重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗的質(zhì)量分析及發(fā)展方向

楊勁松，吳濤，李金祥

（1中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081；2中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，北京 100081）

高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，HPAI），是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，可導(dǎo)致家禽、各種野鳥(niǎo)、特別是遷徙水禽的感染，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須報(bào)告的動(dòng)物疫病[1]，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。1878年首次報(bào)道禽流感病毒（AIV）在意大利雞群中暴發(fā)[2]，隨后世界各地均有該病暴發(fā)和流行的報(bào)道，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。l997年發(fā)生在我國(guó)香港的禽流感感染人事件，更加引起人們對(duì)該病的關(guān)注。2005年，H5N1亞型禽流感病毒引起野生鳥(niǎo)類的大規(guī)模死亡，并隨野生鳥(niǎo)類的遷徙而傳播到更廣泛的區(qū)域[3]。十余年來(lái)，我國(guó)發(fā)現(xiàn)的H5亞型禽流感病毒多為H5N1亞型。但是近些年來(lái)，在我國(guó)H5N2、H5N8、H5N6、H5N5 等亞型顯著增多[4-6]。

高致病性禽流感在我國(guó)暴發(fā)后，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部采取免疫與撲殺相結(jié)合的防控措施,其中全面免疫是關(guān)鍵技術(shù)措施和突出特點(diǎn)[7]，因此在較短時(shí)間內(nèi)就控制了禽流感疫情[8]。國(guó)家規(guī)定每年春秋兩季進(jìn)行集中強(qiáng)制免疫，使用的疫苗主要為重組禽流感病毒滅活疫苗。對(duì)于疫苗質(zhì)量，國(guó)家高度重視，并對(duì)疫苗生產(chǎn)企業(yè)采取了嚴(yán)格的監(jiān)管措施和市場(chǎng)準(zhǔn)入制度，為禽流感的防控發(fā)揮了重要作用[9]。為了促進(jìn)疫苗生產(chǎn)企業(yè)的技術(shù)進(jìn)步，保障疫苗質(zhì)量，對(duì)近年來(lái)重組禽流感滅活疫苗的質(zhì)量情況進(jìn)行了分析，并提出了禽流感疫苗的研制發(fā)展方向，以期為禽流感疫苗的生產(chǎn)和研制提供有益的幫助。

1 我國(guó)重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗的種類和使用情況

2004年初我國(guó)首次批準(zhǔn)使用了低致病性 H5N2亞型的禽流感病毒滅活疫苗（N28株），但由于H5N2亞型禽流感病毒的復(fù)制效率低，與國(guó)內(nèi)流行株抗原匹配性差。2005年1月，又推出了針對(duì)第0分支的Re-1株疫苗。隨著病毒抗原性的不斷變異[10-11]，原有疫苗的保護(hù)效率下降，不足以對(duì)新出現(xiàn)的病毒或變異株提供足夠的保護(hù)[12]。2007年至2008年3月，先后推出針對(duì)第7分支的 Re-4株疫苗和第2.3.4分支病毒的Re-5株疫苗[13]。2010年開(kāi)始，第2.3.4分支的病毒開(kāi)始出現(xiàn)較大變異[14-16]，導(dǎo)致Re-5株疫苗對(duì)其保護(hù)效果較差。2012年3月，我國(guó)推出了針對(duì)第2.3.2.1分支Re-6株疫苗[17]，替換原來(lái)的 Re-5株疫苗。2014 年4月，推出針對(duì)第7.2分支[18]的Re-7株疫苗，替換原來(lái)的 Re-4株疫苗，2016年至今我國(guó)未再分離到7.2分支病毒。2013年以來(lái)，多地暴發(fā)了由2.3.4新分支病毒引起的高致病性禽流感疫情，國(guó)際H5N1進(jìn)化工作組將該變異株分支命名為第2.3.4.4分支[19]。2015年 11月，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)了針對(duì)該分支病毒的 Re-8株疫苗，并于2016 年2月開(kāi)始上市使用。目前，對(duì)于禽流感H5亞型病毒來(lái)說(shuō)，2.3.4.4分支是在我國(guó)流行的主要分支，另有少量的新型 2.3.2.1分支病毒和野鳥(niǎo)型病毒。到目前為止，高致病性禽流感H5N1毒株共劃分出 10 個(gè)進(jìn)化支（0—9）[20]。禽流感 Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8 各疫苗株之間的血凝抑制抗原相關(guān)系數(shù)在 0.17—0.67 之間，表明不同分支之間的抗原性有較大差異[21]，因此必須使用匹配相應(yīng)分支的疫苗才能取得理想的防控效果。

