江蘇沿海貝類育苗中單胞藻培養(yǎng)的實用技術

吳楊平，張雨，陳愛華，曹奕，陳素華，張志東

（江蘇省海洋水產研究所，江蘇省海洋經濟貝類研發(fā)中心，江蘇省文蛤良種場，江蘇 南通 226007）

單胞藻，即單細胞藻類，又稱微藻，俗稱藻類水，是貝類生長發(fā)育過程中主要的餌料，為貝類幼體和稚貝提供了生長所必需的豐富營養(yǎng)。常用作貝類餌料的有金藻門（Chrysophyta）的湛江等鞭金藻（Isochrysis zhanjiangensis）、3011（Isocrydid galbana）、3012（Pavlova riridis galbana）、綠色巴夫藻（Pavlova viridis），綠藻門（Chlorophyta）的扁藻（Platymonas sp．）、小球藻（Chlorella sp．），硅藻門（Bacillariophyta）的牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）、新月菱形藻（Nitzschia closterium）等。該文從需求背景、培養(yǎng)條件、應用實例等方面詳細介紹江蘇沿海單胞藻在貝類育苗中的實際應用，以期為省內正在崛起的貝類苗種生產提供案例參考。

1 貝類養(yǎng)殖現(xiàn)狀及貝類苗種的需求前景

近年來，隨著經濟社會的發(fā)展，江蘇省沿海地區(qū)海水養(yǎng)殖業(yè)發(fā)生著涌動式變化。傳統(tǒng)興旺的灘涂圍養(yǎng)在圍墾造陸、工業(yè)建設等沿海大開發(fā)的時代背景下，貝類養(yǎng)殖失去了可以倚仗的先天灘涂養(yǎng)殖優(yōu)勢，轉而投入到海邊鹽堿地的人工池塘養(yǎng)殖。就目前的全省養(yǎng)殖形勢而言，鹽城市的射陽縣、大豐縣因萬畝異育銀鯽出血病的暴發(fā)正在謀求養(yǎng)殖品種的轉型，而貝類正是被看好的養(yǎng)殖品種。響水縣近年已發(fā)展出萬畝日本對蝦養(yǎng)殖，規(guī)模還在升級擴大，養(yǎng)殖戶紛紛利用充足的對蝦尾水養(yǎng)殖青蛤、硬殼蛤等貝類。南通市，特別是啟東縣，梭子蟹與脊尾白蝦混養(yǎng)興旺，但近年來也危機四伏，所以該地從2017年開始重新引入縊蟶、文蛤等貝類與蝦蟹加以立體深水混養(yǎng)。連云港市養(yǎng)殖模式與啟東縣類似，常見的是梭子蟹與中國對蝦或脊尾白蝦混養(yǎng)，同時輔以1~2個條帶貝類蓋網養(yǎng)殖，既保障又提高了池塘效益。因此，江蘇省海水貝類養(yǎng)殖具有巨大的空間和苗種需求市場，但是江蘇省內缺乏貝類育苗場，隨著該地自然苗來源的中斷，苗種幾乎均來自山東、浙江等省，嚴重依賴外省供應，制約著江蘇省貝類養(yǎng)殖業(yè)及相關養(yǎng)殖的發(fā)展。

2 單胞藻培育設施與方法

2.1 培育用水

由于江蘇省沿海泥沙量大，自然海水異常渾濁，因此單胞藻培育用水需經過砂濾池砂濾、黑暗沉淀池沉淀，方可調入室內高位蓄水池（下稱高位水）供單胞藻三級培養(yǎng)等貝類育苗生產各環(huán)節(jié)之用。就對水質的要求級別以及考慮單胞藻保存的時間長短而論，水質效果要求由高到低依次為：一級培養(yǎng)（保種培養(yǎng)）、二級培養(yǎng)（中級培養(yǎng)）、三級培養(yǎng)（生產性擴增）。一級培養(yǎng)用水以高位水為基礎還需經過燒煮沸騰冷卻后使用，一些特殊情況下可利用自制簡易砂濾缸對高位水加強處理后燒煮使用。二級培養(yǎng)一般使用的高位水需鍋爐煮沸趁熱注入海蜇桶內，冷卻后翌日使用或者按50 mg/L使用濃度投放消毒片（三氯異氰尿酸為主要有效成分）處理后，第3天經大蘇打中和后使用。三級培養(yǎng)通過石棉袋出水入池后經漂白精、大蘇打處理后使用，用水緊張等特殊情況下可調用貝類養(yǎng)殖池清濾后的海水直接處理后使用。

