非編碼RNA在膽管癌中的研究進(jìn)展

陳三韋 綜述 黃強(qiáng) ，黃玫 審校

（1. 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬安徽省立醫(yī)院 普通外科，安徽 合肥 230001；2. 肝膽胰外科安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥230001）

膽管癌（cholangiocarcinoma）是發(fā)生于左右肝管匯合部至膽總管下端的肝外膽道的惡性腫瘤，它起源于膽管上皮細(xì)胞。膽管癌在肝臟系原發(fā)腫瘤中的發(fā)病率僅次于肝癌[1]。并且膽管癌的發(fā)病比例約占整個(gè)消化系統(tǒng)惡性腫瘤的3%[2]。研究[3]發(fā)現(xiàn)膽道系統(tǒng)慢性炎癥是影響膽管癌發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)。膽管癌起病隱匿，惡性度高，與其他消化道腫瘤相比，膽管癌缺乏理想的早期診斷標(biāo)志物，并且對(duì)常規(guī)化療不敏感，即使應(yīng)用指南推薦的吉西他濱聯(lián)合順鉑化療方案，平均生存期也不足12個(gè)月[4]。目前膽管癌治療主要依靠手術(shù)切除，但大多數(shù)患者確診時(shí)已是疾病的晚期，這也就造成了手術(shù)切除率低，總體預(yù)后差，術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)率亦非常高[5]。從而導(dǎo)致在醫(yī)療科技水平已得到快速發(fā)展、各種消化道腫瘤生存率普遍得到提高的今天，膽管癌5年生存率仍低于5%[6]。因此尋找一種新型、有效、特異性高的早期診斷標(biāo)志物已成為國內(nèi)外研究膽管癌的熱點(diǎn)。近年來隨著國內(nèi)外研究者對(duì)小RNA與膽管癌相關(guān)性研究的深入，人們?cè)絹碓秸J(rèn)識(shí)到包括環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）和微小RNA（microRNA，miRNA）在內(nèi)的非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移中扮演著越來越重要的角色。ncRNA是一種由基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生且不具有翻譯成蛋白質(zhì)功能的RNA。在人類基因組中除了2%可以最終編碼為蛋白質(zhì)的功能序列，其余98%均為非編碼序列[7]。這些非編碼序列可以在轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平以及表觀遺傳學(xué)水平上調(diào)控基因表達(dá)[8-10]。自Ambro和Ruvkun于1993年在秀麗隱桿線蟲（caenorhabditis elegans）中首次報(bào)道了lin-4這一小RNA分子后,關(guān)于ncRNA的研究即逐漸成為各國科學(xué)家的研究熱點(diǎn)[11-12]。近些年來越來越多的證據(jù)[13]表明ncRNA可以通過多種機(jī)制在基因組和染色體水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。本文就ncRNA中的miRNA、lncRNA和circRNA與膽管癌的關(guān)系做一簡(jiǎn)要綜述。

1 miRNA與膽管癌

miRNA是長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的ncRNA分子，廣泛存在于真核生物中。miRNA的主要作用方式是通過與靶mRNA 的3′非翻譯區(qū)（3′-untranslated region，3′-UTR）互補(bǔ)配對(duì)，引起mRNA的降解或者抑制蛋白質(zhì)的翻譯，從而得以在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控[14]。研究[15]發(fā)現(xiàn)miRNA可廣泛參與人體細(xì)胞的代謝、增殖、分化和凋亡、疾病發(fā)生發(fā)展和腫瘤形成等生理和病理過程。

1.1 miRNA的合成與作用機(jī)制

miRNA首先在細(xì)胞核內(nèi)由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄miRNA基因產(chǎn)生初級(jí)RNA（pri-miRNA）。隨后pri-miRNA 被1個(gè)由細(xì)胞核RNAeIII、Drosha 酶以及RNA結(jié)合蛋白輔因子Pasha組成的復(fù)合物切割加工成約70個(gè)核苷酸組成的前體miRNA（premiRNA）。然后在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白exportin5的幫助下，從細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中。最后pre-miRNA在細(xì)胞質(zhì)中被Dicer酶和RNA解旋酶共同作用降解成雙鏈RNA。2002年，在一項(xiàng)有關(guān)慢性淋巴細(xì)胞白血病的文獻(xiàn)[16]首次報(bào)道了miRNA與腫瘤的關(guān)系。研究[17]發(fā)現(xiàn)miRNA在機(jī)體內(nèi)可通過抑制原癌基因和抑癌基因而分別發(fā)揮抑癌基因和致癌基因的作用。同時(shí)miRNA也可通過影響某些蛋白質(zhì)的生成和從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的調(diào)控。

