非脫羧勒克菌wt16對 黃曲霉菌生長與產(chǎn)毒的抑制作用

王 同,謝華里,王 婷,馬向東,李培武,3,*,張 奇

(1.湖北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/生物資源綠色轉(zhuǎn)化湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心,湖北武漢 430062; 2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所,農(nóng)業(yè)部油料作物生物學(xué) 與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北武漢 430062; 3.農(nóng)業(yè)部油料產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)業(yè)部油料 及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心,湖北武漢 430062)

黃曲霉菌(Aspergillusflavus),是腐生性的病原真菌。主要存在于玉米、棉花、花生以及許多干果和香料中。分離出來的大多黃曲霉菌都能產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物黃曲霉毒B1(AFB1),它具有致癌性、致畸性、免疫抑制性,被認(rèn)定為自然界中危害性最大的生物毒素之一[1-4]。黃曲霉毒素污染是極其棘手的食品安全問題,黃曲霉毒素除對人畜的健康造成極大的危害外,也會對社會經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失[5-8]。因此如何有效地防治黃曲霉的污染具有十分重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

黃曲霉及其毒素污染防控一直是國際國內(nèi)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn),黃曲霉毒素的防治方法主要有物理、化學(xué)、生物三種方法,但物理法費(fèi)時費(fèi)力、去毒力不高,化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境有較大危害,而利用生物防治法來抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的技術(shù)處理?xiàng)l件比較溫和,對產(chǎn)品質(zhì)量影響較小,有利于環(huán)境保護(hù)及人體健康[9]。因此,綠色防控技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)前發(fā)展趨勢。黃曲霉及其毒素污染的生物防控是重要發(fā)展方向。

目前,黃曲霉毒素生物防治技術(shù)主要包括利用不產(chǎn)毒霉菌[10-11]、拮抗微生物[12]及其活性物質(zhì)[13]、植物源活性物質(zhì)[14]來抑制黃曲霉的產(chǎn)毒及生長。研究乳酸菌對乳制品中黃曲霉毒素污染的生防作用,發(fā)現(xiàn)乳酸菌可以抑制黃曲霉生長及黃曲霉毒素B1的產(chǎn)生[15],乳酸菌屬的許多菌株,包括丙酸桿菌屬Propionibacterium[16]、乳球菌Lactococcus[17]、雙歧桿菌Bifi-dobacterium[18]和乳酸桿菌屬Lactobacillus[19]等,均具有抑制黃曲霉生長及產(chǎn)毒的作用,但乳酸菌屬厭氧菌,在實(shí)際應(yīng)用過程中難以保證厭氧的環(huán)境,從而限制了乳酸菌作為拮抗菌的實(shí)際應(yīng)用[20]。孔青等[21]發(fā)現(xiàn)一株海洋巨大芽孢桿菌可以抑制黃曲霉毒素的產(chǎn)生,其在培養(yǎng)基中抑制率約為87%,并且此株巨大芽孢桿菌只可在受機(jī)械損傷的花生上抑制黃曲霉毒素的生物合成。

隨著人們對綠色環(huán)保理念的興起,生物防治黃曲霉菌侵染及其毒素產(chǎn)生成為一種主流研究方向。非脫羧勒克菌(Leclerciaadecarboxylata)wt16,是非脫羧勒克菌屬惟一的1個菌種,是腸桿菌科的一種具有動力的革蘭陰性桿菌,通常來源于環(huán)境和動物[22],于1962年被發(fā)現(xiàn),生化特性與大腸埃希菌相似,其對黃曲霉的生防作用此前并未見報(bào)道,本研究首次將該非脫羧勒克菌wt16菌株進(jìn)行對黃曲霉菌生長及產(chǎn)毒的研究,并找出其有效作用成分,因此本文為日后研究分離鑒定非脫羧勒克菌wt16分泌的有效抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物提供了理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

