中西藥結(jié)合治療馬腺疫臨床案例分析

買(mǎi)占海，盧亞賓，沙婭?奴爾蘭，齊文靜，王德超，崔耀成，于維浩，況 玲

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，烏魯木齊830052；2.昭蘇縣西域馬業(yè)有限公司伊犁馬研究繁育中心，昭蘇 835600）

馬腺疫是由馬鏈球菌（Equine strangles streptococcus）馬亞種引起馬屬動(dòng)物的一種急性接觸性傳染病，屬于三類(lèi)動(dòng)物疫病，呈現(xiàn)散發(fā)性或地方流行性[1-3]。該病呈世界性分布，在新疆幾乎每年都要流行一次，其中馬駒最為易感，感染馬駒發(fā)病率達(dá)100%，直接影響幼駒生長(zhǎng)發(fā)育[4]。臨床常見(jiàn)有一過(guò)型腺疫、典型腺疫和惡性腺疫三種病型。臨床典型性癥狀為鼻黏膜急性卡他、體溫突然升高和頜下淋巴結(jié)急性炎性腫脹、化膿等。一過(guò)型腺疫病程1～3 d可自愈，典型腺疫患病馬初期體溫上升到39℃～40℃，頜下淋巴結(jié)急性炎性腫脹較硬，隨病情的發(fā)展表現(xiàn)為漿液性、膿性變化，病程為7～14 d[5]。而惡性腺疫患病馬病原菌由頜下淋巴結(jié)的化膿灶經(jīng)淋巴管或血液轉(zhuǎn)移到其他淋巴結(jié)及內(nèi)臟器官，造成全身癥狀?lèi)夯?，常因極度衰弱或繼發(fā)膿毒敗血癥而引起死亡[6]。本研究采用病史調(diào)查、臨床檢查以及實(shí)驗(yàn)室診斷相結(jié)合的方式對(duì)2例患病馬匹進(jìn)行了確診，并采用中西醫(yī)結(jié)合的治療方法對(duì)其進(jìn)行治療。為今后馬腺疫臨床診斷和防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例及藥品來(lái)源 2例患病馬匹來(lái)自新疆伊犁州昭蘇縣某牧民馬場(chǎng)；馬的品種為純血馬與伊犁馬的雜交改良母馬駒。中草藥購(gòu)自昭蘇縣安泰平價(jià)大藥房；獸用常規(guī)西藥均購(gòu)自天馬獸藥店。

1.2 主要試劑與材料 淀粉培養(yǎng)基、THB培養(yǎng)基、3%H2O2試劑購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；快速革蘭氏染液、鏈球菌細(xì)菌生化編碼鑒定管A203購(gòu)自杭州天和微生物有限公司；胎牛血清購(gòu)自Hyclone公司。

1.3 病例診斷

1.3.1 病史調(diào)查及臨床檢查 病案一：2014年4月10日某牧民一匹9月齡雜交改良母馬駒，肌肉注射4支160萬(wàn)IU青霉素鈉，1次/d，連用3 d，治療無(wú)效。問(wèn)診：得知該患病馬所居馬舍曾有馬腺疫疫情，發(fā)病率及感染率較高，與其同舍飼喂的8匹馬駒也陸續(xù)出現(xiàn)流鼻涕，下頜淋巴結(jié)腫大等癥狀。視診：精神沉郁，食欲不振，流膿性鼻涕（圖1a）。觸診：左側(cè)下頜淋巴結(jié)腫大，堅(jiān)硬如雞蛋大小，右側(cè)肩前淋巴結(jié)腫大硬而呈鵝蛋大（圖1b），腹股溝淋巴結(jié)腫脹（圖1c），右后肢大腿外側(cè)腫脹（圖1d），如拳頭大小，較硬。常規(guī)檢查：體溫升高至39.9℃，呼吸10次/min，脈搏33次/min。

病案二：2014年1月18日某馬場(chǎng)一匹7月齡雜交改良公駒患病，160萬(wàn)IU青霉素鈉4支，磺胺嘧啶鈉注射液10 mL，靜脈推注，1次/d，連用2 d，但是治療效果不佳。問(wèn)診：得知病馬體質(zhì)較差，瘦弱，曾反復(fù)4次復(fù)發(fā)馬腺疫，每次發(fā)病間隔時(shí)間約2～3 w左右，最長(zhǎng)間隔時(shí)間為40 d均用西藥抗生素治療且治愈，但治愈后又復(fù)發(fā)，與該馬同舍飼喂的32匹斷奶公馬駒中也出現(xiàn)患病癥狀。視診：精神沉郁，流黃色膿性鼻涕（圖1e），呼吸困難，食欲正常、體型偏瘦。觸診：左側(cè)下頜淋巴結(jié)腫大呈拳頭大小，咽下淋巴結(jié)及頸部腫大呈皮球大小，且堅(jiān)硬（圖1f）。常規(guī)檢查：體溫升高至40.3℃，呼吸11次/min，脈搏32次/min。

