阿薩伊對虛熱證大鼠神經(jīng)遞質(zhì)、三長軸激素及環(huán)核苷酸的影響

王子晨 王林元 朱映黎 瞿研 王佳 費文婷 張建軍 熊平

摘要 目的：研究阿薩伊對虛熱證大鼠神經(jīng)遞質(zhì)、三長軸激素及環(huán)核苷酸水平的變化探討阿薩伊的寒熱藥性。方法：SD大鼠分為空白組；虛熱模型組，虛熱模型加黃柏組、加阿薩伊高、低劑量組；采用每日肌肉注射地塞米松磷酸鈉1次、連續(xù)21 d的方法制備大鼠虛熱模型；通過酶免法與放免法檢測神經(jīng)遞質(zhì)（NE、DA、5-HT）、激素（T4、T3、CORT、E2、T）及環(huán)核苷酸（cAMP、cGMP）指標(biāo)變化。結(jié)果：阿薩伊高劑量組能顯著降低血清中NE、DA、T4、T3、E2、cAMP、cGMP值（P<0.05，P<0.001，P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001，P<0.001）；阿薩伊高劑量組能顯著升高血清中5-HT、CORT、T（P<0.001，P<0.05，P<0.05）；阿薩伊組的作用趨勢與黃柏、葛根芩連湯一致，表現(xiàn)出對虛熱模型大鼠的調(diào)整作用。結(jié)論：本實驗以同類比較藥理學(xué)方法驗證了理論推導(dǎo)的阿薩伊中藥寒涼藥性。

關(guān)鍵詞 阿薩伊；虛熱證；虛寒證；神經(jīng)遞質(zhì)；激素；環(huán)核苷酸；中藥藥性

Abstract To study the effects of Acaí on neurotransmitter，triaxial hormone and cyclic nucleotide in rats with deficiency heat syndrome and to discuss the drug property of cold and heat.All the SD rats were divided into blank group，deficiency-heat model group，deficiency-heat + Cortex Phellodendri group，deficiency-heat + Acaí high dose and low dose groups.The model rats were prepared by using daily intramuscular injection of dexamethasone sodium phosphate with continuous injection for 21 days.The changes of neurotransmitter （NE，DA，5-ht），hormones （T4，T3，CORT，E2，T） and cyclic nucleotide （cAMP and cGMP） were detected by enzyme-free method and free-release method.The level of NE，DA，T4，T3，E2，cAMP and cGMP in serum were significantly decreased in the Acaí high dose group （P<0.05，P<0.001，P<0.001，P<0.01，P<0.001，P<0.001，P<0.001）.The levels of 5-HT，CORT and T in serum were significantly increased in the Acaí high dose group （P<0.001，P<0.05，P<0.05）.The Acaí showed the same effect with Cortex Phellodendri and Gegen Qinlian Decoction in adjusting the levels of deficiency-heat rats.This experiment verified a comparative pharmacological method to derive the drug property of cold and heat of Asai.

Key Words Acaí； Deficiency-heat syndrome； Neurotransmitter； hormone； Cyclic nucleotide； Chinese herbal properties

中圖分類號：R285.5文獻標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.045

阿薩伊（英文名：Aaí）又名巴西莓，一種產(chǎn)自南美的棕櫚樹Euterpe Oleraceae Mart.的新鮮果實[1]，有”紫色黃金”美譽的阿薩伊在巴西、秘魯、哥倫比亞、蘇里南等地受到人們的廣泛使用[2]，2013年由衛(wèi)生部引入我國[3]。中國歷代本草中，都記述了較多的世界各民族、各宗教使用的有特點的有效藥物。如《本草綱目》收錄外來藥物96種[4]，《經(jīng)史證類備急本草》收載的外來藥物達(dá)200多種[5]，豐富了本草學(xué)品種。直到今日，我國仍需進口的外來藥材，還有40余味，如丁香、大腹皮、馬錢子、兒茶等。中藥天然冰片（右旋龍腦）是南洋印度尼西亞波羅州的香料，但古代醫(yī)家通過的長期醫(yī)療實踐，最終將其作為正式藥物收錄在《新修本草》（659）中[6]，然而來自南美洲藥食同源的阿薩伊能否引入中藥與我國現(xiàn)有中藥進行配伍使用發(fā)揮醫(yī)療保健作用，尚需要進行理論及實驗多方面的科學(xué)研究。

