貴州五種野山茶種子氨基酸及脂肪酸成分含量的研究

劉海燕 汪建文 洪江 范志偉 湯升虎 鄒天才

摘 要： 采用高效液相色譜（HPLC）和氨基酸比值系數(shù)法，對貴州五種野山茶種子氨基酸和主要脂肪酸成分含量進行了研究。結(jié)果表明：（1）五種野山茶種子中均含有13種氨基酸，不同種類的氨基酸總量差異極顯著，必需氨基酸和非必需氨基酸含量的差異顯著（P<0.01，P<0.05），且第一限制性氨基酸含量不同；長柱紅山茶（Camellia longistyla）和貴州紅山茶（C. kweichouensis）的氨基酸總量及人體必需氨基酸含量分別為33.01、13.29和26.33、10.38 mg·g-1。（2）不同種類種子的千粒重、含油率、含水率皆呈顯著差異（P<0.01，P<0.05），種子含油率與不飽和脂肪酸含量顯著正相關(guān)（R=0.556、P<0.05），種子不飽和脂肪酸含量與棕櫚酸、飽和脂肪酸含量極顯著負相關(guān)（R=-0.791，P<0.01；R=-0.776，P<0.01），其中長柱紅山茶和貴州紅山茶種子的含油率和不飽和脂肪酸含量分別為43.93%、71.89%和43.91%、71.85%。（3）小黃花茶（C. luteoflora）、皺葉瘤果茶（C. rhytidophylla）、貴州紅山茶、長柱紅山茶、美麗紅山茶（C. delicata）所含必需氨基酸與總氨基酸比值分別為44.9、43.3、39.0、40.9、33.8，必需氨基酸與非必需氨基酸比值分別為81.6、76.4、64.0、67.4、51.0，除了美麗紅山茶的比值系數(shù)偏低外，其余4種均達到了WHO/FAO的理想蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，種子蛋白質(zhì)均具有較高的營養(yǎng)價值，其中長柱紅山茶和貴州紅山茶的種子含油脂質(zhì)量等級指標(biāo)接近我國現(xiàn)行茶油標(biāo)準(zhǔn)（GB11765—2003），可以作為重要的優(yōu)質(zhì)油茶種質(zhì)資源加以開發(fā)利用。

關(guān)鍵詞： 野山茶種子， 氨基酸， 脂肪酸， 成分含量， 營養(yǎng)評價， 貴州高原

中圖分類號： Q945.6

文獻標(biāo)識碼： A

文章編號： 1000-3142（2018）02-0169-11

Contents of amino acids and fatty acids in seeds of five wild Camellia species in Guizhou plateau （ⅢD 10 d）

LIU Haiyan1， WANG Jianwen2， HONG Jiang2， FAN Zhiwei1， TANG Shenghu1， ZOU Tiancai2*

（ 1. Guizhou Botanical Garden， Guiyang 550004， China； 2. Guizhou Academy of Sciences， Guiyang 550001， China ）

Abstract： The contents of amino acids and major fatty acids in the seeds of five wild Camellia species in Guizhou plateau （ⅢD 10 d） were analyzed by high performance liquid chromatography （HPLC） and amino acid ratio coefficient method. The results were as follows： （1） Thirteen kinds of amino acids were checked out in seeds of five wild Camellia species. The total amounts of amino acids were extremely different， and the contents of essential amino acids and non essential amino acids were significantly different （P<0.01，P<0.05）， and the first restriction amino acid content was different. The total amino acid and essential amino acid contents of C. longistyla and C. kweichouensis were respectively 33.01， 26.33， and 13.29，10.38 mg·g-1. （2） The grain weight， oil content， water content of different seeds showed significant differences. The seed oil content was significantly positively correlated with unsaturated fatty acid content （R=0.524， P<0.05）. The content of unsaturated fatty acids in seeds was significantly negatively correlated with the content of palmitic acid and oleic acid （R=-0.791， P<0.01； R=-0.776， P<0.01）. The seed oil rate and the unsaturated fatty acid content of C. longistyla and C. kweichouensis reached 43.93%， 71.89% and 43.91%， 71.85% respectively. （3） The ratio of essential amino acids to total amino acids of C. luteoflora， C. rhytidophylla， C. kweichouensis， C. longistyla and C. delicata was 44.9， 43.3， 39.0， 40.9， 33.8， and the ratio of essential amino acids to nonessential amino acids was 81.6， 76.4， 64.0， 67.4， 51.0 respectively. Except for the low ratio of C. delicata， the other four species reached the ideal protein standard of WHO/FAO， the nutritional value of seed was high. And the seed oil quality of C. longistyla and C. kweichouensis was close to the current oil standard of China （GB11765-2003）， therefore， the two species can be utilized as important tea oil Camellia species germplasm resources.