2 我國(guó)重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗的生產(chǎn)現(xiàn)狀

目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)重組禽流感病毒 H5亞型滅活疫苗的生產(chǎn)企業(yè)共有10家，分別是哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司、青島易邦生物工程有限公司、肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司、乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠、遼寧益康生物股份有限公司、廣東永順生物制藥股份有限公司、哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司、南京梅里亞動(dòng)物保健有限公司、吉林冠界生物技術(shù)有限公司、山東信得動(dòng)物疫苗有限公司。其中吉林冠界生物技術(shù)有限公司和山東信得動(dòng)物疫苗有限公司采用懸浮細(xì)胞工藝生產(chǎn)，其余8個(gè)廠家均采用雞胚工藝進(jìn)行疫苗生產(chǎn)。

國(guó)內(nèi)近三年來(lái)取得生產(chǎn)批準(zhǔn)文號(hào)并已投入生產(chǎn)的重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗主要有：重組禽流感病毒 H5亞型滅活疫苗（Re-6株）、重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）、重組禽流感病毒 H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-8株）、重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）、重組禽流感病毒（H5亞型）二價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，Re-6株+Re-8株）、重組禽流感病毒（H5亞型）三價(jià)滅活疫苗（細(xì)胞源，Re-6株+Re-7株+Re-8株）、重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）。根據(jù)禽流感病毒的流行趨勢(shì)，2016年 4月至 2017年7月農(nóng)業(yè)部規(guī)定將重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）作為主要的高致病性禽流感強(qiáng)制免疫疫苗[22]；2017年7月至今，農(nóng)業(yè)部規(guī)定將重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）作為主要的高致病性禽流感強(qiáng)制免疫疫苗[23]。

近三年重組禽流感病毒滅活疫苗的批簽發(fā)批數(shù)和總產(chǎn)量均呈明顯上升趨勢(shì)，2017年的總產(chǎn)量較 2015年增長(zhǎng)了26.2%（表1）。

表1 2015—2017年重組禽流感病毒滅活疫苗產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)Table 1 Production statistics of recombinant avian influenza virus inactivated vaccine from 2015 to 2017

3 我國(guó)對(duì)重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗的質(zhì)量監(jiān)管

重組禽流感病毒滅活疫苗的質(zhì)量監(jiān)管由農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局主管，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所負(fù)責(zé)具體實(shí)施。為進(jìn)一步加強(qiáng)疫苗質(zhì)量監(jiān)管，把對(duì)農(nóng)業(yè)部定點(diǎn)生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行獸藥 GMP監(jiān)督檢查、實(shí)施產(chǎn)品的監(jiān)督抽檢和落實(shí)批簽發(fā)制度作為三大有效的監(jiān)管手段。此外，針對(duì)投訴、舉報(bào)等情況，還要組織不定期的獸藥 GMP飛行檢查。

3.1 企業(yè)監(jiān)督檢查

中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所每年組織春秋兩季監(jiān)督檢查，實(shí)現(xiàn)對(duì)重組禽流感病毒滅活疫苗生產(chǎn)企業(yè)每年兩次全覆蓋檢查。檢查重點(diǎn)包括企業(yè)生產(chǎn)情況、GMP有效管理情況、疫苗生產(chǎn)和檢驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制情況、生物安全管理情況等。2015年檢查18家次，2016年檢查18家次，2017年檢查20家次。