萬物以陰陽為綱，藥物以寒熱分之。寒熱藥性作為中藥性能是中藥四氣、五味、歸經(jīng)研究的核心和主體內(nèi)容，它已成為當(dāng)前藥性研究的主要著眼點和切入點?！端貑枴吩疲骸爸?jǐn)察陰陽所在而調(diào)之，以平為期”?！八^寒熱溫涼，反從其病也”。醫(yī)家看病應(yīng)重陰陽，補偏救弊，遂遣陰、陽藥而施之，調(diào)和陰陽，以至陰平陽秘，精神乃至。根據(jù)巴西、秘魯?shù)饶厦赖貐^(qū)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用藥記載，阿薩伊一般用于治療潰瘍、發(fā)燒、糖尿病、脫發(fā)、出血、肝炎、黃疸等熱性疾病。而現(xiàn)代藥理、臨床研究表明阿薩伊具有抗氧化、抗癌、抗炎、降脂、降糖、保肝等多方面的作用。在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，依據(jù)文獻研究分析及臨床報道，我們提出了阿薩伊性涼的科學(xué)假說[7]。而本實驗以同類比較法通過考察阿薩伊對虛熱大鼠神經(jīng)遞質(zhì)、三長軸激素及環(huán)核苷酸的影響，對阿薩伊的寒涼藥性進行藥理學(xué)實驗驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量（240 g±10） g。由斯貝福動物實驗中心提供。動物飼養(yǎng)條件：溫度25 ℃，日溫差≤3 ℃，相對濕度達(dá)65%，新鮮空氣換氣次數(shù)l0次/h，氣流速度≤0.18 m/s，壓差25 Pa，噪聲≤60 dB。合格證編號：SCXK（京）2014-0006。

1.1.2 藥物 阿薩伊凍干粉由蒙維（上海）貿(mào)易有限公司提供；地塞米松磷酸鈉（天津金耀集團湖北天藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號H42020020）；黃柏配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號15015431）；葛根芩連湯：葛根配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號15015184）；黃芩配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號15014681）；黃連配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號15015481）；炙甘草配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號15018081），配方比例為24∶9∶9∶6。

1.1.3 試劑與儀器 去甲腎上腺素（NE）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司提供，批號20160306）；多巴胺（DA）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司提供，批號20160301）；5-羥色胺（5-HT）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司提供，批號20160305）；四碘甲狀腺原氨酸（T4）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司提供，批號20160130）；三碘甲狀腺原氨酸（T3）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司提供，批號20160123）；皮質(zhì)酮（CORT）試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20160306）；雌二醇（E2）試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20160228）；睪酮（T）試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20160228）；環(huán)磷酸腺苷（cAMP）試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20160115）；環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所提供，批號20160115）。XH-6020全自動放免計數(shù)儀（西安核儀器廠生產(chǎn)）；STAT FAX 2100全自動酶標(biāo)儀（Awareness Technology Inc.USA）；TGL-16A臺式高速冷凍離心機；JY203電子天平。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分成6組，每組10只，即空白組、虛熱模型組、虛熱模型加黃柏配方顆粒組（5 g/kg相當(dāng)于60 kg/d生藥量37.5 g）、虛熱模型加葛根芩連湯配方顆粒組（9.6 g/kg相當(dāng)于60 kg/d生藥量72 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉高劑量組（3.2 g/kg相當(dāng)于60 kg/d生藥量24 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉低劑量組（1.6 g/kg相當(dāng)于60 kg/d生藥量12 g）。動物適應(yīng)數(shù)天后，肌肉注射地塞米松磷酸鈉（0.35 mg/kg）造成虛熱證模型，空白組注射生理鹽水，每天上午造模，持續(xù)21 d。