Key words： wild Camellia seeds， amino acids， fatty acid， component contents， nutritional evaluation， Guizhou plateau （ⅢD 10 d）

山茶屬植物屬于熱帶亞洲分布類型（吳征鎰，1991），主產(chǎn)我國長江流域以南地區(qū)，蒴果、苞背開裂，種子圓球形或半球形，種皮角質(zhì)，胚乳豐富，大部分種類的種子含油量較高，可供食用及工業(yè)用，少數(shù)種類可入藥用，頗具植物資源的優(yōu)勢特色和經(jīng)濟價值（張宏達，1998；閔天祿，2000）。貴州自中生代三疊紀結(jié)束海浸后就成為穩(wěn)定大陸，為起源古老的陸生高等植物的繁衍和生長發(fā)育提供了極為有利的條件，并促使其進一步演變成復(fù)雜的地理成分，熱帶亞熱帶植物區(qū)系成分占有明顯優(yōu)勢，氣候溫和濕潤，適宜山茶屬植物的生長發(fā)育。貴州有山茶屬植物13組49種4變種，組和種分布比例分別達到65.00%和18.92%，特有種比例占37.74%（Liu et al， 2016a），而且蘊藏著優(yōu)良的油料植物種質(zhì)資源。目前，相關(guān)文獻已報道了貴州山茶屬植物資源調(diào)查、引種栽培、種群生態(tài)等方面的研究進展 （張華海和班平原， 2007；劉海燕等， 2010， 2016b），而對其種子資源特性、氨基酸與脂肪酸成分含量及其營養(yǎng)價值方面的研究較少。

氨基酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動息息相關(guān)的基本物質(zhì)，是生物體內(nèi)不可或缺的營養(yǎng)成分，一般占植物干重的10%～30%（Owen & Jones， 2001）。植物中的氨基酸以游離態(tài)、多肽和蛋白質(zhì)形式存在，對植物生長具有重要作用。前人對植物中游離氨基酸的研究主要集中在藥用和營養(yǎng)價值方面，研究發(fā)現(xiàn)，氨基酸代謝與植物對營養(yǎng)不良、病蟲害、重金屬、高溫、冷害和鹽堿脅迫等逆境的響應(yīng)密切相關(guān)，因此植物中游離氨基酸的提取與測定具有重要意義（高肖飛等，2016）。目前山茶屬氨基酸的研究主要在含量測定及營養(yǎng)評價（張新昌等，2013；劉美等，2016）、組成成分分析和營養(yǎng)評價（王芳等，2015）。近年來，高效液相色譜法（HPLC）已廣泛用于氨基酸的測定，并已趨向成熟。因此，本文開展了貴州高原亞地區(qū)（ⅢD 10 d）特有分布的五種野山茶種子氨基酸及脂肪酸成分含量方面的研究，對其種子油脂質(zhì)量及資源利用價值做出評價，以為進一步發(fā)掘和開發(fā)利用油用山茶植物資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采集貴州特有分布的五種野生山茶和油茶農(nóng)家栽培品種的種子，每種設(shè)3個重復(fù)，采集1 500 g，種子采回在室內(nèi)通風(fēng)干燥處自然晾干，備用。其中，長柱紅山茶（Camellia longistyla）采自赤水市丙安鄉(xiāng)瓦店村樂溪口常綠闊葉林區(qū)，美麗紅山茶（C. delicata）和小黃花茶（C. luteoflora）采自赤水市金沙溝桫欏自然保護區(qū)楠竹林場，貴州紅山茶（C. kweichouensis ）采自清鎮(zhèn)市九龍山常綠落葉闊葉混交林區(qū)，皺葉瘤果茶（C. rhytidophylla）采自開陽縣花梨鄉(xiāng)樂旺河上游流域常綠落葉闊葉混交林區(qū)。對照材料油茶農(nóng)家品種（Camellia oleifera cv.），采自玉屏縣田坪鎮(zhèn)慶寨村的油茶種植場。

