氣相色譜法測定腌制大蒜中二烯丙基三硫醚和二烯丙基二硫醚

張志軍，張方圓，王李平 ，林 晨，湯遜尤，方 麗，林澤鵬，李雪瑩

(中國廣州分析測試中心，廣東省分析測試技術(shù)公共實驗室，廣東 廣州 510070)

大蒜素是天然廣譜抗生素藥物，具有消炎、防癌抗病毒、抑制血小板凝聚、降血壓、降血脂等多種生物學(xué)功能[1-2]。大蒜素不但具有很好的藥用價值，其在動物養(yǎng)殖業(yè)也很好的經(jīng)濟效益，已經(jīng)受到廣大研究者的關(guān)注[3]。大蒜素是大蒜中有效活性成分的總稱，其中二烯丙基三硫醚(DATS)和二烯丙基二硫醚(DADS)是最重要的兩種功效成分[4]。新鮮的大蒜中含有大量的蒜氨酸，當(dāng)受到物理機械破碎后，大蒜中的蒜氨酸酶被激活，催化蒜氨酸分解為大蒜素[6]。腌制大蒜風(fēng)味獨特，除了含有豐富大蒜素和大量的蛋白質(zhì)外，還含有豐富的鈣質(zhì)，磷，鐵元素和硒、鍺等微量元素[7]，為大眾所喜愛。本文采用氣相色譜法測定腌制大蒜中二烯丙基三硫醚和二烯丙基二硫醚含量，經(jīng)過方法學(xué)考察驗證，氣相色譜法測定腌制大蒜中大蒜素含量，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

DATS標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，含量為94.2%)，DADS標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究院，含量為90.0%)，無水乙醇(色譜純，廣州化學(xué)試劑廠)，正己烷(色譜純，廣州化學(xué)試劑廠)，實驗所用試劑均為分析純。Aglient7820A氣相色譜儀配備FID檢測器(Aglient)；毛細(xì)管色譜柱：DB-1701 (30 m 0.25 mm 0.25 m)。XW-80A旋渦混合器(上海琪特分析儀器有限公司)；超聲波水浴(fisherbrand，F(xiàn)B15067)。

1.2 樣品處理

腌制大蒜9種(100g，購于市場)，將腌制大蒜去皮，取可食用部分，用勻漿機粉碎制成蒜泥。準(zhǔn)確稱取樣品5g于100mL具塞錐形瓶中，加入10.00mL蒸餾水，渦旋1 min，加入10%NaOH溶液2滴，加塞并用封口膜纏繞確保錐形瓶密閉狀態(tài)，于(60 5)℃恒溫水浴中反應(yīng)1h。向試樣中準(zhǔn)確加入20.00 mL乙醇，加塞，振搖后于(60 5)℃超聲波水浴中超聲提取60 min。趁熱將提取液過濾，待濾液冷卻后，移取15.00 mL于25 mL具塞比色管中，加入5.00 mL正己烷，振搖萃取2 min，靜止分層，取上清液供氣相色譜儀測定，以正己烷做空白對照。

1.3 結(jié)果計算

(1)

式中：W——樣品中DATS或DADS的含量(mg/kg)；

A樣品——樣品的峰面積；

A標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積；

C標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μg/mL；

m樣品——樣品質(zhì)量，g；

2——試樣質(zhì)量換算系數(shù)。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜條件

大蒜素是揮發(fā)油性物質(zhì)，性質(zhì)不穩(wěn)定，易揮發(fā)和分解[8]。因此，采用氣相色譜法測定時，進樣口和檢測器的溫度對方法的準(zhǔn)確性有重要影響，溫度過低時會導(dǎo)致氣化不徹底，而溫度過高會使大蒜素分解。經(jīng)實驗確定色譜條件為：樣口溫度160 ℃，檢測器溫度160 ℃，以He為載氣，恒流流速2.0 mL/min；升溫程序：初始溫度為60 ℃，保持0min，以15 ℃/min升至160 ℃，保持3min，然后以60℃/min升至260 ℃保持3 min；分流比為10 1，進樣體積1.0 L。在該色譜條件下，DATS和DADS分離度能滿足定量要求，標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖見圖1。

圖1 DATS和DADS的氣相色譜圖

2.2 線性范圍和檢出限

將DATS標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為8.335 mg/mL、4.167 mg/mL、1.667 mg/mL、833.5 μg/mL和416.8 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，將DADS標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為5.132 mg/mL、2.566 mg/mL、1.026 mg/mL、513.2 μg/mL、256.6 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照2.1確定的色譜條件，每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液平行測定3次，取平均值，與對應(yīng)的濃度進行線性擬合，分別得到DATS和DADS的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果表明DATS和在416.8 μg/mL～8.335 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性，DADS在256.6 μg/mL ～5.132 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性，如圖2所示。當(dāng)取樣量為5.00 g，定容體積為5.00 mL，稀釋倍數(shù)為2時，以3倍信噪比(S/N=3)確定DATS和DADS的檢出限分別為0.0055 mg/kg和0.0051 mg/kg。

圖2 DATS和DADS的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 方法準(zhǔn)確度、精密度和穩(wěn)定性

稱取同一樣品6份，分別準(zhǔn)確加入DATS 1.67 mg和DADS 1.03mg，按“1.2”項下方法進行前處理，然后上機測定。DATS和DADS的回收率分別在97.9%～105.1%之間和98.1%～112.5%之間，RSD分別為1.24%和2.13%，均滿足定量分析的要求。

因大蒜素?fù)]發(fā)性強，為保證結(jié)果的穩(wěn)定可靠，對實驗結(jié)果的穩(wěn)定性進行了考察。取DATS和DADS混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在室溫條件下分別放置0h、1h、3h、5h、8h、9h，進行氣相色譜分析。結(jié)果表明在室溫條件下放置時長對大蒜素結(jié)果的有一定的影響，當(dāng)放置時長超過8h會導(dǎo)致實驗結(jié)果的偏差超過10%。

2.4 實際樣品的測定

取9種不同的腌制大蒜，按“1.2”項下方法進行前處理后測定其大蒜素含量。測定結(jié)果見表1。

表1 9個腌制大蒜樣品中大蒜素的含量

3 結(jié)論

本文研究了大蒜素的測定方法，建立了氣相色譜法測定腌制大蒜中二烯丙基三硫醚和二烯丙基二硫醚。該方法準(zhǔn)確可靠，經(jīng)方法學(xué)實驗驗證，適用于大蒜中大蒜素含量的測定。