圖1 患病馬匹臨床癥狀Fig.1 Clinical symptoms of diseased horses

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

1.3.2.1 細(xì)菌的分離鑒定 采集患病馬匹的膿汁、馬鼻拭子、陰道分泌物、全血樣品分別接種于10%犢牛血清 THB 培養(yǎng)基和含5%羊鮮血 THB 固體培養(yǎng)基上，37℃溫箱培養(yǎng) 24 h。

1.3.2.2 掃描電鏡檢測(cè) 分離純化的菌落形態(tài)穩(wěn)定，在電鏡下觀察菌株的具體形態(tài)。

1.3.2.3 PCR 檢測(cè) 使用細(xì)菌通用引物和常規(guī)PCR體系對(duì)病案1中病馬的鼻試子、下頜膿汁及病案2中病馬的鼻試子樣品菌株進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA PCR檢測(cè)，并對(duì)獲得的序列進(jìn)行克隆測(cè)序。

1.3.2.4 初步生化鑒定 將PCR鑒定陽(yáng)性菌株按照鏈球菌生化編碼鑒定手冊(cè)（GYZ-12ST）操作，對(duì)分離菌進(jìn)行生化試驗(yàn)驗(yàn)證[8,9]，觀察鑒定管顏色變化，結(jié)合鑒定手冊(cè)判定結(jié)果。

1.4 治療 治療原則：抗菌消炎，清熱解毒、散瘀消腫、托里排膿、補(bǔ)虛健脾、利咽喉。 病案一，西藥治療：青霉素80萬(wàn)IU×10支、磺胺嘧啶鈉注射液10～20 mL，靜脈注射，連續(xù)用藥3 d；西藥停用后，采用中藥透膿散加減：黃芪12 g、川芎10 g、當(dāng)歸5 g、皂角刺5 g、金銀花10 g、茯苓5 g、陳皮5 g、黨參5 g、山甲（炒末）3 g進(jìn)行治療，一劑/d內(nèi)服，外敷用魚(yú)石脂軟膏涂抹腫脹處，連用5 d至膿破潰。病案二，西藥治療：一次性靜脈注射（0.9%氯化鈉注射液500 mL、頭孢曲松鈉4 g、10%葡萄糖注射液500 mL，磺胺嘧啶鈉、維生素B12、復(fù)合維生素B各10 mL，10%葡萄糖酸鈣注射液500 mL，）并再安乃近10 mL肌肉注射，體溫恢復(fù)正常38.7℃；停用西藥7 d后，中藥用透膿散加減：黃芪12 g、川芎10 g、當(dāng)歸5 g、皂角刺2 g、金銀花10 g、茯苓10 g、陳皮10 g、黨參5 g、山甲（炒末）3 g，連喂7 d，全身膿腫均破潰，此后未見(jiàn)病情復(fù)發(fā)。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌的分離鑒定結(jié)果 采集的樣品接種在含10%犢牛血清的THB固體培養(yǎng)基中細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，而在含5%綿羊血的THB固體培養(yǎng)基中分別出現(xiàn)型溶血現(xiàn)象，呈露珠狀小菌落，周?chē)纬赏耆该鞯娜苎h(huán)（圖2A，圖2B）。挑取單個(gè)菌落經(jīng)革蘭氏染色，顯微鏡下觀察到革蘭氏陽(yáng)性鏈球菌，呈長(zhǎng)鏈狀排列（圖2C）。

圖2 馬鏈球菌的分離培養(yǎng)與鑒定Fig.2 Identification and culture of Equine strangles strepotococcus

2.2 電鏡掃描檢測(cè) 純化的菌株在電鏡下呈現(xiàn)長(zhǎng)鏈狀（圖3A），長(zhǎng)橢圓形，無(wú)鞭毛（圖3B）。

2.3 PCR 檢測(cè)結(jié)果 使用細(xì)菌通用引物和常規(guī)PCR體系對(duì)病案1中病馬的鼻試子、下頜膿汁及病案2中病馬的鼻試子樣品進(jìn)行細(xì)菌16S rDNA PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，在1500 bp左右均出現(xiàn)明顯的目的條帶，見(jiàn)圖4。經(jīng)測(cè)序鑒定感染菌株為馬鏈球菌，并將鑒定陽(yáng)性的菌株命名為ZS-1、ZS-2、ZS-3。