1.2 儀器與藥品

儀器：島津高效液相色譜儀（LC-20AT），20 μL進樣閥，二級陣列管檢測器（PDA-20AT），島津色譜工作站（LCsolution），迪馬C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；藥材粉碎機；美國ELMA T660/H超聲波清洗器（功率360 W，頻率35 kHz）；超純水器（美國Milli2pore公司）；GC-2014氣相色譜分析儀；UV-3310分光光度計（ 日本日立公司）。

藥品：組氨酸（His）、天冬氨酸（Asp）、胱氨酸（Cys）、絲氨酸（Ser）、精氨酸（Arg）、甘氨酸（Gly）、蘇氨酸（Thr）、賴氨酸（Lys）、脯氨酸（Pro）、丙氨酸（Ala）、酪氨酸（Tyr）、纈氨酸（Val）、甲硫氨酸（Met）、谷氨酸（Glu）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）和色氨酸（Trp）共18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈（色譜純）；N，N-二甲基甲酞胺（色譜純）；2，4-二硝基氟苯（DNBF）（色譜純）；超純水。實驗所用其它試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 種子千粒重及含水率檢測 種子千粒重和含水率檢測參照GB2772-1999《林木種子檢驗規(guī)程》（國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，2002），從測定樣品中隨機數(shù)取3個重復(fù)，每個重復(fù)250粒，各重復(fù)分別稱重（g），計算其平均值。種子含水率計算參照《種子學(xué)實驗指南》（劉子凡，2010），含水率（%）=S1+S2-（S1×S2）/100，式中S1、S2分別為第1次和第2次失去的水分（g）。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液的制備 分別準(zhǔn)確稱取對照品（g）：組氨酸（0.016 3 g）、天冬氨酸（0.080 2 g）、胱氨酸（0.048 1 g）、絲氨酸（0.026 9 g）、精氨酸（0.050 9 g）、甘氨酸（0.088 2 g）、蘇氨酸（0.025 5 g）、賴氨酸（0.046 0 g）、脯氨酸（0.016 7 g）、丙氨酸（0.067 2 g）、酪氨酸（0.036 7 g）、纈氨酸（0.015 5 g）、甲硫氨酸（0.019 6 g）、谷氨酸（0.019 4 g）、異亮氨酸（0.045 7 g）、亮氨酸（0.033 4 g）、苯丙氨酸（0.017 4 g），加入適量6 mol·L-1鹽酸溶解，定容至10 mL，配制成17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。同時，準(zhǔn)確稱取0.100 g的4-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)物于10 mL容量瓶中，6 mol·L-1鹽酸定容，配制成濃度10 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)使用液。

1.3.3 色譜條件 色譜條件參考李東和孫家義（2004）和繆瀟瑤等（2016）的并加以改進。色譜柱為迪馬C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）。流動相A為0.1 mol·L-1醋酸鈉緩沖溶液（pH=6.5，含10 mL·L-1 N，N-二甲基甲酞胺）；流動相B為乙腈∶水（體積比1∶l）。流動相B的梯度洗脫程序：0～6 min，16%；6～12 min，16%～24%；12～18 min，24%～30%；18～30 min，30%～40%；30～37 min，40%～50%；37～42 min，50%～98%；42～50 min，98%～80%；50～55 min，80%～16%；55～60 min，16%。流動相流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為360 nm；柱溫為40 ℃；進樣量為20 μL。

1.3.4 氨基酸樣品的制備與水解 準(zhǔn)確稱取0.2 g（精確至0.001 g）經(jīng)破碎處理的山茶種子樣品于聚氯乙烯罐中，加入10 mL的6.0 mol·L-1的鹽酸，于馬弗爐中110 ℃水解24 h，過濾，取0.5 mL于試管中，混標(biāo)也取0.5 mL于另一試管中，濾液和混標(biāo)旋干后，加入0.5 mL的0.1 mol·L-1的鹽酸溶解。

