玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦詫?duì)其酶水解效率的影響

汪兵 劉葦 劉璐 張培青 侯慶喜

摘 要：利用農(nóng)業(yè)廢棄物進(jìn)行生物質(zhì)精煉以生產(chǎn)生物質(zhì)燃料對(duì)于緩解能源危機(jī)和降低環(huán)境污染具有重要意義。酶水解玉米芯殘?jiān)a(chǎn)可發(fā)酵糖，通過(guò)PFI打漿預(yù)處理改變玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦?，進(jìn)而借助主成分分析和多元線性回歸分析方法研究了玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦詫?duì)其酶水解效率的影響。結(jié)果表明，PFI打漿可明顯改變玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦?，顯著提高其酶水解效率；玉米芯殘?jiān)拿杆夥磻?yīng)符合擬二級(jí)反應(yīng)模型；建立了酶水解效率與底物特性之間的多元線性回歸模型；保水值和打漿度對(duì)酶水解效率的影響最顯著，平均粒徑和比表面積的影響次之，而表面電荷密度的影響最小。

關(guān)鍵詞：玉米芯殘?jiān)?；酶水解；PFI打漿；葡萄糖轉(zhuǎn)化率；多元線性回歸模型

中圖分類號(hào)：TS721；TQ353.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.11981/j.issn.1000-6842.2018.04.17

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展和化石能源的日益枯竭，發(fā)展新型、可再生的綠色能源成為大勢(shì)所趨。生物質(zhì)資源以其儲(chǔ)量豐富、價(jià)格低廉和可再生等優(yōu)點(diǎn)日益受到人們的關(guān)注。我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，每年產(chǎn)生大量的農(nóng)業(yè)廢棄物。其中，玉米芯是一種典型的農(nóng)業(yè)廢棄物，被廣泛用于生產(chǎn)糠醛、木糖以及木糖醇等產(chǎn)品[1-2]。而在生產(chǎn)這些化工產(chǎn)品的過(guò)程中產(chǎn)生了大量的玉米芯殘?jiān)?。目前，關(guān)于玉米芯殘?jiān)奶幚?，大多是作為燃料直接燃燒或者直接廢棄于野外，這不僅是對(duì)資源的浪費(fèi)，同時(shí)也造成了一系列嚴(yán)重的環(huán)境污染問(wèn)題[3]。由于玉米芯中大部分半纖維素被提取出來(lái)生產(chǎn)木糖醇等化工產(chǎn)品，使得剩下的玉米芯殘?jiān)械睦w維素含量高達(dá)50%～60%[4]。同時(shí)，由于經(jīng)過(guò)工業(yè)加工處理，使得玉米芯殘?jiān)慕Y(jié)構(gòu)變得疏松多孔，對(duì)生物酶的頑抗性大大降低，從而具有良好的生物酶解性[5]。因此，利用玉米芯殘?jiān)鳛樵线M(jìn)行纖維素酶水解制備可發(fā)酵糖，進(jìn)而應(yīng)用于后續(xù)發(fā)酵工藝生產(chǎn)燃料乙醇等生物質(zhì)能源產(chǎn)品，將具有良好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和應(yīng)用前景。

目前，國(guó)內(nèi)外有許多學(xué)者在玉米芯的酶水解方面做了大量研究，而關(guān)于玉米芯殘?jiān)拿杆夥矫娴难芯枯^少。Lou等[6]研究了木素磺酸鈉和長(zhǎng)鏈脂肪醇對(duì)玉米芯殘?jiān)芯勰咎敲杆獾挠绊?。Ouyang等[7]以玉米芯殘?jiān)鼮樵?，綜合酶水解、分離和酸處理等工藝，提出了一種兩步酶水解的方法。Xing等[8]研究了亞硫酸氫鹽預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)母邼饷杆獾挠绊?。但關(guān)于機(jī)械法預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)杆獾挠绊懛矫娴膱?bào)道很少，尤其在預(yù)處理后，定量分析玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦詫?duì)其酶水解效率的影響方面的研究更是未見報(bào)道。

