巨細(xì)胞病毒感染對老年腦梗死患者頸動脈硬化、TNF-α、VCAM-1水平的影響

付南燕 夏忠斌

(江西宜春學(xué)院醫(yī)學(xué)院病原生物教研室，江西 宜春 336000)

巨細(xì)胞病毒(HCMV)作為一種常見病毒，通常情況下呈潛伏感染，一旦機(jī)體免疫功能下降，病毒激活引起疾病。研究發(fā)現(xiàn)，HCMV感染參與了動脈粥樣硬化過程，與腦梗死發(fā)生有一定關(guān)系〔1〕。由于頸動脈粥樣硬化時頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)改變早于斑塊發(fā)生，臨床上采用頸動脈超聲測量IMT來反映動脈硬化程度〔2〕。研究表明，腫瘤壞死因子(TNF)-α、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)-1參與了動脈粥樣硬化的炎癥免疫過程〔3〕。本研究旨在了解HCMV與老年腦梗死動脈硬化的關(guān)系及HCMV感染對TNF-α、VCAM-1的影響。

1 資料與方法

1.1臨床資料 連續(xù)收集2014年1月至2016年1月江西宜春學(xué)院附屬醫(yī)院住院治療的急性腦梗死(ACI)患者56例為ACI組，男36例，女20例；年齡60～76歲，平均68.3歲；ACI組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合WHO腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)；②發(fā)病48～72 h內(nèi)經(jīng)頭顱MRI/CT檢查，明確梗死灶；③患者均知情同意參加入組。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有房顫、感染性心內(nèi)膜炎等可致心源性腦栓塞疾??；②發(fā)病前15 d內(nèi)有急性感染疾病；③嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙或腫瘤等；④近期服用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑及溶栓治療者。同時選取在門診復(fù)診的30例陳舊性腦梗死(OCI)患者為OCI組，其中，男19例，女11例；年齡60～73歲，平均65.8歲；OCI組納入標(biāo)準(zhǔn)：既往有腦梗死病史，無急性發(fā)作，腦MRI/CT掃描可見OCI病灶，未見新發(fā)梗死；排除標(biāo)準(zhǔn)同ACI組。另選取同時期健康體檢人群30例為正常對照(NC)組，男20例，女10例；年齡49～72歲，平均(62.9±6.2)歲。各組性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2標(biāo)本采集 受試者均在早晨空腹抽取靜脈血，室溫放置10 min后，3 000 r/min離心20 min，收集上清，-70℃凍存?zhèn)溆?，集中待測。

1.3HCMV-IgM、IgG檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測，嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行。所有樣品采用酶標(biāo)儀(美國Muhiskun MK3型)在450 nm波長下讀取吸光度值(OD值)，結(jié)果判斷〔4〕：臨界值(CO)=陰性對照均值+0.25，樣品OD值與CO值之比，<1.0 為陰性，1.0～1.2為可疑，>1.2為陽性。試劑盒為美國Quida公司產(chǎn)品。

1.4頸動脈超聲 采用美國GE公司LOGIQ9彩色多普勒超聲診斷儀，周圍血管探頭頻率為7.5 MHz。被檢者取仰臥位，頭略向后仰。檢測頸總動脈、頸內(nèi)動脈內(nèi)徑及IMT，并觀察有無斑塊形成及斑塊性質(zhì)。選取雙側(cè)頸總動脈遠(yuǎn)段及頸內(nèi)動脈近段距離分叉膨大部均為1.0～1.5 cm處血管壁，分別測量動脈前、后壁內(nèi)膜表面間的垂直距離及管腔內(nèi)膜界面與IMT〔5〕。頸動脈IMT正常值<1.0 mm，1.0 mm≤IMT≤1.5 mm為內(nèi)中膜增厚。管壁不規(guī)則隆起增厚，IMT>1.5 mm，且凸向管腔的局部結(jié)構(gòu)變化，視為粥樣硬化斑塊形成。根據(jù)斑塊病理類型和回聲特點，將斑塊分為脂質(zhì)型軟斑、纖維型斑塊、鈣化型硬斑和潰瘍型混合斑，其中，硬斑包括纖維型斑塊和鈣化型斑塊；根據(jù)Crouse斑塊積分法評估頸動脈粥樣硬化斑塊。

1.5血清TNF-α、VCAM-1含量測定 采用雙抗體夾心ELISA測定，試劑盒由北京易科攀博生物有限公司提供。

1.6統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗，t檢驗及Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組HCMV-IgG、IgM陽性率的比較 ACI組HCMV-IgG、IgM陽性率及含量明顯高于OCI組和NC組(P<0.01)；OCI組HCMV-IgG陽性率及含量明顯高于NC組(P<0.05或0.01)；見表1。

