祝帥,朱鳳蒙,雍道敬
(青島中達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司,山東青島266109)
蘋果樹腐爛病俗稱臭皮病、爛皮病、串皮病,是一種為害極其嚴(yán)重的毀滅性病害,在我國各蘋果產(chǎn)區(qū)都有不同程度的發(fā)生,主要危害主枝主干,導(dǎo)致死枝死樹,嚴(yán)重時導(dǎo)致毀園,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,制約了我國蘋果產(chǎn)業(yè)的持續(xù)性發(fā)展[1-3]。2011年,王彩霞等[4]調(diào)查表明山東煙臺蘋果產(chǎn)區(qū)腐爛病不但發(fā)生嚴(yán)重且發(fā)病持續(xù)時間長,5月份調(diào)查時,枝條上仍有大量新發(fā)生而未經(jīng)刮治的病斑。而目前尚未發(fā)現(xiàn)有效抗腐爛病的栽培品種[5,6],國內(nèi)有關(guān)蘋果樹腐爛病的防治主要集中于藥劑方法[7]。為了篩選出防治蘋果樹腐爛病的高效殺菌劑,在室內(nèi)進(jìn)行了幾種殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌的藥效測定,并進(jìn)行田間藥效試驗,以期為腐爛病的防治提供理論依據(jù)。
供試菌株:蘋果樹腐爛病菌強致病力菌株LXS080301,采集自山東棲霞富士蘋果園。單菌絲分離后進(jìn)行致病力測定,保存于5℃冰箱,病原菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上活化后用于室內(nèi)抑菌作用測定。田間持效期試驗使用分生孢子懸浮液,將活化的菌絲接種到大麥粒培養(yǎng)基中,黑光燈下誘導(dǎo)產(chǎn)孢[8]。挑取分生孢子角,加入適量無菌水,混勻,用血球計數(shù)板將孢子懸浮液濃度調(diào)至1×104個/mL,加入終濃度為0.1%的吐溫-20,備用。孢子懸浮液現(xiàn)配現(xiàn)用,放置時間不超過1h。
供試果樹:蘋果樹腐爛病田間藥效試驗在膠州果園進(jìn)行,試驗用樹為4年生富士蘋果樹,果樹在進(jìn)行藥效試驗前5個月內(nèi)沒有使用過任何殺菌劑。
表1 供試原藥信息Table 1 Information of the test original medicine
供試藥劑:市售成品殺菌劑均通過加工形成相應(yīng)劑型,其中含多種助劑,為消除助劑對試驗的干擾,本試驗采用農(nóng)藥原藥配制母液的方法,以期能夠真實的反應(yīng)殺菌劑的性能[9,10]。根據(jù)已有的報道和經(jīng)驗,選擇對蘋果樹腐爛病菌可能有效的殺菌劑10種,供試原藥為各農(nóng)藥廠家生產(chǎn)的商品,名稱、有效成分含量、生產(chǎn)廠家詳見表1。
藥液配制及含藥平板制備:將稱量好的各藥劑分別用無菌水配置成所需最高濃度的100倍母液,再依次稀釋成各濃度。無菌條件下,將2mL各濃度藥液加入到98mL滅菌融化的PDA培養(yǎng)基中,搖勻后制備含藥平板。
測定方法:采用菌絲生長速率法。將腐爛病菌菌株LXS080301接種于PDA平板中央,25℃黑暗培養(yǎng)3d后,在菌落邊緣打取直徑6mm的菌餅。將菌餅接種于含有相應(yīng)濃度藥劑的PDA平板上,每個處理重復(fù)3次,以不含藥的培養(yǎng)基為空白對照。25℃黑暗培養(yǎng),待空白對照菌絲長至培養(yǎng)皿的2/3時,用十字交叉法測量菌落直徑,計算各處理對腐爛病菌的抑菌率。
式中,半徑的單位為mm。
選擇生長良好、健康無病的蘋果樹,用噴霧器將藥液均勻地噴灑到樹上,直到所有枝條都有藥液流下為止,每種藥劑處理1棵果樹,以噴灑清水的果樹為對照。
表2 病情指數(shù)分級標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Grading standard of disease index
在噴藥后的第 0d、7d、14d、21d,分別從每種藥劑(表3中各藥劑對應(yīng)的最優(yōu)濃度)處理果樹上剪取3個一年生枝條,在距離葉柄基部1cm處剪掉所有葉片,避免枝條上造成傷口。從枝條基部開始,截取2段長15cm的枝條,每種藥劑處理共計6段枝條。將孢子懸浮液均勻地噴灑到枝條上,直到有水滴流下為止,將接種后的枝條插于組培瓶中水培,轉(zhuǎn)移到25℃培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。10d后調(diào)查各處理枝條的病斑,按照表2(見上頁)中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病情分級。