因此，以玉米芯殘?jiān)鼮樵?，利用PFI打漿預(yù)處理提高其酶水解效率，是一種“變廢為寶”的綠色工藝，符合可持續(xù)發(fā)展的理念；同時(shí)，進(jìn)一步研究底物特性對(duì)其酶水解效率的影響，有利于更深入地理解非木材纖維原料的酶水解機(jī)理，完善纖維原料的酶水解理論體系，對(duì)提高酶水解效率和提高原料利用率等方面有重要意義。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原料

玉米芯殘?jiān)蓢?guó)內(nèi)某廠提供，主要化學(xué)組分為：聚葡萄糖59.84%，聚木糖3.28%，酸不溶木素19.01%，酸溶木素1.45%，乙醇抽出物12.60%，灰分1.69%。纖維素酶液，酶活為94.56 FPU/mL，由青島蔚藍(lán)生物集團(tuán)有限公司提供。

1.2 儀器與設(shè)備

1200系列高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent Techno-logies公司；UV-1600型紫外分光光度計(jì)，北京瑞利分析儀器有限公司；P40110.E000型PFI磨漿機(jī)，奧地利PTI有限公司；SU1510型掃描電子顯微鏡，日本日立公司；LS 13320 SGL型激光粒度儀，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司；4000i型恒溫培養(yǎng)震蕩箱，德國(guó)IKA集團(tuán)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 原料化學(xué)組分分析

采用美國(guó)可再生能源實(shí)驗(yàn)室（NREL）的標(biāo)準(zhǔn)NREL/TP-510-42619、NREL/TP-510-42618和NREL/TP-510-42622測(cè)定玉米芯殘?jiān)系闹饕瘜W(xué)組分。利用高效液相色譜檢測(cè)糖類含量。利用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)酸溶木素含量。

1.3.2 PFI打漿預(yù)處理

參照QB/T 1463—2010標(biāo)準(zhǔn)對(duì)玉米芯殘?jiān)M(jìn)行打漿預(yù)處理，打漿濃度為20%，打漿轉(zhuǎn)數(shù)分別為0（空白樣）、5000、10000、15000和20000轉(zhuǎn)。

1.3.3 酶水解

稱取5.0 g絕干質(zhì)量的玉米芯殘?jiān)嫌?00 mL的錐形瓶?jī)?nèi)，加入50 mL HAc-NaAc緩沖液（pH值 4.8）。向瓶?jī)?nèi)加入一定體積的纖維素酶液，纖維素酶的用量為11 FPU/g底物。然后向錐形瓶?jī)?nèi)補(bǔ)加蒸餾水至水解液總體積為100 mL。用保鮮膜封住瓶口，并置于50℃的恒溫培養(yǎng)震蕩箱內(nèi)反應(yīng)，轉(zhuǎn)速180 r/min，水解96 h。在水解過(guò)程中，每隔一定時(shí)間取0.5 mL的水解液于小離心管內(nèi)，并用熱水煮沸5 min使纖維素酶失活。樣品經(jīng)離心后，用0.45 μm孔徑的微孔濾膜過(guò)濾，并采用高效液相色譜儀檢測(cè)水解液中葡萄糖的含量。

1.3.4 玉米芯殘?jiān)孜锾匦苑治?/p>

用激光粒度儀測(cè)定玉米芯殘?jiān)牧椒植?。采取離心法測(cè)定玉米芯殘?jiān)谋Ｋ礫9]。采用直接染料法測(cè)量玉米芯殘?jiān)谋缺砻娣e[10-11]。采用反滴定法測(cè)量玉米芯殘?jiān)谋砻骐姾擅芏萚12]。按照GB/T 3332—1982標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量玉米芯殘?jiān)拇驖{度。采用光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡（SEM）觀察玉米芯殘?jiān)谋砻嫘蚊病?/p>