圖3 電鏡下菌株形態(tài)Fig.3 Electron microscopic observation on the morphology of strain

圖4 16S rDNA PCR 鑒定結(jié)果Fig.4 PCR results for 16S rDNA

2.4 生化鑒定結(jié)果 根據(jù)細(xì)菌生化GYZ-12st編碼鑒定手冊(cè)鑒定鏈球菌，認(rèn)定指數(shù)接近100%，證實(shí)結(jié)果可靠。由此，進(jìn)一步證實(shí)病案1和病案2中的馬均患惡性馬腺疫。

2.5 治療效果 病案一：西藥停用后，內(nèi)服中藥，用藥d3時(shí)，下頜淋巴結(jié)及肩前淋巴結(jié)膿腫破潰，體溫40.1℃；用藥d4時(shí)大腿處膿腫破潰，體溫39.5℃；用藥d5時(shí)，腹股溝淋巴結(jié)處膿腫破潰，體溫38.9℃，病情基本恢復(fù)，食欲增強(qiáng)。病案二：治療d3時(shí)，馬駒精神恢復(fù)正常，食欲增強(qiáng)；治療d5，體溫恢復(fù)正常（38.7℃），左側(cè)下頜淋巴結(jié)膿腫破潰，咽部膿腫變軟；d7時(shí)，后咽下淋巴結(jié)破潰；d15時(shí)后傷口愈合，此后未見(jiàn)病情復(fù)發(fā)。

表1 鏈球菌GYZ-12st編碼鑒定結(jié)果Table 1 Streptococcus GYZ-12st code identification results

3 討論

在昭蘇縣，馬腺疫一般發(fā)生于秋末及寒冬季節(jié)，春夏兩季偶爾也會(huì)發(fā)生，其主要感染當(dāng)歲馬駒，尤其是 6 月齡 ～ 1 歲馬駒，斷奶后多發(fā)，舍飼馬發(fā)病率高于放牧或散養(yǎng)馬匹，主要侵蝕馬駒免疫系統(tǒng)，造成全身感染，感染后的馬駒產(chǎn)生抗體后一般不會(huì)復(fù)發(fā)，體質(zhì)較差，未產(chǎn)生抗體的馬匹容易反復(fù)發(fā)作，影響馬駒生長(zhǎng)發(fā)育。

病案一和病案二中馬駒均在斷奶后發(fā)病，臨床表現(xiàn)精神沉郁，體溫升高，流膿性鼻涕，下頜淋巴結(jié)腫大，咽下淋巴結(jié)，肩前淋巴結(jié)，腹股溝淋巴結(jié)呈不同程度的腫大。由于應(yīng)用抗生素治療藥物劑量不足，導(dǎo)致治療效果不理想。本病案中，將磺胺嘧啶鈉和青霉素鈉劑量加大治療，其效果作為確診的診斷依據(jù)之一。這實(shí)際上是治療性診斷的一種，也是獸醫(yī)臨床實(shí)踐中常用的方法。磺胺嘧啶鈉為磺胺類(lèi)抗生素藥物，馬腺疫爆發(fā)時(shí)短期應(yīng)用，效果較好。長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)出現(xiàn)磺胺藥中毒癥狀，因此只能按推薦濃度連用 3 d，最多不得超過(guò)5 d。本研究發(fā)現(xiàn)中草藥透膿散對(duì)于治療馬腺疫具有很好的療效。《透膿散》是著名的外科托法中的治病劑，出自明代醫(yī)家陳實(shí)功的《外科正宗》[10]。使用復(fù)方托里透膿散，具有托毒排膿功效，其復(fù)方中草藥具有補(bǔ)益氣血的作用，主要醫(yī)治癰疽內(nèi)膿已經(jīng)形成了但是其不能迅速破潰的患者，其中方劑中的穿山甲和皂角刺兩味藥相同功效在于攻堅(jiān)消腫和透膿外達(dá)，歸尾與川芍兩味藥相配伍具有養(yǎng)血活血以及扶助正氣的功效[11]。本研究采用托里透膿散進(jìn)行治療，膿腫部位迅速成熟破潰，創(chuàng)口迅速愈合達(dá)到了患馬治療效果，預(yù)后良好，為今后治療馬腺疫提供參考依據(jù)。