？瞻捉M、模型組只做相應固定，不針刺。第3次治療后，大鼠禁食不禁水，次日腹腔注入10%水合氯醛溶液（0.4 mL/100 g）麻醉，腹主動脈采血，常溫靜置2 h，于低速冷凍離心機（設置參數(shù)為4℃、3 000 r/min，15min）中離心，分離血清，貯存于-20℃冰箱，待測。

1.2.2 電針不同腧穴對慢性結腸炎模型大鼠血清IL-6含量的影響 分組同1.2.1，每組20只。采用免疫法加局部刺激制備慢性結腸炎大鼠模型［3-5］。取家兔新鮮結腸黏膜層，加適量生理鹽水制成黏膜勻漿，放于-20℃冰箱中冷凍24 h，溶凍后置于低速冷凍離心機（參數(shù)：4 ℃，3 000 r/min，30 min）中離心，取上清液測定蛋白質含量后存于冰箱備用。造模時取出，與完全Freund佐劑等體積混勻成乳劑。除空白組外，其余各組每只足跖內注射抗原3 mg，并于第10天、17天、24天、31天分別于足跖、背部、腹股溝、腹腔注射抗原6 mg，腹腔注射時不加完全Freund佐劑。禁食24 h，次日用10%水合氯醛溶液（0.4 mL/100 g）行腹腔注射麻醉，1%福爾馬林溶液2 mL灌腸，留置1 h后用生理鹽水沖洗。再用抗原液8 mg灌腸，留置2 h后，生理鹽水沖洗。治療療程為10 d，余同1.2.1。大鼠治療3 d后先處死一半采血，剩余大鼠繼續(xù)治療7 d后處死采血，余同1.2.1。

1.3 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，以均數(shù)±標準差（±s）表示，經(jīng)正態(tài)檢驗后，組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 電針對急性結腸炎模型大鼠血清IL-6含量的影響

與空白組比較，模型組血清IL-6含量升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，各腧穴組血清IL-6含量均下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）；各腧穴組血清IL-6含量進行比較，差異無統(tǒng)計學意義。結果見表1。

表1 急性結腸炎大鼠血清IL-6含量比較 （±s）

表1 急性結腸炎大鼠血清IL-6含量比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

組別 n IL-6（pg/mL）空白組 10 86.28±5.83模型組 10 124.09±7.781）大腸俞組 10 118.11±4.312）天樞組 10 114.46±4.543）足三里組 10 116.59±5.663）上巨虛組 10 116.65±4.723）

2.2 電針對慢性結腸炎模型大鼠血清IL-6含量的影響

與空白組相比，模型組血清IL-6含量升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。電針3 d后，各腧穴治療組血清IL-6含量較模型組均降低，但組間比較差異無統(tǒng)計學意義。電針10 d后，天樞組下調效果優(yōu)于大腸俞組、足三里組和上巨虛組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），上巨虛、大腸俞、足三里3組比較差異無統(tǒng)計學意義。結果見表2、表3。

表2 慢性結腸炎大鼠治療3 d后血清中IL-6含量比較 （±s）

表2 慢性結腸炎大鼠治療3 d后血清中IL-6含量比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別 n IL-6（pg/mL）空白組 10 87.12±5.39模型組 10 122.10±5.711）大腸俞組 10 117.65±3.02天樞組 10 115.95±3.60足三里組 10 116.13±3.77上巨虛組 10 115.91±4.20

表3 慢性結腸炎大鼠治療10 d后血清IL-6含量比較 （±s）

表3 慢性結腸炎大鼠治療10 d后血清IL-6含量比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01；與天樞組比較，4）P＜0.05

組別 n IL-6（pg/mL）空白組 10 86.83±5.86模型組 10 120.93±5.321）大腸俞組 10 104.37±4.383）4）天樞組 10 99.95±4.603）足三里組 10 103.03±3.183）上巨虛組 10 102.71±3.613）