3.2 產(chǎn)品監(jiān)督抽檢

不僅從企業(yè)成品庫(kù)抽檢，而且從產(chǎn)品流通、使用環(huán)節(jié)著手，加強(qiáng)對(duì)政府招標(biāo)采購(gòu)重大動(dòng)物疫病疫苗的監(jiān)管，并且逐年增加流通、使用環(huán)節(jié)的抽檢數(shù)量。近三年共監(jiān)督抽檢重組禽流感H5亞型滅活疫苗130批次，合格率均為100%。

3.3 成品批簽發(fā)制度

每批獸用生物制品在出廠前須經(jīng)監(jiān)管部門審查批準(zhǔn)后，產(chǎn)品方可上市銷售。中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所調(diào)整了批簽發(fā)環(huán)節(jié)工作方式，提高產(chǎn)品批簽發(fā)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，將獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)改為企業(yè)成品的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量取得了較好效果。2015年重組禽流感病毒滅活疫苗批簽發(fā)批數(shù)為1 507批，2016年為1 715批，2017年為1 856批，簽發(fā)率均為100%。由此看出重組禽流感病毒滅活疫苗的批簽發(fā)批數(shù)呈明顯上升趨勢(shì)，2017年的批簽發(fā)批數(shù)較 2015年增長(zhǎng)了23.2%。

4 我國(guó)重組禽流感病毒H5亞型滅活疫苗的質(zhì)量分析

作為合格疫苗的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，一定要做到安全、有效和質(zhì)量可控。筆者根據(jù)企業(yè)上報(bào)的批簽發(fā)報(bào)告情況，以2016年至2017年農(nóng)業(yè)部規(guī)定的高致病性禽流感強(qiáng)制免疫疫苗重組禽流感病毒 H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）為例，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。隨機(jī)選取了4家疫苗生產(chǎn)企業(yè)，分別為3家雞胚生產(chǎn)工藝（簡(jiǎn)稱為企業(yè)1、企業(yè)2、企業(yè)3）和1家懸浮細(xì)胞生產(chǎn)工藝（簡(jiǎn)稱為企業(yè) 4），從疫苗的安全性和效力兩方面對(duì)重組禽流感病毒 H5亞型滅活疫苗進(jìn)行質(zhì)量分析，為疫苗生產(chǎn)企業(yè)提供改進(jìn)生產(chǎn)工藝、提升疫苗質(zhì)量的建議。

4.1 疫苗的安全性分析

對(duì)4家企業(yè)在2016至2017年生產(chǎn)的488批次疫苗安全檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，所有批次均符合規(guī)定。這與現(xiàn)地反饋重組禽流感病毒滅活疫苗在免疫后一般無(wú)可見(jiàn)不良反應(yīng)的說(shuō)法相一致，但在局部地區(qū)偶有發(fā)生蛋雞免疫后產(chǎn)蛋率下降的現(xiàn)象。經(jīng)分析，造成此現(xiàn)象有兩個(gè)方面原因。一是免疫過(guò)程對(duì)蛋雞的應(yīng)激會(huì)造成短時(shí)間的產(chǎn)蛋率下降，但此影響過(guò)程是短暫的。有報(bào)道指出，處于產(chǎn)蛋期的蛋雞對(duì)應(yīng)激因素敏感，對(duì)外界任何刺激都會(huì)表現(xiàn)出一定的應(yīng)激反應(yīng)，在接種后產(chǎn)蛋率一般都會(huì)出現(xiàn) 2—3周的下降[24]。因此，為了減少這種情況的發(fā)生，在產(chǎn)蛋高峰期接種的雞群，可以在接種免疫前后各3 d，在飲水后飼料中添加電解多維、維生素C等抗應(yīng)激劑，緩解和降低各種應(yīng)激反應(yīng)。同時(shí)，將疫苗恢復(fù)至室溫，在傍晚注射也可降低應(yīng)激反應(yīng)。從疫苗本身講，不排除疫苗中雜蛋白含量較高或甲醛、內(nèi)毒素含量較高而引起的疫苗免疫副反應(yīng)，可通過(guò)抗原純化和降低內(nèi)毒素含量等措施來(lái)減少疫苗副反應(yīng)的發(fā)生。