1.2 與膽管癌相關(guān)的miRNA

1.2.1 與膽管癌生物學(xué)特性相關(guān)的miRNA 近年來有眾多研究發(fā)現(xiàn)miRNA與膽管癌增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性具有相關(guān)性。Selaru等[18]研究發(fā)現(xiàn)抑制miR-21 將使膽管癌的細(xì)胞中的TMP3 蛋白表達(dá)增加從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。研究者認(rèn)為它的靶基因TMP3具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，同時(shí)也在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。Huang等[19]的研究發(fā)現(xiàn)那些有周圍組織侵襲與淋巴轉(zhuǎn)移患者膽管癌組織中miR-21呈現(xiàn)出明顯的高表達(dá)，研究者通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)敲除膽管癌細(xì)胞miR-21后發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力明顯減弱。Si等[20]的研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)抑制miR-21表達(dá)時(shí)抗凋亡基因Bcl-2在細(xì)胞中的表達(dá)也降低，細(xì)胞凋亡水平從而得到提高。另有研究[21]發(fā)現(xiàn)多種抑癌基因如TPM1、PDCD4、maspin及PTEN等均是miR-21的靶基因，而這些基因均與腫瘤的侵襲與凋亡均有相關(guān)性。類似的研究發(fā)現(xiàn)miR-31在膽管癌組織中表現(xiàn)出高表達(dá)，研究人員通過相關(guān)分析推測(cè)miR-31的靶基因是RASA1。在后續(xù)的試驗(yàn)中也證實(shí)miR-31是通過抑制RASA1 的表達(dá)從而促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和抑制凋亡[22]。Meng等[23]通過在實(shí)驗(yàn)鼠體內(nèi)種植膽管癌細(xì)胞和體外培養(yǎng)癌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)當(dāng)IL-6過表達(dá)時(shí)，miR-370表達(dá)受抑制而miR-370的靶基因MAP3K8表達(dá)增加，實(shí)驗(yàn)鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速度和體外培養(yǎng)癌細(xì)胞的增殖速度都增快，推斷可能miR-370表達(dá)的下調(diào)，降低了膽管癌組織對(duì)自身增殖的抑制。對(duì)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）過程有著重要作用的miR-200家族在膽管癌組織中也過表達(dá)[24]。miR-141是miR-200家族的重要成員，它的靶基因是可調(diào)節(jié)生理節(jié)律并在抑制細(xì)胞分裂促進(jìn)細(xì)胞凋亡也起重要作用的CLOCK基因。miR-141膽管癌中可通過抑制CLOCK基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖減少凋亡。