非脫羧勒克菌wt16 分離自湖北黃陂,保存于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所;7個高產(chǎn)毒黃曲霉菌株73、271、393-2、54、pc157-2、pg11、pc400 為本實(shí)驗(yàn)室前期分別從廣西北海、福建郡武、湖北黃陂、福建泉州、南昌進(jìn)賢、江西樟樹、湖北紅安分離獲得;大腸桿菌(E.coli) 為本實(shí)驗(yàn)室分離保存;PDA培養(yǎng)基 美國BD公司;LB固體培養(yǎng)基、沙氏液體培養(yǎng)基 青島高科技工業(yè)園海博生物科技有限公司;乙醇、吐溫80、丙三醇、磷酸鹽緩沖液(PBS) 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;甲醇 安徽時聯(lián)特種溶劑股份有限公司。

恒溫培養(yǎng)振蕩器 天津市歐諾儀器儀表有限公司;LEICA DMLS型光學(xué)顯微鏡 德國LEICA公司;SU8010型高分辨場發(fā)射掃描電鏡 日本HITACHI公司;AUTESTER-E30型高壓滅菌鍋 西班牙J.PSELECTA公司;WFO-400型干燥箱 上海愛朗儀器有限公司;CPA224S型電子天平 德國Sartorius公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 非脫羧勒克菌wt16種子液的制備 LB固體平板上活化非脫羧勒克菌wt16菌株,37 ℃培養(yǎng)箱放置24 h,挑取單菌落于液體LB試管中,置于搖床中發(fā)酵,200 r/min,37 ℃,培養(yǎng)12 h。在實(shí)驗(yàn)過程中通過菌懸液濃度與吸光度值的回歸方程進(jìn)行計(jì)算[23-24],將后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需菌懸液濃度配制成107CFU/mL。

1.2.2 黃曲霉菌孢子懸浮液的制備 7種黃曲霉菌株(73、271、393-2、54、pc157-2、pg11、pc400)分別在PDA培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)7 d后,用無菌水(含0.1%的吐溫80)將孢子從培養(yǎng)基上洗下,用血球板計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)[25]。

1.2.3 非脫羧勒克菌wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌生長的影響 將非脫羧勒克菌wt16菌液(1×107CFU/mL)和7種不同地區(qū)的黃曲霉菌孢子懸液(5×105個/mL)同時接種于15 mL沙氏液體培養(yǎng)基中,以無菌培養(yǎng)液為空白、以大腸桿菌培養(yǎng)液(1×107CFU/mL)為對照替代非脫羧勒克菌wt16菌液,28 ℃培養(yǎng)5 d,分別測定菌絲干重。

1.2.4 菌絲干重的測定 以Whatman No. 4濾紙過濾培養(yǎng)液,得到的菌絲于80 ℃烘干至恒重后,稱重[26]。根據(jù)抑制率(%)=(對照組菌絲干重-處理組延菌絲干重)/對照組菌絲干重×100%,計(jì)算對黃曲霉菌絲生長的抑制率。

1.2.5 非脫羧勒克菌wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌產(chǎn)毒的影響 將非脫羧勒克菌wt16菌液(1×107CFU/mL)和7種不同地區(qū)黃曲霉孢子懸液(5×105個/mL)同時接種于15 mL沙氏液體培養(yǎng)基中,對照組分別以無菌培養(yǎng)液、大腸桿菌培養(yǎng)液(1×107CFU/mL)替代非脫羧勒克菌wt16菌液,28 ℃培養(yǎng)5 d,取1 mL培養(yǎng)液測定其黃曲霉毒素B1(AFB1)含量[27-28]。抑制率(%)=(對照組毒素含量-處理組毒素含量)/對照組毒素含量×100。

1.2.6 黃曲霉毒素的定量檢測 將不同地區(qū)黃曲霉菌株在沙氏液體培養(yǎng)基中于28 ℃培養(yǎng)7 d,產(chǎn)生孢子后用無菌吐溫水沖洗孢子制成孢子菌懸液,以終濃度為5×105個/mL 在沙氏液體培養(yǎng)基中于28 ℃培養(yǎng)5 d,雙層Whatman No. 4濾紙過濾后用免疫親和柱-HPLC法檢測培養(yǎng)液中的黃曲霉毒素B1的含量。

