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    辣椒種子貯藏蛋白質(zhì)亞基構(gòu)成及親緣關(guān)系分析

    2018-09-10 07:11:20胡志輝陳禪友
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年15期
    關(guān)鍵詞:變種亞基點(diǎn)位

    胡志輝, 陳禪友

    [江漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/湖北省豆類(蔬菜)植物工程技術(shù)研究中心,湖北武漢 430056]

    辣椒(CapsicumannuumL.)現(xiàn)已成為中國的重要蔬菜和調(diào)味品,生產(chǎn)上迫切需要一些優(yōu)質(zhì)、抗病、高產(chǎn)的優(yōu)良品種,加強(qiáng)辣椒種質(zhì)資源的親緣關(guān)系研究,掌握種質(zhì)資源的分類地位和親緣關(guān)系是辣椒品種選育上一個(gè)新臺階的重要途徑[1]。種子貯藏蛋白質(zhì)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,簡稱SDS-PAGE)成為研究小麥、蕓薹屬、扁蓿豆、菜豆等植物親緣關(guān)系的有效手段[2-5],而辣椒種質(zhì)資源遺傳多樣性研究報(bào)道較少[6-12]。本試驗(yàn)運(yùn)用SDS-PAGE技術(shù)分析辣椒種子貯藏蛋白亞基構(gòu)成,研究辣椒種質(zhì)資源的遺傳多態(tài)性,確定辣椒3個(gè)主栽變種12個(gè)品種之間的親緣關(guān)系,為辣椒新品種選育工作的開展提供技術(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試材料均為成熟的辣椒種子(表1),由湖北省豆類(蔬菜)植物工程技術(shù)研究中心提供。

    表1 供試?yán)苯菲贩N名稱、來源及主要特征特性

    1.2 種子貯藏蛋白的提取及電泳

    參照胡志輝等的方法[13-14]提取辣椒種子貯藏蛋白并采用SDS-PAGE技術(shù)進(jìn)行電泳。辣椒種子貯藏蛋白提取緩沖液為丙三醇(甘油)5 mL+SDS 1 g+溴酚藍(lán)0.1 g+巰基乙醇2.5 mL,分別用0.2 mL蒸餾水、5%氯化鈉溶液、70%乙醇、0.2% NaOH提取上清液,即為水溶蛋白提取液(代號W)、鹽溶蛋白提取液(代號S)、醇溶蛋白提取液(代號P)、堿溶蛋白提取液(代號A)。SDS-PAGE分離膠T=12.5%,4 ℃左右條件下15 mA恒流電泳,點(diǎn)樣量18 μL,時(shí)間約8 h。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

    1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

    采用“0,1”系統(tǒng)記錄蛋白譜帶,構(gòu)建蛋白譜帶數(shù)據(jù)庫。品種間蛋白質(zhì)圖譜相似系數(shù)S[15]及品種間遺傳距離GD[16]計(jì)算公式分別為

    S=(品種間共有的條帶數(shù))/(2個(gè)品種中最多的條帶數(shù));

    GD=1-(2nxy)/(nx+ny)。

    式中:nxy是2個(gè)品種間共有的條帶數(shù);nx、ny分別是品種x、y的總條帶數(shù)。采用系統(tǒng)聚類最短距離法對12個(gè)辣椒品種進(jìn)行聚類分析[17],繪制聚類圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蛋白質(zhì)電泳檢測

    由圖1、表2可知,12個(gè)辣椒品種種子貯藏蛋白質(zhì)經(jīng) SDS-PAGE分析未檢測到醇溶蛋白,水溶蛋白、鹽溶蛋白、堿溶蛋白共檢測出25條蛋白質(zhì)亞基帶,有23條多態(tài)性帶,多態(tài)性率為92%,蛋白質(zhì)亞基分子量分布范圍是10 093~96 232 bp,蛋白質(zhì)亞基出現(xiàn)頻率變化幅度為0.08~1.00;點(diǎn)位帶編碼按分子量順序排列,堿溶蛋白、鹽溶蛋白、水溶蛋白分別檢出14、18、19條點(diǎn)位帶,其中有9條點(diǎn)位帶為3種貯藏蛋白所共有,第1、4、6點(diǎn)位帶為堿溶蛋白所特有,第22點(diǎn)位帶為鹽溶蛋白所特有,第20、21、23點(diǎn)位帶為水溶蛋白所特有;蛋白質(zhì)亞基分子量分別為43 668 bp的第9位點(diǎn)、26 605 bp 的第16位點(diǎn)的點(diǎn)位帶在所有品種中都出現(xiàn),是辣椒品種共同的種子貯藏蛋白質(zhì),其他出現(xiàn)頻度較高的點(diǎn)位帶有簇生椒類品種美國加州干椒王(編號5)缺少的第12點(diǎn)位帶、長椒類品種楚風(fēng)辣椒(編號8)缺少的第10點(diǎn)位帶、華椒17號(編號1)缺少的第15點(diǎn)位帶、豐力新選8819線椒(編號3)缺少的第24點(diǎn)位帶;第2點(diǎn)位帶只在豐力新選8819線椒中出現(xiàn),第5點(diǎn)位帶只在紫星2號(編號7)中出現(xiàn),第21點(diǎn)位帶只在紅星2號(編號2)中出現(xiàn);長椒類品種共檢測出20條蛋白質(zhì)亞基帶,有17條多態(tài)性帶,多態(tài)性率為85%,都具有第9、12、16點(diǎn)位帶,而沒有第3、5、14、21、23點(diǎn)位帶;燈籠椒類品種共檢測出23條蛋白質(zhì)亞基帶,有15條多態(tài)性帶,多態(tài)性率為65%,都具有第9、10、12、15、16、17、24、25點(diǎn)位帶,而沒有第2、7點(diǎn)位帶;簇生椒類品種共檢測出15條蛋白質(zhì)亞基帶,沒有出現(xiàn)第2、3、5、7、12、18、20、21、22、25點(diǎn)位帶。