2 結(jié)果與分析

2.1 PFI打漿預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)孜锾匦缘挠绊?/p>

PFI打漿預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)Ｋ?、打漿度、比表面積、平均粒徑以及表面電荷密度的影響如表1所示。從表1可以看出，玉米芯殘?jiān)谋Ｋ?、打漿度和比表面積均隨著打漿轉(zhuǎn)數(shù)的增加而增大，并且增長(zhǎng)幅度逐漸變小。當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)為10000 轉(zhuǎn)時(shí)，玉米芯殘?jiān)Ｋ?、打漿度以及比表面積較空白樣分別提高了71.8%、191.7%和166.3%；與打漿10000轉(zhuǎn)時(shí)相比，當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)增加至20000轉(zhuǎn)時(shí)，其保水值、比表面積分別提高了11.6%和13.6%，而打漿度僅提高了2.9%。表面電荷密度則隨著打漿轉(zhuǎn)數(shù)的增加而持續(xù)增長(zhǎng)。與空白樣相比，當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)增加到20000 轉(zhuǎn)時(shí)，表面電荷密度提高了99.5%。平均粒徑則隨著打漿轉(zhuǎn)數(shù)的增加而逐漸降低，并且下降幅度逐漸變小。與空白樣相比，當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)增加到10000轉(zhuǎn)時(shí)，平均粒徑下降了25.8%；當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)繼續(xù)由10000轉(zhuǎn)增加到20000轉(zhuǎn)時(shí)，平均粒徑繼續(xù)下降了18.3%。在PFI打漿過(guò)程中，玉米芯殘?jiān)軝C(jī)械剪切作用而發(fā)生斷裂，產(chǎn)生大量細(xì)小碎片，同時(shí)，原料之間的相互擠壓、摩擦等作用使其表面起毛，分絲帚化。這些變化導(dǎo)致玉米芯殘?jiān)锢沓叽鐪p小，比表面積增大，進(jìn)而暴露出更多的游離羥基，促進(jìn)了其吸水潤(rùn)脹，同時(shí)使得纖維的表面電荷密度增大[13]。

采用光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡分析了PFI打漿預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)砻嫘蚊驳挠绊?，結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，空白樣（a1和b1）的表面較為平整，受損情況較弱，輪廓邊界規(guī)整，有明顯顆粒狀外形；而經(jīng)過(guò)PFI打漿后（a2和b2），玉米芯殘?jiān)谋砻孀兊么植?，表面分絲起毛，并產(chǎn)生少量細(xì)小碎片，輪廓邊界變得不規(guī)則，無(wú)明顯顆粒狀外形；當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)達(dá)到20000轉(zhuǎn)時(shí)，玉米芯殘?jiān)╝3和b3）的表面破損情況嚴(yán)重，幾乎完全壓潰變形，并產(chǎn)生了大量的細(xì)小碎片。

2.2 PFI打漿預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)杆獾挠绊?/p>

PFI打漿預(yù)處理對(duì)玉米芯殘?jiān)杆獾挠绊懭鐖D2所示。從圖2可以看出，PFI打漿預(yù)處理可顯著提高玉米芯殘?jiān)拿杆庑?。?dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)為5000轉(zhuǎn)時(shí)，玉米芯殘?jiān)?jīng)酶水解96 h后葡萄糖濃度與轉(zhuǎn)化率分別從空白樣的19.23 g/L和57.9%提高至20.46 g/L和61.5%；而當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)從5000轉(zhuǎn)提高到20000轉(zhuǎn)時(shí)，葡萄糖濃度與轉(zhuǎn)化率則進(jìn)一步提高到23.95 g/L和72.0%。這說(shuō)明當(dāng)打漿程度低時(shí)，玉米芯殘?jiān)艿降臋C(jī)械處理強(qiáng)度不夠，其酶解性提高不明顯；而在較高程度的打漿預(yù)處理后，玉米芯殘?jiān)拿杆庑Ч玫矫黠@的提高，這主要是由于玉米芯殘?jiān)赑FI打漿過(guò)程中受到了切斷與擠壓等作用，產(chǎn)生了大量細(xì)小碎片，增加了其比表面積，促進(jìn)底物吸水潤(rùn)脹，從而提高了酶對(duì)玉米芯殘?jiān)孜锏目杉靶浴?/p>

同時(shí)，從圖2可以看出，PFI打漿預(yù)處理可明顯提高玉米芯殘?jiān)杆獾姆磻?yīng)速率。在酶水解的初始階段，不同打漿轉(zhuǎn)數(shù)的各組原料的酶水解反應(yīng)速率之間有明顯差異，并且在水解時(shí)間為22 h左右，這種差異最為明顯，即空白樣的葡萄糖濃度和葡萄糖轉(zhuǎn)化率分別為13.05 g/L和39.3%，而葡萄糖濃度與轉(zhuǎn)化率在經(jīng)打漿預(yù)處理20000轉(zhuǎn)后分別為19.48 g/L和58.6%。這說(shuō)明PFI打漿預(yù)處理不僅可提高玉米芯殘?jiān)杆獾淖罱K水解得率，同時(shí)，也可加快酶水解反應(yīng)的進(jìn)程。

