前列腺癌組織血管內(nèi)皮生長因子-C及其受體-3、核干因子表達(dá)與病理分級的相關(guān)性

王縣平 嚴(yán)海員 楊 鋒 胡 俊 吳 奧 王 煒

(武漢市第九醫(yī)院泌尿外科，湖北 武漢 430081)

前列腺癌為男性泌尿系統(tǒng)最為常見的惡性腫瘤之一，研究表明，其發(fā)生率占男性腫瘤的9.7%〔1,2〕。前列腺癌因臨床表現(xiàn)隱匿、自然病程長，目前尚未普及檢查，故多數(shù)患者診斷時已處于疾病晚期。前列腺癌發(fā)生發(fā)展與多種因子相關(guān)，內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C為VEGF家族成員，而其受體(VEGFR)-3為VEGF-C酪氨酸激酶受體，兩者結(jié)合后具有促進機體血管及淋巴管生成作用〔3,4〕。研究〔5〕證實，VEGF-C與VEGFR-3結(jié)合后，可促進腫瘤中心及外周淋巴管生成，并具有誘導(dǎo)血管新生及維持血管內(nèi)皮完整性等作用。核干因子(NS)為p53結(jié)合蛋白，其于已分化組織中不表達(dá)，干細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞表達(dá)水平顯著升高，且于干細(xì)胞及多種癌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮了重要作用。VEGF-C、VEGFR-3及NS于多種惡性腫瘤組織中表達(dá)水平異常已有研究證實，但前列腺癌組織表達(dá)及其與病理分級之間關(guān)聯(lián)尚未見報道。本研究探討前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3及NS水平及其與病理分級之間相關(guān)性。

1 臨床資料

1.1一般資料 武漢市第九醫(yī)院2015年1月至2016年9月手術(shù)及均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實的前列腺癌患者40例為前列腺癌組，結(jié)合相關(guān)實驗室檢查結(jié)果及術(shù)后病理檢查均符合前列腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)〔6〕，年齡51～79歲，平均年齡(69.9±9.8)歲，體重指數(shù)(22.3±2.6)kg/m2，術(shù)前總前列腺特異性抗原(PSA)(149.6±43.6)ng/ml,游離PSA水平(16.3±6.9)ng/ml,前列腺體積(139.6±45.6)ml，Gleason評分(6.3±2.1)，TNM分級T1c級6例，T2b級13例，T2c級16例，T3a級5例。術(shù)前均未接受手術(shù)、化療及放療干預(yù)、中藥治療；取癌旁組織40份(癌旁組織組)，均經(jīng)病理檢查證實。選擇同期行前列腺手術(shù)患者經(jīng)病理檢查為正常組織者40例(對照組)，年齡49～81歲，平均年齡(70.3±9.3)歲，體質(zhì)量指數(shù)(22.9±2.7)kg/m2。三組基本資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2VEGF-C、VEGFR-3水平測定 制作病理組織石蠟塊、切片，將石蠟切片常規(guī)脫蠟、蒸餾水沖洗后，再以磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡；將切片置入高壓鍋3 min后冷卻；再以PBS浸泡3次，每次5 min；滴加增強劑工作液后置于室溫下孵育10 min；滴加一抗后置于4℃冰箱內(nèi)過夜，取出后再滴加增強劑工作液置于室溫環(huán)境下孵育20 min；再滴加酶標(biāo)羊抗鼠/兔聚合物工作液(購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)置于室溫環(huán)境下孵育30 min；再以PBS浸泡3次，每次5 min；再以二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色、蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水透明后使用中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

1.3NS水平測定 常規(guī)脫蠟，應(yīng)用胰酶抗原修復(fù)；再應(yīng)用3%H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性后應(yīng)用正常兔血清封閉；滴加羊抗人NS抗體，置于4℃冰箱過夜；滴加生物素標(biāo)記的兔抗羊二抗，置于室溫環(huán)境下20 mnin；PBS清洗后滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈卵白素，置于室溫下孵育20 min；再以DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片，置于顯微鏡下觀察。