表1 三組HCMV-IgG、IgM陽性率的比較

與NC組比較：1)P<0.01，2)P<0.05；與OCI組比較：3)P<0.01

2.2HCMV-IgG陽性與陰性組頸動脈超聲結(jié)果的比較 腦梗死患者(包括ACI組和OCI組)HCMV-IgG陽性組檢出斑塊31塊，檢出率為67.4%(29/43)，其中，軟斑13塊(44.8%)，硬斑10塊(34.5%)，混合斑8塊(27.6%)；陰性組檢出斑塊20塊，檢出率為41.9%(18/43)，其中，軟斑3塊(16.7%)，硬斑11塊(61.1%)，混合斑4塊(22.2%)；HCMV-IgG陽性組斑塊檢出率明顯高于陰性組(P<0.05)；其中，HCMV-IgG陽性組軟斑比例高于陰性組(P<0.05)，硬斑比例低于陰性組(P<0.05)，頸動脈IMT、軟斑積分顯著高于陰性組(P<0.05或0.01)，而硬斑積分則無明顯差異(P>0.05)；見表2。

與HCMV-IgG(陰性)比較：1)P<0.05，2)P<0.01

2.3各組血清TNF-α、VCAM-1含量的比較 ACI組血清TNF-α、VCAM-1含量明顯高于OCI組和正常對照組(均P<0.01)，OCI組血清TNF-α、VCAM-1含量明顯高于NC組(均P<0.01)；見表3。

表3 各組血清TNF-α、VCAM-1含量比較

與NC組比較：1)P<0.01；與OCI組比較：2)P<0.01

2.4各組抗HCMV-IgG陽性與陰性患者血清TNF-α、VCAM-1含量比較 ACI組和OCI組中，抗HCMV-IgG陽性患者的血清TNF-α、VCAM-1含量明顯高于陰性患者(P<0.01或0.05)。NC組抗HCMV-IgG陽性與陰性患者之間血清TNF-α、VCAM-1含量無明顯差異(P>0.05)；ACI組抗HCMV-IgG陽性與陰性患者比較，IgG明顯升高(P<0.01)；見表4。

2.5ACI組血清TNF-α、VCAM-1含量與HCMV-IgG的相關(guān)性 TNF-α、VCAM-1含量與HCMV-IgG陽性率呈正相關(guān)(r=0.367，P=0.005；r=0.325，P=0.015)。TNF-α、VCAM-1含量之間呈正相關(guān)(r=0.332，P=0.012)。

表4 各組HCMV-IgG陰性和陽性患者血清TNF-α、VCAM-1含量比較

與同組HCMV-IgG(陰性)比較：1)P<0.01，2)P<0.05

3 討 論

HCMV感染與動脈粥樣硬化密切相關(guān)〔6〕。早期的研究表明，HCMV潛伏在血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，動脈粥樣硬化患者存在HCMV周期性激活潛伏感染或連續(xù)的活動性感染〔7〕。周曉蕾等〔8〕研究發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化患者HCMV感染陽性率高于正常對照組，且與頸動脈病變支數(shù)相關(guān)。HCMV感染會導(dǎo)致患者血脂異常及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，TNF-α增高參與了頸動脈硬化的發(fā)生發(fā)展。李心怡等〔9〕研究證實，動脈粥樣硬化動脈標(biāo)本中存在人HCMV感染的證據(jù)。本研究結(jié)果提示ACI患者存在HCMV感染，且具有一定的活動性，OCI部分患者存在慢性HCMV感染。

HCMV感染對血管內(nèi)皮有損傷作用，HCMV感染可誘導(dǎo)TNF-α表達(dá)增加，提高TNF-α刺激VCAM-1表達(dá)增加，共同參與動脈粥樣硬化過程〔10〕。邸衛(wèi)英等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)，HCMV感染引起TNF-α水平增高，導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定，支持HCMV激活感染與動脈粥樣硬化有關(guān)。王曉翔等〔12〕研究證實，ACI患者血清TNF-α、VCAM-1水平明顯增高，彼此相互作用參與了ACI的炎癥反應(yīng)和再灌注損傷。本研究說明，TNF-α、VCAM-1參與了腦梗死的炎癥免疫過程。HCMV通過激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生過量基質(zhì)金屬蛋白酶分解纖維帽中主要成分膠原纖維，使纖維帽變薄，斑塊破裂，造成斑塊不穩(wěn)定〔13〕。本研究表明，HCMV感染提高了血清TNF-α、VCAM-1水平，導(dǎo)致斑塊的不穩(wěn)定性，并且與頸動脈粥樣硬化程度有一定的關(guān)系。本研究不足在于樣本量有限，病毒學(xué)檢測方法局限，有關(guān)HCMV感染與頸動脈粥樣硬化和血清TNF-α、VCAM-1之間的潛在機(jī)制還有待臨床研究。