1.3.5 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的衍生與測定 分別量取混合標(biāo)準(zhǔn)液和樣品水解液500 μL，加入200 μL的10 mg·mL-1 4-氨基丁酸（內(nèi)標(biāo)）和1.5 mL、0.7 mol·L-1的HPO3，震蕩搖勻后，-4 ℃下離心30 min，取上清液500 μL加入pH為9.0的Na2CO3-NaHCO3 1.5 mL，然后加入30 mg·mL-1 的2，4-二硝基氯苯500 μL，再震蕩搖勻，然后置于90 ℃恒溫遮光水浴1.5 h，冷卻至室溫，加入10%乙酸500 μL搖勻，加超純水定容至5.0 mL，用0.45 μm有機濾膜過濾，高效液相色譜測試（吳文和等，2015）。得標(biāo)準(zhǔn)液及樣品衍生物溶液，取20 μL進樣測定。以保留時間定性，峰面積內(nèi)標(biāo)法定量， 用島津色譜工作站進行數(shù)據(jù)處理。

色氨酸的測定參照徐禮生等（2014）采用紫外分光光度法快速測定。

1.3.6 種子含油率和脂肪酸成分含量檢測 種子含油率、脂肪酸、不飽和脂肪酸依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中總脂肪、飽和脂肪酸、不飽和脂肪（酸）的測定——水解提取—氣相色譜法》（GB/T 22223-2008）。折射率用阿貝折射儀（2WAJ）檢測。

1.3.7 種子營養(yǎng)價值評價 采用理想蛋白質(zhì)和人體必需氨基酸模式譜比對法（Joint FAO/WHO Ad Hoc Expert Committee，1973），計算供試樣品中必需氨基酸（EAA） 的氨基酸比值（RAA），氨基酸比值系數(shù)（RC） 及比值系數(shù)分值（SRC）。

RAA = （待評蛋白質(zhì)EAA 含量）/（ 模式譜中相應(yīng)EAA 含量）；RC = （ RAA）/（ RAA 的平均值）；SRC = 100-CV × 100。

式中，CV為RC 的變異系數(shù)，CV=標(biāo)準(zhǔn)差/均值。RAA表明樣品蛋白質(zhì)中某種EAA含量是WHO/FAO模式譜中相應(yīng)EAA倍數(shù)，RAA和RC越接近1表明該氨基酸越接近WHO/FAO模式譜。RC>1表明該種必需氨基酸相對過剩，RC<1表明該氨基酸相對不足，RC最小者則為第一限制性氨基酸（FLAA）。SRC越接近100營養(yǎng)價值越高，SRC越小營養(yǎng)價值越低（陳菲等， 2015）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件分析（陳勝可，2013），圖表處理采用Excel軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜分離的結(jié)果

檢測17種氨基酸在1.3.3色譜條件下的峰響應(yīng)有高低不等，分離良好，不影響目標(biāo)物的定性定量，在保證分離度滿足要求的情況下，55 min可完成一個樣品的上機檢測分析（圖1）；色氨酸的測定采用紫外分光光度法。實驗重復(fù)3次，檢測平均值匯總得表1。

2.2 五種野山茶種子的氨基酸成分及含量

從種子中18種氨基酸含量的檢測結(jié)果（表1）可以看出，貴州五種野山茶的種子均未檢測出天冬氨酸（Asp）、絲氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）、甲硫氨酸（Met）和谷氨酸（Glu）， 其余13種氨基酸皆有，總氨基酸（TAA）含量在14.83～33.01 mg·g-1之間，其含量大小為長柱紅山茶>貴州紅山茶>美麗紅山茶>小黃花茶>皺葉瘤果茶。人體必需氨基酸（EAA）含量為6.55～13.29 mg·g-1，其含量大小為長柱紅山茶>貴州紅山茶>小黃花茶>美麗紅山茶>皺葉瘤果茶。五種野山茶種子的氨基酸組成以組氨酸含量最高，亮氨酸次之，色氨酸最低。其中，小黃花茶、皺葉瘤果茶和長柱紅山茶的必需氨基酸與總氨基酸比值（ EAA/TAA） ，必需氨基酸與非必需氨基酸比值（EAA/NEAA）皆達到了WHO/FAO 規(guī)定的理想蛋白質(zhì)之標(biāo)準(zhǔn)。