取1 mL待測液過免疫親和柱,將黃曲霉毒素截留,用1 mL的甲醇洗脫,進(jìn)行高效液相分析,HPLC檢測條件為:色譜柱:Boston Boschrom ODS,4.6×150 Vmm,5 Vμm;流動相:甲醇45%,水55%;光衍生流速:1 mL/min進(jìn)樣量:10 μL;熒光檢測器激發(fā)波長:360 nm;發(fā)射波長:440 nm。

1.2.7 非脫羧勒克菌wt16在花生粉上對黃曲霉73菌生長與產(chǎn)毒的影響 將采集于湖北花生地,大小、成熟度均勻一致,無腐爛的花生顆粒研磨成花生粉,稱取1 g該花生粉于培養(yǎng)皿中,同時加入1 mL產(chǎn)毒力較居中的黃曲霉菌73孢子液(5×105個/mL)及1 mL非脫羧勒克菌wt16菌液(1×107CFU/mL),以沙氏培養(yǎng)基代替非脫羧勒克菌wt16菌液為對照,在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d后加入15 mL 70%甲醇水,渦旋后放入搖床30 min。取3 mL上清加入8 mL超純水渦旋離心,取8 mL上清用免疫親和柱-HPLC法測定黃曲霉毒素B1的含量。抑制率(%)=(對照組毒素含量-處理組毒素含量)/對照組毒素含量×100。

1.2.8 非脫羧勒克菌wt16在花生顆粒上對黃曲霉菌73生長與產(chǎn)毒的影響 取采集于湖北花生地,大小、成熟度均勻一致,無腐爛無機(jī)械損傷的花生顆?；ㄉ?0粒,將非脫羧勒克菌wt16菌液(1×107CFU/mL)包覆在花生表面,同時加入1 mL黃曲霉菌73孢子液(5×105個/mL),以沙氏培養(yǎng)基代替wt16菌液為對照;將已接種后的花生粒在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9 d后,觀察其生長情況,然后將花生粒研磨成花生粉,加入15 mL 70%甲醇水,渦旋后放入搖床30 min。取3 mL上清加入8 mL超純水渦旋離心,取8 mL上清用免疫親和柱-HPLC法測定黃曲霉毒素B1的含量。抑制率(%)=(對照組毒素含量-處理組毒素含量)/對照組毒素含量×100。

1.2.9 非脫羧勒克菌wt16菌株對黃曲霉菌73株形態(tài)影響掃描電鏡分析 將非脫羧勒克菌wt16菌液(1×107CFU/mL)和黃曲霉菌73孢子懸液(5×105個/mL)同時接種于15 mL沙氏液體培養(yǎng)基中,對照組分別以無菌培養(yǎng)液為對照,在28 ℃,200 r/min培養(yǎng)5 d,將培養(yǎng)好的黃曲霉菌絲經(jīng)3000 r/min離心8 min富集沉淀,取沉淀浸入磷酸鹽緩沖液PBS(0.1 mol/L、pH7.2、不含NaCl)中,漂洗細(xì)胞或組織數(shù)次,3000 r/min離心8 min去上清,加4 ℃預(yù)冷的戊二醛,在4 ℃固定4 h,吸出固定劑,用PBS浸洗3次。用系列梯度乙醇(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%)分別脫水1次,再用100%乙醇徹底脫水2次,接下來加醋酸異戊酯2次后使其自然干燥。用真空噴鍍法噴鍍均勻,完成后在掃描電鏡下分別放大100倍、2000倍、5000倍、20000倍進(jìn)行觀察。