1.2.2 給藥方法

除空白組、模型組每天灌胃去離子水外，其余各組灌胃相應(yīng)藥物。造模7 d后，按大鼠每100 g體質(zhì)量灌胃1 mL給藥，每天下午1次，給藥14 d，根據(jù)體質(zhì)量適當(dāng)調(diào)整灌胃量[8-9]。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法 從造模第8天下午開始給藥，第22天腹主動脈取血，分離血清，采用酶免法法檢測各組大鼠血清中去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）；采用放免法檢測血清中四碘甲狀腺原氨酸（T4）、三碘甲狀腺原氨酸（T3）、皮質(zhì)酮（CORT）、雌二醇（E2）、睪酮（T）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）等指標(biāo)的變化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS Statistics 20.0的one-way ANOVA過程（兩兩比較采用SNK）進行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)用（±s）表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 阿薩伊凍干粉對虛熱證大鼠神經(jīng)遞質(zhì)指標(biāo)的影響 與空白組比較，虛熱模型組NE、DA明顯升高（P<0.01，P<0.001），5-HT明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，黃柏組NE、DA明顯降低（P<0.05，P<0.001），5-HT明顯升高（P<0.05）；葛根芩連湯組NE、DA明顯降低（P<0.05，P<0.001），5-HT明顯升高（P<0.01）；阿薩伊高劑量組NE、DA明顯降低（P<0.05，P<0.001），5-HT明顯升高（P<0.001）；阿薩伊低劑量組DA明顯降低（P<0.001），5-HT明顯身高（P<0.001）。見表1。

2.2 阿薩伊凍干粉對虛熱證大鼠激素指標(biāo)的影響 與空白組比較，虛熱模型組T4、T3、E2明顯升高（P<0.001），CORT、T明顯降低（P<0.001，P<0.01）；與模型組比較，黃柏組T4、T3、E2明顯降低（P<0.001，P<0.05，P<0.001），CORT、T明顯升高（P<0.01）；葛根芩連湯組T4、T3、E2明顯降低（P<0.001），CORT、T明顯升高（P<0.01，P<0.05）；阿薩伊高劑量組T4、T3、E2明顯降低（P<0.001，P<0.01，P<0.001），CORT、T明顯升高（P<0.05）；阿薩伊低劑量組T4、T3、E2明顯降低（P<0.001，P<0.01，P<0.05），CORT明顯升高（P<0.05）。見表2。與空白組比較，虛熱模型組T4/T3差異無統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組比較，黃柏組、葛根芩連湯組、阿薩伊高劑量組、阿薩伊低劑量組T4/T3差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與空白組比較，虛熱模型組E2/T明顯升高（P<0.001）；與模型組比較，黃柏組、葛根芩連湯組、阿薩伊高劑量組、阿薩伊低劑量組E2/T明顯降低（P<0.001）。見表3。

2.3 阿薩伊凍干粉對虛熱證大鼠環(huán)核苷酸指標(biāo)的影響 與空白組比較，虛熱模型組cAMP、cGMP明顯升高（P<0.001，P<0.01）；cAMP/cGMP明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，黃柏組cAMP、cGMP明顯降低（P<0.001），cAMP/cGMP明顯降低（P<0.05）；葛根芩連湯組cAMP、cGMP明顯降低（P<0.001），cAMP/cGMP明顯降低（P<0.05）；阿薩伊高劑量組cAMP、cGMP值均明顯降低（P<0.001），cAMP/cGMP值均明顯降低（P<0.05）；阿薩伊低劑量組cAMP、cGMP明顯降低（P<0.001，P<0.01）。見表4。

3 討論

“藥有寒熱溫涼四氣”，辨其寒熱，需臨證而嘗之，“取其偏長為本”。以寒者施之以熱，熱者施之以寒為法，觀其寒熱陰陽之變，析本草寒熱之所屬[10-11]。在中醫(yī)理論體系中，陰虛者（虛熱）陽氣為常，陰氣虧耗，無以制陽，以至滋潤、寧靜制約陽熱之功失常，素體雖煩躁不安以動見之，而又常疲乏不堪，盜汗遺精以靜見之[12-13]。我們根據(jù)張冰等文獻的方法[8]，采用地塞米松磷酸鈉誘誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生類似中醫(yī)陰虛（虛熱）的證候。