1.2.2 與膽管癌診斷、治療和預(yù)后相關(guān)的miRNA

膽管癌之所以5年生存期較短與其起病隱匿及缺乏有效的早期診斷指標(biāo)和對(duì)大部分化療藥物不敏感有較大關(guān)系。Meng等[24]通過對(duì)4種不同的膽管癌細(xì)胞進(jìn)行基因芯片技術(shù)檢測(cè)后橫向?qū)Ρ劝l(fā)現(xiàn)，明顯上調(diào)的miRNA有miR-320、miR-16-1、miR-21、Let7a-1、Let7c、Let7i-2。 因 為 miRNA具有組織學(xué)特異性，所以以上異常表達(dá)的miRNA將有助于膽管癌的診斷。另有日本學(xué)者[25]通過分析3種不同的細(xì)胞株篩選出miR-21、miR-125a、mir-127、miR-199a、miR-199a*、miR-214、miR-376a、miR-424這8種miRNA，并推斷他們可作為診斷膽管癌的新型標(biāo)志物。Patel等[26]通過分析從膽汁內(nèi)提取的細(xì)胞外囊泡發(fā)現(xiàn)，其中有多種miRNA穩(wěn)定表達(dá)，并且對(duì)于這些miRNA的檢測(cè)將有助于膽管癌的初步診斷。另有研究[27]通過類似的研究建立了一套具有潛在臨床價(jià)值的膽管癌診斷圖譜。Zabron等[28]通過對(duì)比分析膽管癌和膽道結(jié)石患者膽汁中miRNA發(fā)現(xiàn)，其中膽管癌患者膽汁中miR-106a的表達(dá)明顯增高。以上研究說明通過對(duì)膽汁中miRNA進(jìn)行分析檢測(cè)將有助于膽管癌患者的分子診斷。雖然現(xiàn)今化療是膽管癌除手術(shù)外的主要治療方式，但已有的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)多發(fā)現(xiàn)miRNA能調(diào)控膽管癌組織對(duì)化療藥物的敏感性。Peng等[29]發(fā)現(xiàn)在膽管癌組織中miR-200家族中的miR-200b和miR-200c表達(dá)明顯下調(diào)，且通過后續(xù)試驗(yàn)上調(diào)這兩個(gè)miRNA后腫瘤細(xì)胞對(duì)氟尿嘧啶的敏感性得到很大程度的提高。類似的研究[30]也發(fā)現(xiàn)在上調(diào)miR-205、miR-221和miR-29B表達(dá)水平后腫瘤細(xì)胞對(duì)吉西他濱的敏感性也得到提高。另有miR-204被發(fā)現(xiàn)在膽管癌組織中表達(dá)下調(diào)，而miR-24在膽管癌中的主要作用方式即是抑制抗凋亡基因Bcl-2家族從而提高細(xì)胞的抗藥性[31]。相關(guān)研究也表明miRNA含量與膽管癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。Silakit等[32]研究發(fā)現(xiàn)膽管癌患者血清中的miR-192 的表達(dá)水平就明顯高于正常人，而且血清中miR-192 的高表達(dá)的這些患者他們出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可行性也相對(duì)較大，生存期也明顯縮短。另有研究[33]發(fā)現(xiàn)miR-373表達(dá)水平較低的患者，其術(shù)后相對(duì)生存時(shí)間也明顯縮短。該研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-373表達(dá)水平較低的這部分患者腫瘤常處于進(jìn)展期且分化水平也相對(duì)較低。這些研究都說明檢測(cè)機(jī)體內(nèi)相關(guān)miRNA水平可能作為膽管癌患者的預(yù)后指標(biāo)。

1.3 miRNA與膽管癌的總結(jié)與展望

miRNA在膽管癌的發(fā)生與發(fā)展中扮演著很重要的作用，它不僅可以影響腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性。并且相關(guān)實(shí)驗(yàn)也提出可以通過測(cè)定組織或者血清中的miRNA含量來作為膽管癌初級(jí)診斷指標(biāo)，同時(shí)這些指標(biāo)也可以用來判斷患者的預(yù)后效果。展望未來，隨著miRNA與膽管癌相關(guān)性研究的深入，這些已經(jīng)發(fā)現(xiàn)和未被發(fā)現(xiàn)的miRNA分子將會(huì)為膽管癌的診斷與治療帶去新的思路。近年來與膽管癌研究有關(guān)的熱點(diǎn)miRNA見表1。

表1 與膽管癌研究有關(guān)的熱點(diǎn)miRNATable 1 Hot miRNAs associated with cholangiocarcinoma research

2 lncRNA與膽管癌

lncRNA是存在于細(xì)胞核或者細(xì)胞質(zhì)中長(zhǎng)度為200～100 000個(gè)核苷酸且無蛋白表達(dá)功能的RNA分子[34]。LncRNA具有組織特異性與疾病特異性，他可以通過表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄調(diào)控與翻譯調(diào)控等多個(gè)水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控從而影響多種生理與病理過程中[35]。

2.1 lncRNA的合成與作用機(jī)制

LncRNA廣泛存在于真核生物的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中，其中絕大多數(shù)lncRNA是RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的副產(chǎn)物[36]但目前對(duì)于lncRNA產(chǎn)生的確切機(jī)制并不明了。目前主要有以下幾種假說：⑴ 具有編碼蛋白質(zhì)功能的正?；蚪Y(jié)構(gòu)被破壞而形成lncRNA。⑵ 兩個(gè)獨(dú)立的未轉(zhuǎn)錄基因，在染色體重組后形成lncRNA。⑶ 轉(zhuǎn)座元件插入基因中而產(chǎn)生有功能的lncRNA。⑷ 由局部的串聯(lián)復(fù)制子產(chǎn)生鄰近的lncRNA。⑸ 非編碼基因復(fù)制過程中由于反移位作用而產(chǎn)生lncRNA。其主要作用機(jī)制為通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)修飾酶從而影響基因的表達(dá)，另外lncRNA也可以通過與許多蛋白質(zhì)結(jié)合形成lncRNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體從而對(duì)組蛋白起到某種修飾作用。