2.3 玉米芯殘?jiān)杆獾膭?dòng)力學(xué)模型

為深入了解玉米芯殘?jiān)拿杆鈩?dòng)態(tài)過(guò)程及其酶水解機(jī)理，將玉米芯殘?jiān)拿杆馇€進(jìn)行動(dòng)力學(xué)模型分析。為此，采取擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型和擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型來(lái)描述玉米芯殘?jiān)拿杆膺^(guò)程[14]。擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型與擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型方程式分別如式（1）和式（2）所示。

ln（ce-ct）=lnce-k1t（1）

tct=1k2c2e+tce（2）

式中，ce，水解平衡時(shí)水解液中葡萄糖的濃度，g/L；ct，任意時(shí)刻水解液中葡萄糖的濃度，g/L；t，水解時(shí)間，min；k1，擬一級(jí)水解反應(yīng)速率常數(shù)，min-1；k2，擬二級(jí)水解反應(yīng)速率常數(shù)，L/（g·min）。

擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型和擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型的擬合參數(shù)如表2所示。由表2可知，各組打漿轉(zhuǎn)數(shù)下，擬一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型對(duì)玉米芯殘?jiān)杆馇€的擬合效果較差，其相關(guān)系數(shù)R2為0.9443～0.9762之間；而擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型對(duì)玉米芯殘?jiān)杆馇€的擬合效果很好，其相關(guān)系數(shù)R2均在0.9900以上。這說(shuō)明玉米芯殘?jiān)拿杆鈩?dòng)力學(xué)過(guò)程符合擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型，即玉米芯殘?jiān)拿杆夥磻?yīng)屬于存在飽和位點(diǎn)的多級(jí)反應(yīng)。

2.4 玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦詫?duì)酶水解效率的影響

為定量研究玉米芯殘?jiān)母黜?xiàng)底物特性對(duì)其酶水解效率的影響，需將酶水解效率進(jìn)行量化表征。選用擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型中的速率常數(shù)k2表示玉米芯殘?jiān)拿杆庑剩磌2越大，則說(shuō)明玉米芯殘?jiān)杆獾姆磻?yīng)進(jìn)程越快，酶水解效率越高。首先，考察反應(yīng)速率常數(shù)k2分別與不同底物特性之間的線性關(guān)系，結(jié)果如圖3所示。

由圖3可知，反應(yīng)速率常數(shù)k2與保水值、打漿度、比表面積以及表面電荷密度均呈正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明通過(guò)增加保水值、打漿度、比表面積或表面電荷密度，均可提高玉米芯殘?jiān)拿杆夥磻?yīng)速率。而且，由圖3可見，反應(yīng)速率常數(shù)k2與保水值、打漿度以

及比表面積的相關(guān)系數(shù)R2均在0.9400以上，可初步說(shuō)明這3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)玉米芯殘?jiān)拿杆夥磻?yīng)速率的影響較大，而表面電荷密度對(duì)其影響相對(duì)較弱；反應(yīng)速率常數(shù)k2與平均粒徑呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明粒徑的減小對(duì)于提高酶水解反應(yīng)速率是有利的。因此，可初步判定反應(yīng)速率常數(shù)k2與玉米芯殘?jiān)母黜?xiàng)底物特性均有一定的線性關(guān)系，這說(shuō)明各項(xiàng)底物特性對(duì)反應(yīng)速率常數(shù)k2均有一定的影響作用。為定量地分析這種影響作用的強(qiáng)弱，采用主成分分析法和多元線性回歸分析法[15]建立反應(yīng)速率常數(shù)k2與各項(xiàng)底物特性之間的多元線性回歸模型，通過(guò)各系數(shù)的絕對(duì)值定量地描述其對(duì)反應(yīng)速率常數(shù)k2的影響。首先，對(duì)玉米芯殘?jiān)母黜?xiàng)底物特性進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，消除不同量綱對(duì)結(jié)果的影響，然后再進(jìn)行主成分分析，主成分分析的結(jié)果如表3和表4所示。