當(dāng)機體處于虛熱狀態(tài)時，細(xì)胞外能夠調(diào)節(jié)機體功能的一大類被稱為“第一信使”的生物活性物質(zhì)則會出現(xiàn)失常的狀況，如神經(jīng)遞質(zhì)、激素等，同時作為細(xì)胞內(nèi)信號的“第二信使”也會出現(xiàn)異常改變。故本實驗選取了生物原胺類神經(jīng)遞質(zhì)：去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT），選取了代謝軸（H-P-T）、應(yīng)激軸（H-P-A）、生殖軸（H-P-G）三長軸上作為“第一信使”的含氮類激素：四碘甲狀腺原氨酸（T4）、三碘甲狀腺原氨酸（T3）、皮質(zhì)酮（CORT）、雌二醇（E2）、睪酮（T），以及作為“第二信使”的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）作為觀察指標(biāo)[14-15]。從指標(biāo)變化上分析，在神經(jīng)遞質(zhì)方面，當(dāng)處于虛熱狀態(tài)時，交感神經(jīng)處于興奮狀態(tài)，酪氨酸羥化酶被激活，DA合成增加，進一步導(dǎo)致NE合成增多，與此同時色氨酸羥化酶受到了抑制，導(dǎo)致5-HT合成減少。在生物效應(yīng)上，DA、NE是與5-HT作用效應(yīng)相反的神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)DA與NE增加時，機體狀態(tài)以亢奮為主要表現(xiàn)，而當(dāng)5-HT增加時機體狀態(tài)以鎮(zhèn)靜、低迷為主要表現(xiàn)[16-17]。在三長軸激素方面，當(dāng)處于虛熱狀態(tài)時，機體產(chǎn)熱消耗增加，代謝軸較為活躍，作為甲狀腺激素的代表物質(zhì)T4、T3則會分泌增加，但二者相對含量T4/T3仍處于平衡狀態(tài)[8]。性腺軸是調(diào)控人體生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能維持的主要代謝軸，中醫(yī)講，“陰虛則相火旺動”，其內(nèi)在原理主要是性腺軸活躍，E2含量增加，T含量成反饋性抑制減少，激素含量比E2/T升高[18]。CORT作為應(yīng)激軸的有關(guān)指標(biāo)，由于長期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素，通過負(fù)反饋抑制應(yīng)激軸，導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)萎縮和功能不全，進一步導(dǎo)致CORT產(chǎn)生減少。而CORT為應(yīng)激反應(yīng)時產(chǎn)生的類激素，當(dāng)其含量降低，處于“虛性”證候時，機體對不利環(huán)境的應(yīng)對能力則會相對減弱[19-20]。

作為“第二信使”的cAMP與cGMP不僅是虛熱證候的客觀指標(biāo)，也是激素、神經(jīng)遞質(zhì)與藥物效應(yīng)的中間環(huán)節(jié)，通過二者以發(fā)揮生理作用實現(xiàn)代謝調(diào)節(jié)。當(dāng)處于虛熱狀態(tài)時cAMP與cGMP升高，比值異常升高，機體功能則會出現(xiàn)相應(yīng)失調(diào)[21-22]。實驗結(jié)果顯示，當(dāng)給予寒涼藥黃柏、寒涼方葛根芩連湯干預(yù)虛熱動物模型時，大鼠的神經(jīng)遞質(zhì)、激素以及環(huán)核苷酸水平均趨于正常。在前期經(jīng)過大量文獻的收集與探討后，我們得出阿薩伊藥性寒涼的假說[7]。為通過藥理學(xué)實驗的方法驗證假說，我們用阿薩伊干預(yù)虛熱證大鼠，以同類比較的方法驗證阿薩伊的寒涼藥性。實驗結(jié)果表明，阿薩伊對于大鼠的神經(jīng)遞質(zhì)、激素以及環(huán)核苷酸指標(biāo)的變化與涼性單味藥黃柏、涼性復(fù)方葛根芩連湯的作用趨勢相似。綜上所述，阿薩伊的藥性為寒涼。

本研究以同類比較的藥理實驗研究方法，通過考察寒涼藥黃柏、寒涼方葛根芩連湯以及阿薩伊對虛熱證大鼠神經(jīng)遞質(zhì)、激素以及環(huán)核苷酸等相關(guān)指標(biāo)變化，驗證了阿薩伊的中藥寒涼藥性。近幾年，隨著中醫(yī)藥“一帶一路”政策的實施，中醫(yī)藥與世界的聯(lián)系更加緊密，大量的外來植物藥進入我國市場，為將這些外來植物藥更加合理的使用，我們則需要不斷地通過更為科學(xué)的方式研究其中藥藥性，最終以一種復(fù)方配伍的形式應(yīng)用于臨床，解除人類之疾苦，提高人們的生命質(zhì)量。同時本文也為阿薩伊在中藥藥性指導(dǎo)下進一步的中醫(yī)功效、各化學(xué)成分及有效成分部位研究奠定了實驗基礎(chǔ)。

致謝：感謝基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院科研實驗中心李偉老師在藥物制備及實驗操作中的大力幫助。

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