2.2 與膽管癌相關(guān)的lncRNA

2.2.1 與膽管癌生物學(xué)特性相關(guān)的lncRNA 腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移作用是導(dǎo)致膽管癌死亡和預(yù)后不良的一個(gè)重要原因。有研究首先通過生物信息學(xué)分析膽管癌組織芯片中的基因和lncRNA后發(fā)現(xiàn)其中CPS1基因與其轉(zhuǎn)錄的lncRNA即CPS1-IT1在膽管癌組織中均有高表達(dá)且兩者具有相關(guān)性。在后續(xù)的試驗(yàn)中研究者檢測(cè)了31例膽管癌患者的癌與癌旁組織中CPS1基因及CPS1-IT1的表達(dá)情況，并通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)測(cè)定兩者對(duì)膽管癌細(xì)胞系的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CPS1-IT1在癌組織中的表達(dá)量較癌旁組織相比顯著升高，在抑制CPS1-IT1表達(dá)后，膽管癌細(xì)胞系ICC-9810的增殖活力受到明顯促進(jìn)且凋亡率也相對(duì)降低，且CPS1-IT1表達(dá)量與患者淋巴結(jié)侵犯陽性率，術(shù)后生存率均有相關(guān)性[37]。同時(shí)CCAT1作為一種lncRNA可參與膽管癌的病理進(jìn)程，Jiang等[38]通過比較后發(fā)現(xiàn)CCAT1高表達(dá)的膽管癌患者生存期較低表達(dá)患者明顯縮短。且通過ROC曲線分析認(rèn)為其可作為膽管癌患者總體生存率的指標(biāo)（敏感度81.8%、特異度74.5%）。Zhang等[39]通過進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)LncR-CCAT1與膽管癌分級(jí)相關(guān)而且它可以通過抑制miR-152而促進(jìn)膽管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。研究[40]發(fā)現(xiàn)lncR-H19和lncR-HULC可以通過類似mi-RNA海綿作用結(jié)合let-7 和miR-372，而let-7和miR-372可分別作用于與膽管癌細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、侵襲有重要關(guān)聯(lián)的炎癥因子IL-6和趨化因子受體CXCR4而影響膽管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移及增殖分化。另有研究[41]發(fā)現(xiàn)lncR-H19的表達(dá)水平與患者不良預(yù)后有密切關(guān)系。研究者通過對(duì)56例患者預(yù)后分析發(fā)現(xiàn)，lncR-H19高表達(dá)者的5年生存率為0，而低表達(dá)者5年生存率為28%，同時(shí)前者的中位生存時(shí)間為29個(gè)月，而后者的中位生存時(shí)間可達(dá)42個(gè)月?？梢妉ncR-H19的表達(dá)程度與膽管癌患者臨床進(jìn)展有一定的相關(guān)性。

2.2.2 與膽管癌診斷、治療和預(yù)后相關(guān)的lncRNA

現(xiàn)有的研究表明，與正常組織相比腫瘤組織中某些lncRNA表達(dá)明顯較高，這些具有組織表達(dá)特異性的lncRNA，通?？勺鳛槟[瘤診斷的新分子標(biāo)志物。Zhang等[42]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常組織lncR-NEAT1在膽管癌組織中表達(dá)更高，研究者敲除腫瘤細(xì)胞中NEAT1后發(fā)現(xiàn)，膽管癌細(xì)胞中的CCK-8和E-鈣黏著蛋白的水平均受到影響，同時(shí)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力明顯下降。同時(shí)通過qRT-PCR方法研究發(fā)現(xiàn)lncR-AFAP1-AS1在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織[43]。且在調(diào)低AFAP1-AS1表達(dá)后腫瘤體積明顯縮小,生長(zhǎng)受到抑制?？梢奛EAT1和AFAP-1與腫瘤生長(zhǎng)、分化和轉(zhuǎn)移都有顯著關(guān)系因此兩者可作為膽管癌潛在的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。Wang等[44]通過生物信息分析系統(tǒng)對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，膽管癌組織中有2773種lncRNA較癌旁組織表達(dá)升高，另有2 392種lncRNA較癌旁組織表達(dá)降低。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)其中4對(duì)LncRNA-mRNA之間的相關(guān)性明顯較強(qiáng)，分別是RNA43085與SULF1、RNA47504與 KDM8、RNA58630與 PCSK6、RNA40057與CYP2D6。而且這4個(gè)lncRNA在癌與癌旁組織中表達(dá)具有明顯的差異性。研究進(jìn)一步通過生存曲線研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中RNA40057表達(dá)水平較高的那部分患者預(yù)后較好，RNA40057有望成為膽管癌預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子。另有研究[45]表明lncR-MALAT1同樣可對(duì)膽管癌的預(yù)后產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)lncR-MALAT1在組織中表達(dá)水平與腫瘤大小，膽管癌分期和是否有周圍神經(jīng)侵犯有關(guān)，且在敲除MALAT1后膽管癌細(xì)胞的增殖、遷徙與轉(zhuǎn)移能力明顯減弱。進(jìn)一步研究[46]發(fā)現(xiàn)lncRMALAT1在膽管癌中通過激動(dòng)PI3K/Akt信號(hào)通路和誘發(fā)EMT進(jìn)程而對(duì)膽管癌的預(yù)后產(chǎn)生影響。