1.2.10 非脫羧勒克菌wt16菌株不同發(fā)酵組分對黃曲霉73的影響 為了探究非脫羧勒克菌wt16不同組分對黃曲霉菌73的影響,將wt16菌株進(jìn)行了3組處理,處理如下:處理Ⅰ:將非脫羧勒克菌wt16菌液以12000 r/min離心20 min后取其上清液用0.22 μm無菌濾膜過濾制備無菌發(fā)酵上清液,在上清液中加入黃曲霉73孢子液培養(yǎng)5 d;處理Ⅱ:將非脫羧勒克菌wt16菌株發(fā)酵上清液以121 ℃高溫處理30 min后加入黃曲霉73孢子液培養(yǎng)5 d;處理Ⅲ:非脫羧勒克菌wt16菌株發(fā)酵液121 ℃高溫處理30 min滅活后的死菌體將用無菌水洗滌3遍后用沙氏液體培養(yǎng)基溶解,加入黃曲霉73孢子液后培養(yǎng)5 d;并進(jìn)行兩組對照:對照Ⅰ:以無菌培養(yǎng)基為對照,在沙氏液體培養(yǎng)基中加入黃曲霉73孢子液培養(yǎng)5 d;對照Ⅱ以大腸桿菌作為對照菌株將其(107CFU/mL)加入沙氏液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)5 d后,加入黃曲霉73孢子液培養(yǎng)5 d。將以上處理測其菌絲干重及其黃曲霉73毒素含量。

1.2.11 發(fā)酵時間對非脫羧勒克菌wt16菌株有效成分的影響 將非脫羧勒克菌wt16菌株(107CFU/mL)加入到沙氏液體培養(yǎng)基中,在200 r/min,28 ℃搖床中分別培養(yǎng)1、2、3、4、5、6、7、8、9 d,以12000 r/min離心20 min,121 ℃高溫30 min制備無菌上清液,在其中加入黃曲霉73孢子液(5×105個/mL),在200 r/min,28 ℃搖床中培養(yǎng)5 d后測其黃曲霉毒素含量。

1.2.12 發(fā)酵溫度對非脫羧勒克菌wt16菌株有效成分的影響 分別在10、15、20、25、30、35、40、45 ℃條件下,200 r/min搖床培養(yǎng)非脫羧勒克菌wt16菌液5 d,以12000 r/min離心20 min,121 ℃高溫處理30 min制備上清液,加入黃曲霉73孢子液(5×105個/mL),在200 r/min,28 ℃搖床中培養(yǎng)5 d后測其黃曲霉73毒素含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)內(nèi)設(shè)3個重復(fù),數(shù)據(jù)采用Excel分析處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 非脫羧勒克菌wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌生長的影響

由圖1可知,在沙氏液體培養(yǎng)基中,與對照組相比,非脫羧勒克菌wt16菌株能使不同地區(qū)黃曲霉菌絲干重明顯降低,其抑制率最低為77%,最高為92%,而與對照菌株大腸桿菌共培養(yǎng)的不同地區(qū)黃曲霉菌菌絲干重并未明顯降低,表明wt16能有效抑制不同地區(qū)黃曲霉菌的生長。

圖1 wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌生長的影響Fig.1 Effect of wt16 on the growth of Aspergillus flavus from different regions

2.2 非脫羧勒克菌wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌產(chǎn)毒的影響

由圖2可知,在沙氏液體培養(yǎng)基中,與對照組相比,非脫羧勒克菌wt16菌株能使不同地區(qū)黃曲霉菌合成的毒素明顯降低,其抑毒率最低為90%,最高為96%,而與大腸桿菌共培養(yǎng)的不同地區(qū)黃曲霉菌產(chǎn)毒并未明顯降低,表明wt16能有效抑制不同地區(qū)黃曲霉菌的產(chǎn)毒。

圖2 wt16對不同地區(qū)黃曲霉菌產(chǎn)毒的影響Fig.2 Effect of wt16 on toxin production of Aspergillus flavus from different regions

2.3 非脫羧勒克菌wt16在花生粉上對不同地區(qū)黃曲霉73菌生長與產(chǎn)毒的影響

為了探究非脫羧勒克菌wt16菌株是否也能應(yīng)用于營養(yǎng)條件復(fù)雜的花生中,本實(shí)驗(yàn)在花生粉上同時接種黃曲霉73菌及非脫羧勒克菌wt16。由圖3可知,在花生粉上,經(jīng)由黃曲霉73菌侵染的花生粉上長滿了黃綠色黃黃曲霉孢子,而非脫羧勒克菌wt16與黃曲霉73菌共培養(yǎng)的花生粉上黃曲霉孢子明顯減少,說明wt16菌株能明顯抑制黃曲霉生長;由圖4可知,與對照相比,經(jīng)黃曲霉菌侵染的花生粉經(jīng)非脫羧勒克菌wt16處理后,處理組中黃曲霉73毒素B1含量明顯低于對照組,其抑制率達(dá)83.19%。