    2.2 品種間的遺傳距離及遺傳相似系數(shù)

    由表3可知,利用蛋白位點(diǎn)共計(jì)算得到品種間66個(gè)相似系數(shù)(S)和遺傳距離(GD)值,遺傳距離變異范圍在0.067~0.615之間,平均值為0.278 4;8819線椒(編號4)、豐力新選8819(編號3)的GD值相對最小,為0.067,華椒17(編號1)、紅星2號(編號2)的GD值相對最大,為0.615;白星2號(編號11)和紅星2號、紅妃(編號9)和紫星2號(編號7)、玉妃(編號12)和橙星2號(編號10)的GD值為0.273,處于居中水平,說明品種間有一定的遺傳差異。

    2.3 聚類分析結(jié)果及親緣關(guān)系判斷

    根據(jù)品種間遺傳距離的大小,采用系統(tǒng)聚類最短距離法逐級歸類可得到聚類圖。由圖2可知,歐氏距離平方約為5時(shí),可將12個(gè)辣椒品種分為2大類,2大類之間的平均遺傳距離為0.313 1(平方歐式距離為9.818 7);第Ⅰ類包括燈籠椒類品種紫星2號(編號7)、美國甜椒(編號6)、紅星2號(編號2)、橙星2號(編號10)、白星2號(編號11)和簇生椒類品種美國加州干椒王(編號5),品種間的平均遺傳距離為0.236 7;第Ⅱ類包括長椒類品種8819線椒(編號3)、豐力新選8819(編號4)、楚風(fēng)辣椒(編號8)、紅妃(編號9)、玉妃(編號12)、華椒17(編號1),品種間的平均遺傳距離為0.250 6;最先合并在一起的有美國甜椒和紫星2號(歐氏距離平方為0.058 8)、8819線椒和豐力新選8819(歐氏距離平方為 0.059 9)、紅妃和玉妃(歐氏距離平方為0.067 8),說明這幾對品種間具有最近的遺傳距離,親緣關(guān)系也較近;簇生椒類變種與燈籠椒類變種在歐氏距離平方為0.115 9時(shí)被合并在一起,在歐氏距離平方為9.818 7時(shí)又與長椒類變種合并在一起。聚類分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,簇生椒類與燈籠椒類2個(gè)變種間具有很近的遺傳距離,平均遺傳距離為0.223 8,遺傳變異程度較小,具有較緊密的親緣關(guān)系;簇生椒類與長椒類2個(gè)變種間具有較遠(yuǎn)的遺傳距離,平均遺傳距離為0.310 3,遺傳變異程度較大,親緣關(guān)系較遠(yuǎn);燈籠椒類與長椒類2個(gè)變種間的遺傳距離相對最遠(yuǎn),平均遺傳距離為0.313 1,遺傳變異程度相對最大,親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

    3 結(jié)論

    采用SDS-PAGE分析辣椒3個(gè)主栽變種12個(gè)品種的種子貯藏蛋白質(zhì)亞基組成,未檢測到醇溶蛋白,水溶蛋白、鹽溶蛋白、堿溶蛋白共檢測出25條蛋白質(zhì)亞基帶,多態(tài)性率為92%,亞基分布范圍是10 093~96 232 bp,蛋白質(zhì)亞基出現(xiàn)頻率變化幅度為0.08~1.00。長椒類品種共檢測出20條蛋白質(zhì)亞基帶,多態(tài)性率為85%;燈籠椒類品種共檢測出23條蛋白質(zhì)亞基帶,多態(tài)性率為65%;簇生椒類品種共檢測出15條蛋白質(zhì)亞基帶。采用系統(tǒng)聚類最短距離法對12個(gè)辣椒品種進(jìn)行聚類分析,12個(gè)品種被分為2大類,類內(nèi)的平均遺傳距離分別為0.236 7、0.250 6,類間的平均遺傳距離為0.313 1。簇生椒類與燈籠椒類2個(gè)變種間具有很近的遺傳距離,平均遺傳距離為0.223 8,變種間的遺傳變異程度相對較小,具有較緊密的親緣關(guān)系;簇生椒類與長椒類2個(gè)變種間具有較遠(yuǎn)的遺傳距離,平均遺傳距離為0.310 3,變種間的遺傳變異程度較大,親緣關(guān)系較遠(yuǎn);燈籠椒類與長椒類2個(gè)變種間的遺傳距離相對最遠(yuǎn),平均遺傳距離為0.313 1,變種間的遺傳變異程度相對最大,親緣關(guān)系也最遠(yuǎn)。

    表2 12個(gè)辣椒品種種子貯藏蛋白電泳出現(xiàn)點(diǎn)位帶數(shù)和出現(xiàn)頻度

    表3 12個(gè)辣椒品種間的遺傳距離及遺傳相似系數(shù)

    注:對角線右上方的數(shù)字為遺傳距離,對角線左下方的數(shù)字為相似系數(shù)。

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