4.2 疫苗的效力分析

對(duì)4家企業(yè)的488批次重組禽流感病毒H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）的效力檢驗(yàn)數(shù)據(jù)情況進(jìn)行分析，其中2016年生產(chǎn)327批，2017年生產(chǎn)161批。檢測(cè)方法均為血清學(xué)方法。

4.2.1 Re-6株、Re-7株、Re-8株不同組分效價(jià)的比較 435批雞胚生產(chǎn)工藝疫苗Re-6株組分抗體效價(jià)的幾何平均滴度（GMT）為8.7 log2；Re-7株組分抗體效價(jià) GMT為 7.4 log2；Re-8株組分抗體效價(jià)GMT為8.7 log2。53批懸浮培養(yǎng)工藝疫苗Re-6株組分抗體效價(jià)GMT為8.3 log2；Re-7株組分抗體效價(jià)GMT為8.1 log2；Re-8株組分抗體效價(jià)GMT為8.2 log2。由此可以看出，所有批次疫苗抗體效價(jià)GMT至少高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（6 log2）1個(gè)滴度以上，而Re-6株和Re-8株組分抗體效價(jià)GMT至少高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)2個(gè)滴度以上。對(duì)于雞胚生產(chǎn)工藝疫苗而言，Re-6株和Re-8株組分抗體效價(jià)GMT基本一致，均高于Re-7株組分1個(gè)滴度以上，在生產(chǎn)工藝規(guī)程要求抗原配比為 1∶2∶1的情況下，說(shuō)明 Re-6株和 Re-8株病毒的雞胚適應(yīng)性明顯優(yōu)于 Re-7株。而懸浮培養(yǎng)工藝疫苗的3個(gè)組分，抗原按生產(chǎn)工藝規(guī)程要求配比為1∶2∶1的情況下，抗體效價(jià)的幾何平均滴度基本一致，說(shuō)明 Re-7株的細(xì)胞適應(yīng)性優(yōu)于雞胚適應(yīng)性。雞胚生產(chǎn)工藝疫苗3個(gè)組分中有2個(gè)組分抗體效價(jià)GMT高于懸浮培養(yǎng)工藝疫苗近0.5個(gè)滴度，加之生產(chǎn)工藝技術(shù)環(huán)節(jié)較懸浮培養(yǎng)工藝操作簡(jiǎn)單，因此是市場(chǎng)占有量遠(yuǎn)高于懸浮培養(yǎng)工藝疫苗的主要原因。

4.2.2 不同生產(chǎn)年份疫苗效價(jià)的比較 4家企業(yè)2016年共生產(chǎn)三價(jià)疫苗 327批，2017年共生產(chǎn) 161批。從不同組分抗體效價(jià) GMT（圖 1）可以看出，4個(gè)企業(yè)2017年生產(chǎn)疫苗的各組分抗體效價(jià)GMT均比2016年有所提高，說(shuō)明生產(chǎn)工藝的不斷成熟和優(yōu)化，企業(yè)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的進(jìn)一步嚴(yán)格把關(guān)。

4.2.3 不同生產(chǎn)企業(yè)間疫苗效價(jià)的比較 從 4家企業(yè)2016至2017年生產(chǎn)疫苗的不同組分抗體效價(jià)GMT（圖 2）可以看出，產(chǎn)品的效價(jià)雖然都超過(guò)了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但質(zhì)量水平還是參差不齊的，水平較高企業(yè)產(chǎn)品3個(gè)組分抗體效價(jià)的幾何平均滴度比較低者要高出1.5個(gè)滴度以上。