1.4結(jié)果評估 (1)VEGF-C結(jié)果判定：將封片置于200倍顯微鏡下觀察，以細(xì)胞核不染色、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)棕色或者棕黃色顆粒作為陽性染色標(biāo)準(zhǔn)，其中，陰性：染色細(xì)胞數(shù)<10%；弱陽性：染色細(xì)胞數(shù)10%～25%；陽性：染色細(xì)胞數(shù)26%～50%；強陽性：染色細(xì)胞數(shù)>50%〔7〕。(2)VEGFR-3結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)及細(xì)胞膜出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽性，置于低倍鏡(100×)下觀察，陰性：染色細(xì)胞數(shù)<20%；弱陽性：染色細(xì)胞數(shù)20%～45%；陽性：染色細(xì)胞數(shù)46%～65%；強陽性：染色細(xì)胞數(shù)>65%〔8〕。(3)NS結(jié)果判定：以細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)淡黃色或者黃棕色為陽性細(xì)胞標(biāo)志，陰性：陽性細(xì)胞率≤5%；弱陽性：陽性細(xì)胞率6%～25%；陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%；強陽性：細(xì)胞染色率>50%〔9〕。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、t檢驗、秩和檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組VEGF-C、VEGFR-3、NS比較 與對照組比較，前列腺癌組及癌旁組織組VEGF-C、VEGFR-3、NS陽性率均顯著增高(均P<0.05)；與癌旁組織組比較，前列腺癌組VEGF-C、VEGFR-3、NS陽性率顯著增高(P<0.05)。見表1。

表1 各組間VEGF-C、VEGFR-3、NS表達(dá)比較〔n(%)，n=40〕

與對照組比較：1)P<0.05，與癌旁組織組比較：2)P<0.05

2.2前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3、NS表達(dá)與病理分級之間關(guān)系 與T1c級比較，T2b、T2c及T3a級VEGF-C、VEGFR-3、NS表達(dá)增強(均P<0.05)；與T2b級比較，T2c及T3a級表達(dá)增強(均P<0.05)；與T2c比較，T3a級表達(dá)增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 前列腺癌組織VEGF-C、VEGFR-3、NS水平與病理分級之間關(guān)系〔n(%)〕

1)與T1c級比較；2)與T2b級比較；3)與T2c級比較：均P<0.05

3 討 論

前列腺癌多發(fā)生于外周帶，遠(yuǎn)離前列腺尿道部，早期缺乏典型癥狀，臨床確診時多已處于疾病晚期，多數(shù)患者僅能接受內(nèi)分泌治療，喪失最佳手術(shù)時機。此外，前列腺癌臨床分期與治療措施及預(yù)后評估具有重要關(guān)聯(lián)。VEGF-C于人類基因定位于染色體4q34,為臨床第一個發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)節(jié)淋巴管生成作用的VEGF家族成員〔10〕。研究〔11，12〕證實，VEGF-C具有誘導(dǎo)多種惡性腫瘤內(nèi)或者腫瘤組織周圍淋巴管生成的作用，且與淋巴道轉(zhuǎn)移具有密切關(guān)聯(lián)。VEGFR-3主要表達(dá)于淋巴內(nèi)皮細(xì)胞，其與VEGF-C結(jié)合后可誘導(dǎo)VEGFR-3酪氨酸激酶磷酸化，再通過胞質(zhì)內(nèi)信號傳遞等機制，促進DNA有絲分裂，最終導(dǎo)致靶細(xì)胞增殖〔13〕。本研究表明VEGF-C及VEGFR-3于前列腺癌組織表達(dá)增強明顯，且臨床分級越高，VEGF-C及VEGFR-3表達(dá)增強越明顯。研究〔14，15〕表明，VEGF-C及VEGFR-3結(jié)合后可促進內(nèi)皮細(xì)胞生長因子激活，促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖；另一方面，還可促進腫瘤組織淋巴管擴張及增加淋巴管通透性，增加淋巴管周圍組織間隙內(nèi)壓力，牽拉內(nèi)皮細(xì)胞，增大淋巴管管腔，而導(dǎo)致重疊的內(nèi)皮細(xì)胞開放，使腫瘤細(xì)胞更易進入淋巴管，促進轉(zhuǎn)移，此可能為前列腺癌組織VEGF-C及VEGFR-3表達(dá)水平增高及臨床分期高，其表達(dá)增強原因〔16，17〕。

人類NS基因位于3p21，其不僅存在于鼠的胚胎皮層干細(xì)胞等，還可見于人類多種腫瘤細(xì)胞。研究〔18〕證實，下調(diào)NS基因表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，表明其表達(dá)于腫瘤細(xì)胞自我更新過程中發(fā)揮了重要作用。國外研究〔19，20〕報道，NS可能為干細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中最重要的共同調(diào)節(jié)基因，其表達(dá)水平參與腫瘤細(xì)胞增殖；此外，BS基因表達(dá)水平與前列腺癌分化程度有密切關(guān)聯(lián)，細(xì)胞分化程度高，癌細(xì)胞惡性程度小，NS水平降低，表明NS參與前列腺癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移，此可能為NS與前列腺癌病理分級具有相關(guān)性的原因之一。