2.3 lncRNA與膽管癌的總結(jié)與展望

已有的研究發(fā)現(xiàn)lncRNA參與了腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程，對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但lncRNA在生物體中不僅數(shù)量龐大、種目繁多而且結(jié)構(gòu)復(fù)雜。目前對(duì)于lncRNA與膽管癌相關(guān)聯(lián)的研究多停留于表達(dá)水平的差異，對(duì)于lncRNA的研究還有很多空白，筆者認(rèn)為后續(xù)研究中可以通過分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等手段更好更深入的研究lncRNA對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展的影響。近年來與膽管癌研究有關(guān)的熱點(diǎn)lncRNA參見表2。

表2 與膽管癌研究有關(guān)的熱點(diǎn)lncRNATable 2 Hot lncRNA s associated with cholangiocarcinoma research

3 circRNA與膽管癌

circRNA是一種特殊的內(nèi)源性RNA，它廣泛穩(wěn)定存在于真核細(xì)胞中，且同時(shí)具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、組織特異性和進(jìn)化保守性[47]。在結(jié)構(gòu)上它與含有5'帽狀結(jié)構(gòu)與3'腺苷酸尾的線性RNA不同的是circRNA具有特殊的共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，它不僅沒有5'-3'極性，更無多聚腺苷酸尾[48]。功能上它多屬于ncRNA，可作為內(nèi)源競(jìng)爭(zhēng)性RNA參與基因的表達(dá)與調(diào)控[49]，從而影響組織生長(zhǎng)發(fā)育[50]以及某些疾病的發(fā)生與發(fā)展。

3.1 circRNA的合成與作用機(jī)制

目前公認(rèn)的circRNA合成方式主要有以下3種[47]：⑴ 套索驅(qū)動(dòng)環(huán)化，即通過外顯子跳躍使外顯子剪接供體3'端與受體5'端共價(jià)結(jié)合，然后切除內(nèi)含子形成circRNA；⑵ 內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化，即兩個(gè)前體RNA的內(nèi)含子之間由堿基配對(duì)形成套索。然后其3'端與5'端共價(jià)結(jié)合，然后切除內(nèi)含子形成circRNA；⑶ 自我剪接環(huán)化，即單個(gè)內(nèi)含子自我剪接環(huán)化形成circRNA[51]。而circRNA可通過參與以下方面影響細(xì)胞進(jìn)程：⑴ 參與調(diào)控基因表達(dá)，circRNA可以通過與轉(zhuǎn)錄調(diào)控原件如RNA聚合酶II相互作用以順勢(shì)反應(yīng)方式調(diào)控宿主轉(zhuǎn)錄效率[51]；⑵ 參與編碼蛋白質(zhì)，Wang等[52]發(fā)現(xiàn)在起始密碼子上游加入IRES（核糖體進(jìn)入位點(diǎn)）后，可幫助一些因?yàn)闆]有5'帽狀結(jié)構(gòu)與3'腺苷酸尾而缺少IRES的外源性circRNA結(jié)合核糖體，從而得以翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)；⑶ miRNA分子海綿作用：部分circRNA具有miRNA的結(jié)合位點(diǎn)，它能夠通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miRNA來抑制其對(duì)mRNA的降解作用，從而得以影響基因表達(dá)[53]；⑷ 參與調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄與選擇性拼接，研究[54]發(fā)現(xiàn)circRNA通過隔離翻譯起始密碼子方式而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。另有研究[55]發(fā)現(xiàn)circRNA可通過與拼接因子結(jié)合方式而影響選擇性拼接。