根據(jù)調(diào)查結(jié)果計算腐爛病的病情指數(shù),同時計算各藥劑的防治效果。
由表3可知,不同種藥劑對蘋果樹腐爛病菌的抑菌率存在差異,同一藥劑稀釋倍數(shù)不同,抑菌效果也有差異。結(jié)果表明,供試的10種藥劑中,多菌靈、咪鮮胺、丙環(huán)唑?qū)μO果樹腐爛病菌的抑菌效果較好,在相對較低的濃度下,抑菌率仍高達(dá)98%以上,能顯著抑制腐爛病菌菌絲的生長。
表3 10種殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制作用Table 3 Inhibition of 10 kinds of fungicides on mycelial growth ofValsa mali
表4 10種殺菌劑噴藥后不同時間的防治效果Table 4 Protective effect of 10 kinds of fungicides at different times after spraying
表4顯示了不同藥劑對蘋果樹腐爛病的田間藥劑試驗,由表可以看出,供試10種殺菌劑中,噴藥后第0d接種腐爛病菌的處理對枝條的防治效果均能達(dá)到98%以上;噴藥后第7d接種腐爛病菌的處理,甲基硫菌靈、戊唑醇、肟菌酯、己唑醇及苯醚甲環(huán)唑的防治效果較差,為61.45%~68.98%,其他殺菌劑的保護(hù)效果均能達(dá)到83%以上;噴藥后第14d接種腐爛病菌的處理,多菌靈、咪鮮胺和丙環(huán)唑的保護(hù)效果較好,為80.40%~83.73%;藥后21d的處理,戊唑醇、肟菌酯、己唑醇以及苯醚甲環(huán)唑的保護(hù)效果都降至10%以下,與對照相當(dāng),說明上述藥劑已失去保護(hù)作用。而多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑的保護(hù)效果維持在60%以上,仍有一定的保護(hù)效果。
多菌靈是一種高效低毒的廣譜內(nèi)吸性殺菌劑,具有內(nèi)吸治療和保護(hù)作用。自20世紀(jì)70年代中期,其迅速代替有機(jī)汞、有機(jī)磷殺菌劑,其作用機(jī)理為干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成,影響細(xì)胞分裂而起到殺菌作用,對由半知菌和子囊菌等真菌引起的病害有特效[11,12]。咪鮮胺是一種廣譜高效的咪唑類殺菌劑,其作用機(jī)理為通過抑制麥角甾醇的生物合成,從而使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞而起作用[13,14],可防治由半知菌及子囊菌引起的多種病害,咪鮮胺具有預(yù)防、保護(hù)、治療等多重作用,但無內(nèi)吸性[15]。丙環(huán)唑是屬于甾醇抑制劑中的三唑類殺菌劑,其作用機(jī)理是影響甾醇的生物合成,使病原菌的細(xì)胞膜功能受到破壞,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡,從而起到殺菌、防病和治病的功效,具有殺菌譜廣泛、活性高、殺菌速度快、持效期長、內(nèi)吸傳導(dǎo)性強等特點,可防治子囊菌、擔(dān)子菌和半知菌引起的病害[16]。室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果表明,不同稀釋倍數(shù)的殺菌劑對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長均有一定的抑制作用,隨著稀釋倍數(shù)的增大,抑制效果減弱,其中多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑?qū)Ω癄€病菌菌絲的抑制作用較好。田間藥效試驗也發(fā)現(xiàn),所測試的10種藥劑在噴藥后第0d和第7d能有效地保護(hù)枝條免受蘋果樹腐爛病菌的侵染,噴藥后的14d,保護(hù)效果明顯下降,噴藥后的第21d只有多菌靈、咪鮮胺及丙環(huán)唑的保護(hù)效果維持在60%以上,這在室內(nèi)試驗中也得到了驗證。
蘋果樹腐爛病具有潛伏侵染的性質(zhì),因此,加強果園的栽培管理,增強樹勢,提高果樹的抗病力,是綜合防治的關(guān)鍵。在實際病害防治中建議以多菌靈(有效成分)為主,并與以有效成分為丙環(huán)唑或咪鮮胺的藥劑交替使用。