4.2.4 同一疫苗生產(chǎn)企業(yè)不同批次疫苗批間差異的情況 從4家企業(yè)2016至2017年生產(chǎn)疫苗的3個(gè)組分抗體效價(jià)GMT的最高值和最低值（圖3）可以看出各生產(chǎn)企業(yè)批間差異還是比較大，這雖有生產(chǎn)工藝不斷成熟和優(yōu)化的因素，但相近批次批間差異也會(huì)出現(xiàn)較大差異，說(shuō)明了企業(yè)生產(chǎn)工藝并不十分穩(wěn)定。究其原因，作為雞胚工藝疫苗的重要生產(chǎn)原料低免胚（或非免胚）的質(zhì)量批間差異較大；細(xì)胞工藝疫苗細(xì)胞的培養(yǎng)水平不穩(wěn)定，呈現(xiàn)出同一批次產(chǎn)品 3個(gè)組分滴度水平較一致，但整體出現(xiàn)高低起伏的特點(diǎn)，可以用“一損俱損，一榮俱榮”來(lái)形容。

圖1 不同生產(chǎn)年份不同組分疫苗抗體效價(jià)的比較Fig. 1 Antibody titer comparison of different components in different production year

5 我國(guó)禽流感病毒滅活疫苗生產(chǎn)工藝的改進(jìn)及發(fā)展方向

5.1 生產(chǎn)工藝改進(jìn)方向 好疫苗的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，一定要安全性高、免疫效果好、副反應(yīng)很小或無(wú)副反應(yīng)?，F(xiàn)有禽流感病毒 H5亞型滅活疫苗的安全性高，對(duì)同分支的禽流感流行毒株免疫效果好。滅活疫苗中含有的甲醛和細(xì)菌內(nèi)毒素是造成疫苗副反應(yīng)的直接原因，因此改進(jìn)生產(chǎn)工藝，降低疫苗中甲醛和細(xì)菌內(nèi)毒素的含量，可以降低疫苗的副反應(yīng)。

圖2 不同生產(chǎn)企業(yè)間疫苗效價(jià)的比較Fig. 2 Comparison of vaccine antibody titer from different manufacturers

圖3 同一疫苗生產(chǎn)企業(yè)不同批次疫苗抗體效價(jià)批間差異的情況Fig. 3 Difference of antibody titer between different batch vaccines in the same manufacturer

5.1.1 離心純化工藝 通過(guò)連續(xù)離心后過(guò)濾的方式去除收獲尿囊液中的雜質(zhì)（如蛋殼、卵黃液等）、雜蛋白以及降低污染細(xì)菌的數(shù)量。這樣既可有效的降低滅活時(shí)甲醛的使用量，又可以降低細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。

5.1.2 濃縮純化工藝 通過(guò)超濾濃縮設(shè)備及配套膜包進(jìn)行抗原液的濃縮和甲醛的洗脫，可有效提高抗原含量和降低抗原液中的甲醛含量。

5.1.3 滅活劑的選擇 甲醛是最傳統(tǒng)的、應(yīng)用最廣泛的滅活劑，但也存在刺激性強(qiáng)、致癌危險(xiǎn)、降低免疫原性、滅活效果受多種因素影響等缺陷。β-丙內(nèi)酯（BPL）對(duì)病毒具有很強(qiáng)的滅活作用[25]，而且能在疫苗液體中完全水解，不必考慮在成品疫苗中的殘留，接種反應(yīng)也輕微。但與甲醛相比，BPL對(duì)細(xì)菌的滅活效果不理想且價(jià)格昂貴。鹽酸聚六亞甲基胍（PHMG），具有使用濃度低、作用速度快，性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水的特點(diǎn)，常溫下使用具有廣譜高效、長(zhǎng)期抑菌作用、毒性低和使用安全等優(yōu)點(diǎn)，但 PHMG價(jià)格較貴，不易推廣應(yīng)用。二乙烯亞胺（BEI），具有不損傷病毒的抗原性和免疫原性的優(yōu)點(diǎn)[26]，但對(duì)細(xì)菌的殺滅作用較弱且有誘導(dǎo)產(chǎn)生突變型病毒株可能。BEI現(xiàn)已成功地用于疫苗的生產(chǎn)，特別是由于其保存、毒性及成本等方面的優(yōu)勢(shì)而被廣泛采用[27]。有研究表明，BEI在滅活流感病毒感染性的同時(shí)，能較好地保持病毒的抗原性[28]，并可減少疫苗的毒副作用，是開(kāi)發(fā)研制禽流感病毒滅活疫苗的新型滅活劑。