3.2 與膽管癌相關(guān)的circRNA

Xu等[56]通過對(duì)76對(duì)膽管癌患者癌與癌旁組織比較發(fā)現(xiàn)癌組織中has-circRNA-0001649較癌旁明顯降低。同時(shí)通過熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)與正常膽管細(xì)胞系HIBEC比較膽管癌細(xì)胞系KMBC、CCLP1、HCCC-9810、RBE、Huh-28、HuCCT1中has-circRNA-0001649也明顯降低。通過收集患者手術(shù)資料并且進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后結(jié)果表明，has-circRNA-0001649的下調(diào)影響腫瘤大小與分化程度。此外，通過細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)他們發(fā)現(xiàn)hascircRNA-0001649過表達(dá)之后會(huì)抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并且has-circRNA-0001649可以通過誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞KMBC和Huh-28凋亡而引起腫瘤抑制作用。除此之外，Jiang等[57]通過熒光定量PCR比較分析55對(duì)膽管癌患者癌與癌旁組織后發(fā)現(xiàn)circRNA-Cdr1as在腫瘤組織中表達(dá)明顯高于腫瘤旁正常組織，并且同時(shí)發(fā)現(xiàn)circRNA-Cdr1as表達(dá)量相對(duì)較高的患者，其總體生存率較低，研究者通過多變量分析表明circRNA-Cdr1as可以作為判斷膽管癌預(yù)后的獨(dú)立生物學(xué)標(biāo)志物。

3.3 circRNA與膽管癌的研究展望

目前已有的研究circRNA與腫瘤相關(guān)性的文章發(fā)現(xiàn)，circRNA可以通過調(diào)控Wnt通路與EMT進(jìn)程而影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[58-59]，推測(cè)circRNA也可以通過上述兩條途徑對(duì)膽管癌的生物學(xué)進(jìn)程產(chǎn)生影響。雖然目前沒有研究直接闡明膽管癌與circRNA之間存在相關(guān)性，但可以相信通過深入研究那些參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡等過程的circRNA，circRNA與膽管癌相關(guān)性面紗終有一日會(huì)揭開，同時(shí)對(duì)膽道腫瘤癌變機(jī)制的認(rèn)識(shí)也將更加深刻。

4 ncRNA與膽管癌的臨床與治療

綜上所述ncRNA在膽管癌細(xì)胞中可以通過影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞周期、EMT進(jìn)程和對(duì)化療藥物的耐藥性等生物學(xué)行為從而影響膽管癌患者的病情進(jìn)展與預(yù)后治療。雖然目前手術(shù)切除是膽管癌治療的唯一手段，但隨著研究的不斷深入，靶向治療將會(huì)成為越來越有效的另一種治療選擇。通過研究ncRNA在膽管癌中的差異性表達(dá)從而繪制出與膽管癌相關(guān)的ncRNA表達(dá)譜，這將在一定程度上幫助膽管癌的早期診斷。同時(shí)在基因水平上對(duì)這些ncRNA運(yùn)用反義核苷酸技術(shù)使癌細(xì)胞中異常表達(dá)的基因或者蛋白質(zhì)恢復(fù)正常表達(dá)也將有助于膽管癌的非手術(shù)治療。

5 小結(jié)與展望

ncRNA在膽管癌的發(fā)生發(fā)展中扮演了非常重要的角色。它們通過參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞基因的表達(dá)，對(duì)膽管癌的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生影響。同時(shí)也可以通過它們的表達(dá)水平對(duì)膽管癌患者的預(yù)后情況作出預(yù)測(cè)。但目前的研究對(duì)于ncRNA影響膽管癌腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和凋亡能力的機(jī)制尚不完全清晰。筆者預(yù)測(cè)這也將成為下一階段學(xué)界對(duì)ncRNA與膽管癌相關(guān)性研究的又一熱點(diǎn)。相信隨著研究的深入，對(duì)膽管癌的發(fā)病機(jī)制將會(huì)有更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)，同時(shí)這也將為膽管癌的臨床治療提供新的思路。