圖3 wt16在花生粉上對黃曲霉生長的影響Fig.3 Effect of wt16 on the growth of Aspergillus flavus 73 in the peanut powers注:(A)為經(jīng)由黃曲霉菌73侵染的花生粉;(B)為黃曲霉菌73與wt16共培養(yǎng)的花生粉。

圖4 wt16在花生粉上對黃曲霉菌73產(chǎn)毒的影響Fig.4 Effect of wt16 on toxin production of Aspergillus flavus 73 in the peanut powers

2.4 非脫羧勒克菌wt16在花生顆粒上對黃曲霉73菌生長與產(chǎn)毒的影響

為了探究研究非脫羧勒克菌wt16菌株在無機(jī)械損傷的花生粒上是否也有抑制黃曲霉73生長及產(chǎn)毒的作用,本實(shí)驗(yàn)在花生粒上同時接種黃曲霉及非脫羧勒克菌wt16。由圖5可知,在花生上,經(jīng)由黃曲霉73菌侵染的花生粒表面長出許多黃綠色的孢子,而黃曲霉73與非脫羧勒克菌wt16共培養(yǎng)的花生粒上黃曲霉孢子明顯減少,說明wt16菌株能顯著抑制黃曲霉生長;由圖6可知,與對照相比,經(jīng)黃曲霉73菌侵染的花生粒經(jīng)wt16處理后,處理組中黃曲霉73毒素B1含量明顯比對照組低,其抑制率達(dá)88.64%。

圖5 wt16在花生粒上對黃曲霉菌73生長的影響Fig.5 Effect of wt16 on growth of Aspergillus flavus 73 in the peanuts注:圖A為黃曲霉菌T3與wt16共培養(yǎng)的花生粒; 圖B為經(jīng)由黃曲霉菌73侵染的花生粒。

圖6 wt16在花生顆粒上對黃曲霉73菌產(chǎn)毒的影響Fig.6 Effect of wt16 on toxin production of Aspergillus flavus 73 in the peanuts

2.5 非脫羧勒克菌wt16菌株對黃曲霉73菌株形態(tài)影響掃描電鏡分析

黃曲霉菌73在沙氏液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)5 d后可觀察到,黃曲霉73可形成規(guī)則的菌絲球體,單個菌絲呈細(xì)長型,表面有絨毛(圖7A),而與非脫羧勒克菌wt16作用后,黃曲霉73菌絲會聚集成不規(guī)則形狀,單個菌絲會由細(xì)長型斷裂成小截形態(tài),菌絲表面會變得較光滑(圖7B)。

圖7 wt16菌株對黃曲霉菌株形態(tài)影響掃描電鏡圖Fig.7 Scanning electron microscopy(SEM) images of A.flavus effected by wt16注:(A)為黃曲霉73菌絲體在掃描電鏡下放大100×、 2000×、5000×、20000×的形態(tài)圖;(B)為與wt16菌株 作用過后的黃曲霉73菌絲體在掃描電鏡下 放大100×、2000×、5000×、20000×的形態(tài)圖。

2.6 非脫羧勒克菌wt16菌株不同發(fā)酵組分對黃曲霉73菌的影響

由表1可知,與對照Ⅰ相比,非脫羧勒克菌wt16上清液能抑制黃曲霉73菌的生長及產(chǎn)毒,進(jìn)行高溫處理后的上清液只能抑制黃曲霉73菌的產(chǎn)毒而不能抑制黃曲霉73菌的生長,非脫羧勒克菌wt16的死菌體對黃曲霉73菌沒有作用,而大腸桿菌的上清液(對照Ⅱ)不能抑制黃曲霉73菌產(chǎn)毒,說明非脫羧勒克菌wt16上清中有某種代謝產(chǎn)物對黃曲霉菌株73菌的產(chǎn)毒和生長有抑制作用,并且其代謝產(chǎn)物中有某些可以抑制黃曲霉73菌生長的產(chǎn)物在經(jīng)高溫處理后會失去抑制作用,而高溫對能抑制產(chǎn)毒的代謝物質(zhì)無影響。