3 討論

結腸炎屬于腸道炎癥病變，大量臨床和實驗研究表明，針刺穴位能有效改善結腸炎的腸黏膜損傷。本實驗分別電針大腸俞、天樞、足三里、上巨虛4個穴位治療結腸炎，大腸俞是大腸經(jīng)的背俞穴，早期實驗發(fā)現(xiàn)俞募配穴、合募配穴對大腸腑病均有一定的治療作用，其中以合募配穴療效最佳［6］。天樞是大腸經(jīng)的募穴，實驗表明艾灸天樞和足三里均能改善大鼠潰瘍性結腸炎的損傷，天樞治療效果更好［7］。足三里為胃經(jīng)合穴，也是下合穴，是胃經(jīng)經(jīng)氣合于臟腑的部位，針刺足三里等穴位能有效改善潰瘍性結腸炎病變。上巨虛是大腸經(jīng)下合穴，動物實驗顯示，電針上巨虛能降低潰瘍性結腸炎模型大鼠結腸黏膜潰瘍及炎癥評分，療效較足三里等穴位佳，且存在一定的特異性［8］。結腸炎大都屬于氣滯血瘀，血敗肉腐，產(chǎn)生潰瘍。氣行血自行，血行膿自化，大腸俞是大腸經(jīng)的背俞穴，天樞是大腸經(jīng)的募穴，都有調暢氣血的作用。足三里和上巨虛分別是胃經(jīng)、大腸經(jīng)的下合穴，下合治內腑，通過針刺足三里或者上巨虛能夠刺激胃腸蠕動，調節(jié)腸道微循環(huán)，改善結腸炎癥損傷。IL-6屬于Th1類細胞因子，由T淋巴細胞、單核巨噬細胞等產(chǎn)生，是促炎細胞因子，參與炎癥與免疫反應，對多種效應細胞產(chǎn)生作用，介導免疫蛋白分泌，刺激參與免疫反應的細胞增殖、分化并提高其功能，它是結腸炎發(fā)病機制的關鍵因素，在炎癥發(fā)生、發(fā)展過程中均有重要作用。

急性結腸炎實驗中，與空白組相比，模型組血清IL-6含量升高，差異有統(tǒng)計學意義。各腧穴組與模型組比較，血清IL-6含量均降低，差異有統(tǒng)計學意義，說明4個特定穴對急性結腸炎血清IL-6均有下調作用。4個特定穴組間血清IL-6含量比較，差異無統(tǒng)計學意義，說明急性結腸炎經(jīng)4個腧穴組治療3次后在降低血清IL-6含量方面效果相當。

慢性結腸炎實驗中，與空白組相比，模型組血清IL-6含量升高，差異有統(tǒng)計學意義。電針3 d與10 d后，各腧穴組血清IL-6含量均較模型組降低，差異有統(tǒng)計學意義，說明4個特定穴在慢性結腸炎電針3 d和10 d后對血清IL-6含量均有下調作用。電針3 d后，各腧穴組血清IL-6含量較模型組均降低，但組間比較差異無統(tǒng)計學意義，說明各腧穴對慢性結腸炎電針3 d后在炎癥減輕方面未顯現(xiàn)出差異。電針10 d后，天樞組下調效果優(yōu)于大腸俞組和足三里組，差異有統(tǒng)計學意義，上巨虛組與之比較無統(tǒng)計學差異，上巨虛、大腸俞、足三里3組比較差異無統(tǒng)計學意義。說明隨著治療次數(shù)的增多，天樞在血清IL-6含量下調方面的作用效果逐漸凸顯，優(yōu)于其他腧穴。

綜上所述，各腧穴對急性與慢性結腸炎均有治療效果，其作用機制可能與電針穴位下調血清IL-6含量，抑制炎癥過程中炎細胞因子的釋放有關，其中電針天樞對慢性結腸炎模型大鼠血清IL-6含量下調作用更顯著。