由表3可知，第一個(gè)特征根較大，為4.810，而第二個(gè)特征根下降較快，本應(yīng)提取一個(gè)主成分。但考慮到主成分?jǐn)?shù)的減少將降低回歸模型的顯著性，因此，提取2個(gè)主成分更為恰當(dāng)。由表3可知，當(dāng)提取2個(gè)主成分時(shí)，可以解釋98.701%的總體方差，信息損失量不到1.3%。

表4中為各變量在2個(gè)主成分上的系數(shù)，根據(jù)表4

由表5可知，回歸模型的F值為1012.456，大于F0.01（2， 2）。因此，可認(rèn)為在顯著性水平為0.01的情況下，Y對(duì)X1和X2的線性關(guān)系顯著，模型可通過(guò)顯著性檢驗(yàn)。將式（3）和式（4）帶入式（5）中，即可得到關(guān)于Y與x1～x5之間的多元線性回歸模型，如式（6）所示：

Y=0.247x1+0.247x2-0.212x3+0.180x4+0.132x5+5.751×10-16（6）

多元線性回歸模型中，各自變量的系數(shù)反映出其對(duì)因變量的影響強(qiáng)弱，即系數(shù)的絕對(duì)值越大，則說(shuō)明其對(duì)因變量的影響作用越強(qiáng)，反之則越小。因此，由模型可知，x1和x2的系數(shù)絕對(duì)值最大，說(shuō)明保水值和打漿度對(duì)反應(yīng)速率常數(shù)k2的影響作用最大；x3和x4的系數(shù)絕對(duì)值相對(duì)較小，表明平均粒徑和比表面積對(duì)反應(yīng)速率常數(shù)k2的影響作用次之；x5的系數(shù)絕對(duì)值最小，說(shuō)明表面電荷密度對(duì)反應(yīng)速率常數(shù)k2的影響作用最弱。事實(shí)上，保水值和打漿度反映了纖維原料的吸水性和濾水性；而平均粒徑和比表面積則反映了纖維原料的物理尺寸。有研究表明，纖維原料的吸水性和濾水性的提高或物理尺寸的減小，均有利于提高纖維原料的酶水解效率[16-17]，這與本研究的結(jié)論相一致。而由多元線性回歸模型的結(jié)果可知，玉米芯殘?jiān)奈院蜑V水性能對(duì)其酶水解速率的影響程度要強(qiáng)于物理尺寸。

3 結(jié) 論

本研究采用PFI打漿處理玉米芯殘?jiān)芯苛似鋵?duì)玉米芯殘?jiān)孜锾匦约捌涿杆庑实挠绊憽?/p>

3.1 PFI打漿預(yù)處理可明顯改變玉米芯殘?jiān)牡孜锾匦?。隨著打漿轉(zhuǎn)數(shù)的增加，玉米芯殘?jiān)谋缺砻娣e、保水值、打漿度和表面電荷密度均隨之增大，平均粒徑則隨之減??；同時(shí)，玉米芯殘?jiān)砻娴钠茡p情況逐漸加劇，產(chǎn)生更多的細(xì)小碎片。

3.2 PFI打漿預(yù)處理可顯著提高玉米芯殘?jiān)拿杆庑省ｋS著打漿轉(zhuǎn)數(shù)的提高，玉米芯殘?jiān)拿杆庑手饾u提高；當(dāng)打漿轉(zhuǎn)數(shù)增加到20000轉(zhuǎn)時(shí)，玉米芯殘?jiān)杆鈺r(shí)的葡萄糖濃度與葡萄糖轉(zhuǎn)化率分別達(dá)到23.94 g/L和72.0%。

3.3 玉米芯殘?jiān)拿杆鈩?dòng)力學(xué)符合擬二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型，說(shuō)明酶水解反應(yīng)屬于存在飽和位點(diǎn)的多級(jí)反應(yīng)。

3.4 多元線性回歸模型的結(jié)果表明，玉米芯殘?jiān)母黜?xiàng)底物特性對(duì)酶水解效率的影響由強(qiáng)到弱依次為：保水值、打漿度、平均粒徑、比表面積和表面電荷密度。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Gowdhaman D， Ponnusami V. Production and optimization of xylooligosaccharides from corncob by Bacillus aerophilus KGJ2 xylanase and its antioxidant potential[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2015， 79（2）： 595.