表1結(jié)果表明：（1）不同種類種子的總氨基酸含量具有極顯著差異（P<0.01，P<0.05）。其中，長柱紅山茶含量最高，達到33.01 mg·g-1；貴州紅山茶、美麗紅山茶、小黃花茶依次降低，分別為26.33、24.14、19.85 mg·g-1；皺葉瘤果茶最低，為14.83 mg·g-1。（2）人體必需氨基酸和非必需氨基酸含量因種類不同而呈顯著差異（P<0.01，P<0.05），人體必需氨基酸總含量表現(xiàn)為長柱紅山茶>貴州紅山茶>小黃花茶>美麗紅山茶>皺葉瘤果茶。其中蘇氨酸含量以貴州紅山茶最高，其次是長柱紅山茶和美麗紅山茶（兩者含量差異不顯著），小黃花茶、皺葉瘤果茶次之；色氨酸含量最高的是貴州紅山茶和皺葉瘤果茶，且兩者差異不顯著，其次是美麗紅山茶、小黃花茶、長柱紅山茶，且含量差異顯著（P<0.01，P<0.05），其余5種必需氨基酸含量皆表現(xiàn)為長柱紅山茶最高，皺葉瘤果茶最低；貴州紅山茶種子中纈氨酸的含量低于小黃花茶，其他4種必需氨基酸均高于小黃花茶；美麗紅山茶種子苯丙氨酸含量低于小黃花茶，其余4種必需氨基酸均高于小黃花茶。（3）人體非必需氨基酸總含量表現(xiàn)為長柱紅山茶>貴州紅山茶>美麗紅山茶>小黃花茶>皺葉瘤果茶。其中精氨酸、組氨酸、丙氨酸含量均表現(xiàn)為長柱紅山茶>貴州紅山茶>美麗紅山茶>小黃花茶>皺葉瘤果茶；長柱紅山茶種子中甘氨酸、胱氨酸、脯氨酸含量最高，皺葉瘤果茶種子中甘氨酸、脯氨酸含量最低，小黃花茶種子的胱氨酸含量最低。

2.3 五種野山茶種子千粒重、含水率及脂肪酸成分含量的差異

表2結(jié)果表明：（1）不同種類山茶種子的千粒重存在顯著差異（P<0.01，P<0.05），其中長柱紅山茶種子顆粒最大，達到3 289.7 g，美麗紅山茶、小黃花茶次之，分別為1 334.15、1 161.21 g，皺葉瘤果茶、貴州紅山茶和油茶農(nóng)家品種茶的種子顆粒較小，僅有898.86、786.33、758.12 g。（2）不同種類山茶的種子其含水量存在顯著差異（P<0.01，P<0.05），含水量的高低順序為小黃花茶（48.85%）>貴州紅山茶（43.15%）>皺葉瘤果茶（41.22%）>美麗紅山茶（40.25%）>長柱紅山茶（39.52%）>油茶農(nóng)家品種（35.56%）。（3）不同種類山茶種子的含油率存在顯著差異（P<0.01，P<0.05），油茶農(nóng)家品種的種子含油率最高（50.76%），依次是長柱紅山茶（43.93%）、貴州紅山茶（43.91%）、美麗紅山茶（40.79%）、皺葉瘤果茶（34.91%）和小黃花茶（13.70%）。（4）五種野山茶種子皆含有豐富的不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸，且不同種類山茶種子的各種脂肪酸含量差異顯著（P<0.01，P<0.05），小黃花茶的飽和脂肪酸含量最高，達到了64.25%，其后分別是皺葉瘤果茶（43.81%）、美麗紅山茶（39.85%）、貴州紅山茶（28.15%）、長柱紅山茶（28.11%）和油茶農(nóng)家品種（10.97%）；油茶農(nóng)家品種的不飽和脂肪酸含量最高（89.03%），含量依次減少為長柱紅山茶（71.89%）、貴州紅山茶（71.85%）、小黃花茶（65.30%）、美麗紅山茶（60.15%）、皺葉瘤果茶（56.19%）；不同種類山茶種子中的4種主要脂肪酸的含量存在顯著差異（P<0.01，P<0.05），棕櫚酸C16∶0含量：小黃花茶（62.58%）>皺葉瘤果茶（42.94%）>美麗紅山茶（38.24%）>長柱紅山茶（25.91%）>貴州紅山茶（25.79%）>油茶農(nóng)家品種（7.98%）；硬脂酸C18∶0和油酸C18∶1含量都表現(xiàn)為農(nóng)家品種茶（2.99%、82.57%）>貴州紅山茶（2.36%、68.71%）>長柱紅山茶（2.20%、68.30%）>小黃花茶（1.67%、60.79%）>美麗紅山茶（1.61%、57.66%）>皺葉瘤果茶（0.87%、52.60%），但亞油酸C18∶2含量變化是農(nóng)家品種茶（6.46%）>小黃花茶（4.51%）>皺葉瘤果茶（3.59%）=長柱紅山茶（3.59%）>貴州紅山茶（3.14%）>美麗紅山茶（2.49%）。