表1 wt16不同組分對黃曲霉73菌的影響(n=3)Table 1 The influence of different components of wt16 on A.flavus 73(n=3)

2.7 發(fā)酵時間對非脫羧勒克菌wt16菌株有效成分的影響

由圖8可知,對照組中黃曲霉毒素含量為(237.27±13.63) ng/mL,黃曲霉73菌在培養(yǎng)1 d的非脫羧勒克菌wt16上清液中生長5 d后產(chǎn)毒量為(30.83±3.59) ng/mL,其抑制率為87%,1～3 d對黃曲霉菌73的產(chǎn)毒抑制率差異性不顯著(p>0.05),6 d培養(yǎng)出來的wt16上清液對黃曲霉菌73的產(chǎn)毒抑制率最高,其毒素含量為(11.5±3.08) ng/mL,抑制率達(dá)93.85%,但4～9 d的抑制率差異性不顯著(p>0.05),因此wt16培養(yǎng)時間超過4 d最佳。

2.8 發(fā)酵溫度對非脫羧勒克菌wt16有效成分的影響

由圖9可知,在10 ℃時wt16菌株會變性,菌液變粘稠,無法離心制備wt16菌株的發(fā)酵上清液,在45 ℃時wt16菌株不生長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),對照組毒素含量為(294.71±6.65) ng/mL,在40 ℃培養(yǎng)時wt16發(fā)酵上清液對黃曲霉73菌的產(chǎn)毒抑制率最高,其毒素含量為(11.61±4.04) ng/mL,對黃曲霉73菌的產(chǎn)毒抑制率達(dá)96.1%,其余溫度毒素含量差異性不顯著(p>0.05),因此wt16培養(yǎng)溫度在15～40 ℃均可。

圖9 發(fā)酵溫度對wt16有效成分的影響Fig.9 Effect of different temperatures of wt16 on control of A. flavus

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在前期篩選獲得一株非脫羧勒克菌wt16的基礎(chǔ)上,首次研究表征了非脫羧勒克菌wt16對黃曲霉具有抑生長性及抑毒性,研究發(fā)現(xiàn)在液體培養(yǎng)基中,非脫羧勒克菌wt16能明顯抑制黃曲霉菌的生長及產(chǎn)毒,并且對不同地區(qū)分離出來的黃曲霉菌均有抑制作用,其對黃曲霉菌絲生長抑制率達(dá)77%、92%，對黃曲霉菌產(chǎn)毒的抑制率達(dá)90%～96%,對有無損傷的花生均能抑制黃曲霉菌的生長及產(chǎn)毒。用掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)非脫羧勒克菌wt16能改變黃曲霉菌菌絲形態(tài)。非脫羧勒克菌wt16在15～40 ℃條件下培養(yǎng)4 d后,其發(fā)酵上清液對黃曲霉菌產(chǎn)毒抑制率最高。

雖然黃曲霉毒素的生物防治取得了一定的研究進(jìn)展,但目前的研究仍存在許多不足之處,對其有效抑菌成分的研究還缺乏深入的探討,如果能分離鑒定出確切的抑菌成分,將會加速生防黃曲霉毒素研究的進(jìn)程,初步認(rèn)為該非脫羧勒克菌wt16菌株能通過產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物來抑制黃曲霉的生長及產(chǎn)毒,這個結(jié)果與其他拮抗劑如枯草芽孢桿菌[29]及短小芽孢桿菌[30]的研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)非脫羧勒克菌wt16對黃曲霉的生長及產(chǎn)毒有很好的抑制作用,具有潛在的應(yīng)用價值,但由于本實(shí)驗(yàn)未做安全性評價,為了避免活菌影響,本實(shí)驗(yàn)室將進(jìn)一步研究非脫羧勒克菌wt16上清液內(nèi)的有效活性成分,再利用對環(huán)境無害的活性成分進(jìn)行黃曲霉菌生物防治的應(yīng)用。