5.2 禽流感疫苗的發(fā)展方向

就目前所研制的禽流感疫苗來(lái)看，雞胚生產(chǎn)工藝的全病毒滅活疫苗占據(jù)主流市場(chǎng)。主要原因是雞胚生產(chǎn)工藝繁殖病毒的含量高，對(duì)同分支的禽流感流行毒免疫效果良好，生產(chǎn)工藝技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單，免疫持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)等特點(diǎn)。但雞胚作為疫苗的生產(chǎn)基質(zhì)，存在受雞胚來(lái)源、質(zhì)量及自身不穩(wěn)定性的影響，造成疫苗批間質(zhì)量差異顯著以及大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)暴露性接種和收獲增加了生物安全風(fēng)險(xiǎn)。而且由于雞胚的大小不一，限制了自動(dòng)化接種、收獲，生產(chǎn)效率無(wú)法大幅度提高；雞胚中雜蛋白還可能引起過(guò)敏反應(yīng)。另外，大批量雞胚的廢棄雞胚的處理也給企業(yè)及環(huán)境帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)。

采用懸浮細(xì)胞工藝可進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，縮短了生產(chǎn)周期，具有自動(dòng)化控制程度高、批間差異相對(duì)較小和產(chǎn)品均一性程度高等優(yōu)點(diǎn)。但目前免疫效果并不優(yōu)于雞胚工藝疫苗，而且由于疫苗中或多或少含有細(xì)胞碎片的原因，有可能帶來(lái)一些副反應(yīng)，這也是其沒(méi)有能夠占據(jù)主流市場(chǎng)的原因。如何進(jìn)一步提高禽流感病毒在懸浮細(xì)胞的繁殖滴度，優(yōu)化和提升生產(chǎn)工藝，是懸浮細(xì)胞工藝研究的發(fā)展方向。

目前研究的疫苗還有重組活載體疫苗、亞單位疫苗、核酸疫苗、通用疫苗等。其中，重組活載體疫苗克服了滅活苗所存在的一些問(wèn)題，可同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫[29]，但有母源抗體的家禽接種后效果并不理想且接種后不易通過(guò)監(jiān)測(cè)抗體水平確認(rèn)免疫效果。亞單位疫苗制作成本過(guò)高，免疫期短，不適于用作生產(chǎn)用疫苗，只能作為一種實(shí)驗(yàn)室研究手段。核酸疫苗是當(dāng)前禽流感疫苗研究的前沿技術(shù)，其抗原合成和提呈過(guò)程與病原的自然感染相似，可同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，具有其他疫苗所不具備的優(yōu)點(diǎn)，是現(xiàn)階段禽流感疫苗硏制中最具理想前景的疫苗，也是禽流感疫苗研究的一大熱點(diǎn)。

在防控禽流感的過(guò)程中，最大的難題來(lái)自抗原漂移。由于頻繁的抗原漂移，使得常規(guī)疫苗常常需要不斷更新毒株才能維持保護(hù)力，這給實(shí)際生產(chǎn)帶來(lái)很多不便。具有交叉保護(hù)性的廣譜免疫原性的通用疫苗可以有效的解決這一難題[30]，是現(xiàn)階段流感疫苗研究的一個(gè)重要研究方向。