2.2 培育器具

一級培養(yǎng)使用5 L三角燒瓶靜止培養(yǎng)，日間每隔2~4 h人為搖瓶1次。二級培養(yǎng)一般使用20 L純凈水桶或50 L海蜇桶持續(xù)充氣培養(yǎng)。三級培養(yǎng)一般采用大小不等的水泥池充氣培養(yǎng)。培養(yǎng)光線良好，避免直射光照。以一個生產規(guī)模為500 m3的生產車間為例，一般5 L三角燒瓶50~100個，50 L海蜇桶200個即可，水泥池培育單胞藻的水體與育苗水體比在4：1以上。

2.3 單胞藻培育

單胞藻培養(yǎng)必須趕在貝類育苗前展開，合理掌握培育節(jié)奏。一般各品種單胞藻從保種狀態(tài)第1次翻新接入5 L三角燒瓶需在催產開始前40~50 d開始準備經過10 d生長后由1個瓶子擴增至多個瓶子，一般1對4分擴，擴瓶數(shù)量在20個。再經10 d，積攢的一級培養(yǎng)三角燒瓶采取上層1對1瓶擴瓶，剩余部分1對1擴桶方式。一般要求至此階段完成5 L一級培養(yǎng)20瓶，50 L二級培養(yǎng)20桶的儲備目標，那么當年生產所需的所有人工餌料即可由此儲備實現(xiàn)源源不斷供給。再經10 d同時開展1次二級擴增：瓶到桶采用上述方法，桶到桶采用1分4~5桶方法，此時初具生產規(guī)模。第40~50天時便可實現(xiàn)桶到池的三級培養(yǎng)，此時催產孵化工作即可展開。

在室內進行三級生產性擴增培養(yǎng)時，常用的單胞藻品種均可以進行培養(yǎng)，但需結合培育期的溫度和單胞藻的生態(tài)習性（表1）決定主要培育品種，不同時間段培育單胞藻的品種、數(shù)量、搭配等需動態(tài)變化，按需培養(yǎng)。在室外露天進行三級擴增培養(yǎng)時，宜采用抗環(huán)境突變能力強的扁藻和小球藻，育苗場周邊任何形式的露天池均可加以利用，以方便為準。

表1 一些常用單胞藻的生態(tài)習性

此外，室外土池天然萌發(fā)的藻類水可作為貝苗中后期餌料的重要來源和人工培育單胞藻的替代，但需技術人員勤于走訪周邊養(yǎng)殖塘口時及時發(fā)現(xiàn)，并做好維護。比如苗場周邊魚塘、蝦塘因投餌容易造成其水體的天然藻類爆發(fā)，這時可做好協(xié)調對接，在掌握魚蝦塘水的情況下適時按需接入。另外，可以利用苗場內土池主動肥水，如養(yǎng)殖魚蝦品種，或施加雞糞、肥水寶等措施肥水，多渠道保證貝苗對餌料的需求。

2.4 注意事項

單胞藻三級培養(yǎng)中尤以一二級培養(yǎng)需嚴格規(guī)范操作，對水、培養(yǎng)器具、培養(yǎng)池及操作過程中一切可能帶入污染的環(huán)節(jié)特別是操作者每一個反復操作均要進行嚴格消毒。

隨著國家對易爆易燃品管制制度的嚴格執(zhí)行，之前生產中常用硝酸鈉作為單胞藻培養(yǎng)的氮肥，但由于存在安全隱患并且采購和保管的手續(xù)繁瑣，可以以硝酸銨或尿素等替代硝酸鈉。