[2] Chang S Y， Guo Y L， Wu B， et al. Extracellular expression of alkali tolerant xylanase from Bacillus subtilis Lucky9 in E. coli and application for xylooligosaccharides production from agro-industrial waste[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2017， 96： 249.

[3] Bai Z， Gao Z， Sun J， et al. D-Lactic acid production by Sporolactobacillus inulinus YBS1-5 with simultaneous utilization of cottonseed meal and corncob residue[J]. Bioresource Technology， 2016， 207： 346.

[4] Liu K， Lin X H， Yue J， et al. High concentration ethanol production from corncob residues by fed-batch strategy[J]. Bioresource Technology， 2010， 101（13）： 4952.

[5] Tang Y， Zhao D Q， Cristhian C， et al. Simultaneous saccharification and cofermentation of lignocellulosic residues from commercial furfural production and corn kernels using different nutrient media[J]. Biotechnology for Biofuels， 2011， 4（1）： 1.

[6] Lou H M， Yuan L， Qiu X Q， et al. Enhancing enzymatic hydrolysis of xylan by adding sodium lignosulfonate and long-chain fatty alcohols[J]. Bioresource Technology， 2016， 200： 48.

[7] Ouyang J， Li Z J， Li X， et al. Enhanced enzymatic conversion and glucose production via two-step enzymatic hydrolysis of corncob residue from xylo-oligosaccharides producers waste[J]. Bioresources， 2009， 4（4）： 1586.

[8] Xing Y， Bu L， Zheng T， et al. Enhancement of high-solids enzymatic hydrolysis of corncob residues by bisulfite pretreatment for biorefinery[J]. Bioresource Technology， 2016， 221： 461.

[9] Chen Y M， Wan J Q， Zhang X L， et al. Effect of beating on recycled properties of unbleached eucalyptus cellulose fiber[J]. Carbohydrate Polymers， 2012， 87（1）： 730.

[10] Liu W， Wang B， Hou Q X， et al. Effects of fibrillation on the wood fibers enzymatic hydrolysis enhanced by mechanical refining[J]. Bioresource Technology， 2016， 206： 99.

[11] Tang A M，Chen G，F(xiàn)an P M，et al. Application of direct dyes in papermaking technology-to determine the surface area of wood fiber by dye adsorption[J].Dye Technology，2000，37（6）：24.

唐愛民， 陳 崗， 范佩明， 等. 直接染料在造紙中的應(yīng)用—染料吸附法測(cè)定紙漿纖維的表面積[J]. 染料工藝， 2000， 37（6）： 24.

[12] Sun B， Zhang M， Hou Q X， et al. Further characterization of cellulose nanocrystal（CNC） preparation from sulfuric acid hydrolysis of cotton fibers[J]. Cellulose， 2016， 23（1）： 439.

[13] Yu H L. The Study of Green Liquor Pretreatment to Improve the Enzymatic Hydrolysis of Industrial Fiber Residues[D]. Beijing： Beijing Forestry University， 2015.

于海龍. 綠液預(yù)處理工業(yè)纖維渣酶水解過(guò)程及其機(jī)理研究[D]. 北京： 北京林業(yè)大學(xué)， 2015.

[14] Pan A D， Zeng H Y， Foua G B， et al. Enzymolysis of chitosan by papain and its kinetics[J]. Carbohydrate Polymers， 2016， 135： 199.

[15] Li H S， Deng X D. Statistical Data Analysis Method and Technology[M]. Beijing： Economic Management Publishing， 2014：162.

李紅松， 鄧旭東. 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析方法與技術(shù)[M]. 北京： 經(jīng)濟(jì)管理出版社， 2014∶162.

[16] Gao W H， Xiang Z Y， Chen K F， et al. Effect of depth beating on the fiber properties and enzymatic saccharification efficiency of softwood kraft pulp[J]. Carbohydrate Polymers， 2015， 127： 400.

[17] Alvira P， Tomás-Pejó E， Ballesteros M， et al. Pretreatment technologies for an efficient bioethanol production process based on enzymatic hydrolysis： A review[J]. Bioresource Technology， 2010， 101（13）： 4851.