2.4 五種野山茶種子千粒重、含水量及脂肪酸成分含量的相關(guān)性分析

表3結(jié)果表明：（1）種子千粒重與油脂折光率極顯著負相關(guān)（R=-0.766，P<0.01）。（2）種子含水量與棕櫚酸、飽和脂肪酸、油脂折光率極顯著正相關(guān) （R=0.876，P<0.01；R=0.884，P<0.01；R=0.626，P<0.01）；種子含水量與含油率極顯著負相關(guān)（R=-0.904，P<0.01），與油酸、不飽和脂肪酸顯著負相關(guān)（R=-0.527，P<0.05；R=-0.517，P<0.05）。（3）種子含油率與棕櫚酸、飽和脂肪酸、油脂折光率極顯著負相關(guān)（R=-0.946，P<0.01；R=-0.952，P<0.01；R=-0.615，P<0.01），與硬脂酸、油酸、不飽和脂肪酸含量顯著正相關(guān)（R=0.556，P<0.05；R=0.563，P<0.05；R=0.524，P<0.05）。（4）種子棕櫚酸含量與飽和脂肪酸、油脂折光率極顯著正相關(guān)（R=0.998，P<0.01；R=0.646，P<0.01），與硬脂酸、油酸、不飽和脂肪酸含量極顯著負相關(guān)（R=-0.759，P<0.01；R=-0.797，P<0.01；R=-0.766，P<0.01）。（5）種子硬脂酸與飽和脂肪酸極顯著負相關(guān)（R=-0.742，P<0.01），與油酸、不飽和脂肪酸極顯著正相關(guān)（R=0.975，P<0.01；R=0.957，P<0.01），與亞油酸顯著正相關(guān)（R=0.574，P<0.01），與油脂折光率顯著負相關(guān)（R=-0.485，P<0.01）。（6）種子飽和脂肪酸含量與油酸、不飽和脂肪酸含量極顯著負相關(guān)（R=-0.776，P<0.01；R=-0.750，P<0.01），與油脂折光率極顯著正相關(guān)R=0.646，P<0.01）。（7）種子油酸含量與亞油酸、不飽和脂肪酸含量極顯著正相關(guān)（R=0.718，P<0.01；R=0.997，P<0.01），與油脂折光率顯著負相關(guān)（R=-0.510，P<0.01）。（8）種子中亞油酸含量與不飽和脂肪酸含量極顯著正相關(guān)（R=0.773，P<0.01）。（9）種子不飽和脂肪酸含量與油脂折光率顯著負相關(guān)（R=-0.485，P<0.05）。

2.5 種子油脂質(zhì)量的營養(yǎng)評價

根據(jù)氨基酸平衡理論原理和方法，采用氨基酸比值系數(shù)法對貴州五種野山茶種子進行油脂質(zhì)量的營養(yǎng)評價。如果蛋白質(zhì)中必需氨基酸齊全，且比例越接近或符合WHO/FAO 的氨基酸模式要求，則其蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值越高。貴州五種野山茶種子中各種必需氨基酸與WHO/FAO模式譜進行比較的結(jié)果表明（表4），其中9種必需氨基酸偏低于WHO/FAO模式值。