接種的基本原則是選擇顏色正常，濃度高的藻種。一級培養(yǎng)以及一級到二級培養(yǎng)選擇瓶壁掛絲的藻種，適當輔以鏡檢。二級培養(yǎng)以及二級到三級培養(yǎng)選擇桶壁無死藻，顏色正而濃的藻種。

根據(jù)該海區(qū)的海水的特點及單胞藻生長特點一次性加入適量營養(yǎng)鹽，保證單胞藻使用投喂貝苗前所投營養(yǎng)鹽得以消耗，以免過量帶入苗池。

鏡檢后對有少量污染的單胞藻可及時投喂大苗；被嚴重污染的單胞藻應及時清理，以防對其他池造成污染，對涉及到的器具消毒后再次使用；對未使用完的老藻也應同樣處理。

3 貝類育苗過程中的單胞藻投喂

3.1 受精卵

文蛤等品種的受精卵一般在孵化池中孵化18~20 h，擔輪幼蟲破膜而出，應在這之前投入金藻作為其破膜后的開口餌料。如大竹蟶等采用陰干+流水+藻類刺激催產的品種，視催產所用藻類品種和數(shù)量確定投喂金藻的數(shù)量。在受精卵發(fā)育成D型幼蟲的過程中，一般根據(jù)孵化數(shù)量投喂金藻1次即可。

3.2 D型幼蟲

剛剛孵化的D型幼蟲由于個體小，主要以個體小、無細胞壁、游動速度慢、易消化的金藻作為餌料。同時為了營養(yǎng)均衡，搭配同樣個體小的角毛藻投喂。投喂量分別為1×104~5×104個藻細胞/mL、0.5×104~1×104個藻細胞/mL。根據(jù)攝食情況，少投多喂，投喂的藻液應選用擴增性培養(yǎng)入池生長6~8 d內的新鮮單胞藻。

3.3 殼頂幼蟲

貝苗生長發(fā)育到殼頂幼蟲時，鉸合線開始向背部隆起，個體日漸增大，游泳能力增強、攝食旺盛，此時尤其要重視營養(yǎng)的全面，除幾種常見金藻門單胞藻的投喂外，扁藻、硅藻要與金藻按比例搭配投喂。

3.4 稚貝

貝苗完成變態(tài)附著后，生活方式由水中浮游完全轉變?yōu)闋I底棲生活，此時提高扁藻、硅藻的投喂比例，但仍以50%以上投喂金藻。1 mm以后的稚貝對餌料需求量巨大，可逐漸調用室外魚蝦養(yǎng)殖池尾水投喂，2 mm以后逐漸過渡到以魚蝦養(yǎng)殖池尾水為主，最終以魚蝦養(yǎng)殖池尾水完全替代人工培養(yǎng)的單胞藻。

4 結果

2007年以來采用上述單胞藻培養(yǎng)方法，支撐了大竹蟶、文蛤、縊蟶、牡蠣等貝類品種的人工育苗生產，其中大竹蟶每年約生產8 000萬粒苗種用于江蘇沿海的增殖放流以及池塘養(yǎng)殖。2010年以來每年生產3 000萬~4 000萬粒紅殼色文蛤和普通文蛤苗種用于新品種選育和池塘養(yǎng)殖。十年來，貝苗生產也會遇到諸如梅雨季節(jié)等一些影響單細藻培養(yǎng)的因素，但不斷調整適合江蘇省特點的單細藻培養(yǎng)方式，優(yōu)化單胞藻培養(yǎng)結構和來源，實現(xiàn)了正常供應，滿足了貝類苗種各階段對藻類的需求。實踐證明上述的單胞藻培育使用方法在江蘇省內貝類育苗中具有良好的可行性和較強的操作性。但是“兵無常勢，水無常形”，每年所遇到的情況不盡相同，以該文的操作和思維方式作為單胞藻培養(yǎng)的基本要義可以化解實際生產中出現(xiàn)的各種問題，最終取得生產的成功。