氣相色譜質(zhì)譜法檢測(cè)雞蛋中五氯酚酸鈉殘留

五氯苯酚（PCP）是一種有毒農(nóng)藥，常用于木材防腐、殺真菌、殺蟲(chóng)等。我國(guó)曾大量將五氯酚酸鈉（PCP-Na）用于殺滅釘螺。同時(shí)五氯酚酸鈉也為觸殺型滅生性除草劑，主要用于防除稗草和其他多種由種子萌發(fā)的幼草。

五氯酚酸鈉可由呼吸道、消化道以及皮膚進(jìn)入人體，在酸性條件下轉(zhuǎn)化為五氯苯酚，微量的五氯苯酚即可導(dǎo)致人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝、腎損傷及內(nèi)分泌紊亂。《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定：五氯酚酸鈉禁止使用于食品中。

雞蛋作為一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，蛋白質(zhì)含量豐富的食品，深受人們的喜愛(ài)。蛋黃主要由卵黃磷蛋白組成，脂肪含量高，其中脂肪主要為卵磷脂，磷脂具有非常好親水性。國(guó)標(biāo)GB 29708的前處理方法無(wú)法有效除去雞蛋中的磷脂，使試樣中含有大量脂肪，不僅降低了目標(biāo)物的提取效率，還極易污染檢測(cè)設(shè)備，給五氯酚酸鈉的檢測(cè)帶來(lái)了較大困難。

材料與方法

試劑與儀器

五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/mL（曼哈格）；甲醇 （迪馬公司，色譜純）；衍生試劑（乙酸酐：吡啶=1：1）；0.2mol/L碳酸鉀水溶液；5%三氯乙酸水溶液；濃鹽酸；濃硫酸。

實(shí)驗(yàn)室用水都為超純水。

Agilent 7890B-Agilent 7000C氣質(zhì)聯(lián)用儀（配置EI源）；Millipore超純水機(jī)；西格瑪高速離心機(jī)；漩渦混合器；分析天平（感量0.1mg）；恒溫干燥箱；氮吹儀；50mLPPOC高速離心管。

方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密吸取五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL，于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為1μg/mL的五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃以下保存。

取適量的1μg/mL五氯酚酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水配制成濃度為10、20、40、60、80、100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

樣品液的制備

準(zhǔn)確稱取混合均勻的試樣2.00g于50mL具塞離心管中，加入5%三氯乙酸溶液（3.9）10mL、濃鹽酸0.5mL和正己烷10mL，高速渦旋提取1min，8000r/min離心5min，收集有機(jī)層于50mL離心管中。再用20 mL正己烷分2次洗滌殘?jiān)?，合并有機(jī)層，再向有機(jī)相中加入濃硫酸0.5mL，小心振搖，靜置2min，8000r/min離心5min，收集上清液，于45℃氮?dú)獯抵两?。殘余物中加入正己?.0mL，加入乙酸酐-吡啶溶液0.2mL，密封，于60℃反應(yīng)15min，冷卻，加碳酸鉀溶液0.5mL，充分混勻，靜置分層，取有機(jī)相，供氣相色譜質(zhì)譜儀測(cè)定。同時(shí)用空白樣品做空白實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)條件

色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）；

升溫程序：60℃保持1min，以15℃/min升溫到280℃保持10分鐘。

進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；

不分流時(shí)間：0.75min；

進(jìn)樣量：1μL；

進(jìn)樣口溫度：260℃

載氣：氦氣（99.999%）；

恒流模式：1mL/min；

離子源溫度：280℃；

傳輸線溫度：280℃；

掃描模式：選擇離子檢測(cè)，檢測(cè)離子（m/z）：266（定量），308，237，165，130。

結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)原理

GB 29708-2013使用水提取試樣中的五氯酚酸鈉，三氯乙酸脫蛋白。五氯酚酸鈉在酸性條件下轉(zhuǎn)化為五氯苯酚，使用乙酸乙酯-環(huán)己烷（1︰1）提取五氯苯酚，后經(jīng)衍生，生成五氯苯乙酸酯（PCP-OAc），使用氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定PCP-OAc的含量，來(lái)獲得五氯酚酸鈉的含量。

雞蛋中除豐富的蛋白質(zhì)外，卵黃中還含有大量的磷脂，磷脂具有較好的親水性和脂溶性，無(wú)法使用GB 29708的前處理方法除去。而五氯苯酚在脂肪中的溶解度較大，要保證檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度，就必然帶入大量的磷脂，過(guò)量的磷脂將嚴(yán)重影響衍生效果和污染檢測(cè)設(shè)備。本方法直接使用正己烷提取，簡(jiǎn)化了提取操作。在衍生前，通過(guò)加入濃硫酸來(lái)脫去脂肪，排除磷脂產(chǎn)生的不良影響，提高了檢測(cè)效率，保證了靈敏度和準(zhǔn)確度。該方法也可用于其他脂肪含量高的樣品中五氯酚酸鈉的測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別取濃度為10、20、40、60、80、100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0mL，置于50mL離心管中，以下操作步驟同樣品溶液的制備。以特征離子質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

圖1 PCP-Oac的色譜圖（上）和質(zhì)譜圖（下）

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

雞蛋的稱樣量為2.00g，添加濃度為5μg/kg，20μg/kg，50μg/kg三個(gè)水平，各做三個(gè)平行樣，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、樣品加標(biāo)和樣品圖譜見(jiàn)圖4，測(cè)定結(jié)果和精密度見(jiàn)表1。

圖3 樣品圖譜（自上而下依次為標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品加標(biāo)、空白樣品）

表1 加標(biāo)回收率和精密度

由圖3可見(jiàn)，凈化效果良好，且對(duì)檢測(cè)沒(méi)有干擾。本方法在雞蛋中的加標(biāo)濃度為5μg/kg時(shí)，回收率為109%，重復(fù)性RSD為3.6%；加標(biāo)濃度為20μg/kg時(shí)，回收率為109%，重復(fù)性RSD為2.9%；加標(biāo)濃度為50μg/kg時(shí)，回收率為113%，重復(fù)性RSD為4.1%，以上數(shù)據(jù)表明該方法檢測(cè)雞蛋中的五氯酚酸鈉穩(wěn)定可靠。方法檢出限以3倍信噪比計(jì)算得到，本方法測(cè)定雞蛋中五氯酚酸鈉的檢出限為0.5μg/kg。

圖4 樣品加標(biāo)量為5μg/kg的提取離子流圖

結(jié)論

雞蛋中的五氯酚酸鈉在酸性條件下，經(jīng)正己烷提取，濃硫酸脫脂，衍生后經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定確認(rèn)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：本法五氯酚酸鈉的回收率為106.1%-118.4%，平行測(cè)定結(jié)果的RSD值≤5%，方法檢出限為0.5μg/kg，能夠滿足雞蛋中五氯酚酸鈉殘留量的檢測(cè)要求。同時(shí)該方法也拓展到其他脂肪含量高的樣品中五氯酚酸鈉的測(cè)定。