姜黃素對乙型病毒性肝炎模型大鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1、腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平的影響

胡金杰 王文生 陶 然

(海西州人民醫(yī)院感染科，青海 海西 817099)

乙型病毒性肝炎(乙肝)不僅影響患者的肝功能，如不及時控制病情可引發(fā)肝纖維化，常表現(xiàn)為肝組織修復(fù)異?！?〕。因此，改善乙肝患者的肝功能及延緩肝纖維化是提高乙肝臨床治療的關(guān)鍵。姜黃素(Cur)屬于酚類化合物，作為中藥材姜黃的提取物〔2〕，具有廣泛的藥理學(xué)作用，如調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡〔3〕、清除氧自由基〔4〕及抑制腫瘤生長〔5〕等。近年來發(fā)現(xiàn)Cur具有較強(qiáng)的肝保護(hù)作用，如對四氯化碳致實驗性肝纖維化大鼠有抗肝纖維化作用〔6〕，對膽管結(jié)扎后大鼠有較強(qiáng)的保肝作用〔7〕，對雷公藤甲素肝損傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用〔8〕。此外，有研究指出Cur具有較強(qiáng)的抗乙型肝炎病毒的效果〔9〕。鑒于Cur較強(qiáng)的抗病毒及肝功能保護(hù)作用，本研究推測Cur有助于改善乙肝的肝功能并逆轉(zhuǎn)肝纖維化過程。為此，本研究給予乙肝大鼠Cur治療，并進(jìn)一步分析其對轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1主要試劑 乙肝病毒抗原購自北京動物傳染病實驗研究中心。Cur購自美國Sigma公司，丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)測定試劑盒購自上海玉蘭生物技術(shù)研究所，血清總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)測定試劑盒購自南京建成生物科技有限公司，透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)和TGF-β1酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測試劑盒購自美國Thermo Fisher公司，Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、TNF-α ELISA檢測試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。

1.2動物模型與分組 采用雄性SD大鼠(體重220～250 g，北京維通利華公司提供，SPF級)尾靜脈感染乙型肝炎病毒制備乙肝模型，根據(jù)文獻(xiàn)〔10〕采用Hank調(diào)試劑將乙肝病毒抗原稀釋至1×106/ml，每只10 ml/kg尾靜脈注射，每周1次，連續(xù)3 w。將60只模型大鼠隨機(jī)分為模型組和Cur組，每組30只，分別每日灌服生理鹽水和20 mg/kg Cur，體積為5 ml。另取30只正常SD大鼠灌服生理鹽水作對照組。本實驗所用大鼠均于適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后進(jìn)行造模，整個實驗過程飼養(yǎng)于SPF級實驗動物房。

1.3肝功能及肝纖維化相關(guān)指標(biāo)檢測 藥物干預(yù)結(jié)束即8 w后每組各選取6只大鼠，深度麻醉后開胸心臟采血5 ml，3 000 r/min離心15 min，分離血清，采用日立7600型全自動生化儀檢測ALT、AST水平，采用酶法檢測TBIL、DBIL水平，采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測HA、LN和PCⅢ水平，整個操作過程均嚴(yán)格遵循試劑盒說明書。

1.4血清TGF-β1、TNF-α水平檢測 藥物干預(yù)期間連續(xù)選取4個觀察點(2、4、6、8 w)，每組選取6只大鼠，血標(biāo)本采集及血清分離步驟同1.3，采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測血清TGF-β1、TNF-α水平，整個操作過程嚴(yán)格遵循試劑盒說明書。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件行t檢驗、單因素分析。

2 結(jié) 果

2.1各組肝功能相關(guān)指標(biāo)比較 與對照組相比，模型組ALT、AST、TBIL和DBIL水平升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Cur組的ALT、AST、TBIL和DBIL水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組肝功能相關(guān)指標(biāo)比較

與對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.2各組肝纖維化相關(guān)指標(biāo)比較 與對照組相比，模型組HA、PCⅢ和LN水平升高(P<0.05)；Cur組的HA、PCⅢ和LN水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組肝纖維化相關(guān)指標(biāo)比較

2.3各組血清TNF-α水平比較 與對照組相比，模型組2、4、6、8 w的血清TNF-α水平均升高(P<0.05)；Cur組的血清TNF-α水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表3。

2.4各組血清TGF-β1水平比較 與對照組相比，模型組2、4、6、8 w的血清TGF-β1水平均升高(P<0.05)；Cur組的血清TGF-β1水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表4。

表3 各組血清TNF-α水平比較

表4 各組血清TGF-β1水平比較

3 討 論

肝纖維化通常繼發(fā)于慢性肝損傷，臨床研究發(fā)現(xiàn)在乙肝發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的過程中均伴有不同程度的肝纖維化〔7〕。作為肝損傷的前期病變，肝纖維化對于乙肝的治療意義重大，延緩或逆轉(zhuǎn)肝纖維化是防止乙肝發(fā)展為肝硬化的關(guān)鍵〔8〕。Cur是姜黃的次生代謝產(chǎn)物，有多種藥理作用，可作為治療各種疾病如哮喘和肝病的有效藥物〔11〕。

本研究結(jié)果表明，Cur對乙肝導(dǎo)致的肝損傷有明確的保護(hù)價值；但經(jīng)過Cur治療的乙肝大鼠的以上指標(biāo)仍未恢復(fù)正常水平，可能與本研究使用的Cur劑量和觀察時間較短有關(guān)，下一步擬提高劑量和延長治療時程，必要時可聯(lián)合其他藥物提高Cur的治療效果。

在肝纖維化發(fā)生過程中，TGF-β1和TNF-α發(fā)揮了重要的促進(jìn)作用。TGF-β1具有抑制膠原酶和蛋白酶合成的作用，可通過促纖維連接蛋白合成，使膠原及纖維連接蛋白在肝內(nèi)沉積，同時抑制肝內(nèi)膠原及基質(zhì)降解，繼而導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生〔12〕。此外，TNF-α在發(fā)生肝損傷時，可促進(jìn)胞外基質(zhì)合成，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加重肝纖維化程度〔13〕。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Cur可抑制TGF-β1和TNF-α水平升高，盡管具體機(jī)制尚不清楚，但為Cur改善乙肝肝硬化提供了確切證據(jù)。