根據(jù)表4的統(tǒng)計計算得出貴州五種野山茶種子蛋白質(zhì)的氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系數(shù)（RC） 及比值系數(shù)分值（ SRC）值（表5）。由表5的RC值可知，五種野山茶種子中的第一限制性氨基酸皆不同，且長柱紅山茶種子中各必需氨基酸的RC值均>1，表明長柱紅山茶種子的各項必需氨基酸均相對充足，貴州紅山茶種子中除第一限制性氨基酸纈氨酸（Val）的RC值為0.882外，其余RC值均>1，表明貴州紅山茶種子除纈氨酸（Val）外，其他的各項必需氨基酸都相對充足。貴州五種野山茶種子的SRC值為83.639～90.947，說明這五種野山茶種子中的蛋白質(zhì)均具有很好的營養(yǎng)價值，且長柱紅山茶和貴州紅山茶的營養(yǎng)價值最高。

3 討論與結(jié)論

3.1 貴州五種野山茶種子脂肪酸含量對生長環(huán)境變化的響應(yīng)

貴州五種野山茶種子中均含有豐富的脂肪酸，但其成分含量因不同種類而顯著差異，植物種子脂肪酸成分含量的變化響應(yīng)著植物生長的環(huán)境。五種野山茶種子中均含有豐富的不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸，且不同山茶種子的各種脂肪酸含量差異顯著。飽和脂肪酸含量最高的是小黃花茶（64.25%），比油茶農(nóng)家品種高出52.28%；不飽和脂肪酸含量最高的是長柱紅山茶（71.89%）和貴州紅山茶（71.85%），僅比油茶農(nóng)家品種低17.14%和17.18%。4種主要脂肪酸的含量也因種類不同呈顯著差異，棕櫚酸C16∶0含量較小的為長柱紅山茶（25.91%）和貴州紅山茶（25.79%），分別比油茶農(nóng)家品種高出17.93%和17.81%；硬脂酸C18∶0和油酸C18∶1含量較高的是貴州紅山茶（2.36%）和長柱紅山茶（2.20%），分別比油茶農(nóng)家品種低0.63%、13.86%和0.79%、14.27%；而亞油酸C18∶2含量最高的是小黃花茶（4.51%），長柱紅山茶（3.59%）、貴州紅山茶（3.14%）次之，分別比油茶農(nóng)家品種低2.31%、2.57%和3.32%。本研究證明了植物種子脂肪酸的組成及含量與植物生長環(huán)境的響應(yīng)有著密切的關(guān)系，系統(tǒng)地開展野生山茶植物種子脂肪酸的檢測評價并找出其與生長環(huán)境的相互關(guān)系，結(jié)合配套栽培措施的試驗，探索其含量得以增加的形成機理和優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)油茶新品種的選育及其高效栽培技術(shù)具有重要的應(yīng)用價值。

3.2 貴州五種野山茶種子蛋白質(zhì)均具較高營養(yǎng)價值

貴州五種野山茶種子皆含有必需氨基酸，必需氨基酸與非必需氨基酸比值（EAA/NEAA）接近于WHO/FAO的理想蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，并因種類不同其含油率和主要脂肪酸含量差異顯著。五種野山茶種子含油率和不飽和脂肪酸含量的檢測結(jié)果是長柱紅山茶（43.93%，71.89%）、貴州紅山茶（43.91%，71.85%）、美麗紅山茶（40.79%，60.15%）、皺葉瘤果茶（34.91%，56.19%）、小黃花茶（13.70%，65.30%），其含油率及其棕櫚酸C16∶0、硬脂酸C18∶0、油酸C18∶1、亞油酸C18∶2等四種主要脂肪酸含量的差異顯著（P<0.01，P<0.05）。五種野山茶種子皆未檢測出天冬氨酸（Asp）、絲氨酸（Ser）、酪氨酸（Tyr）、甲硫氨酸（Met）和谷氨酸（Glu），包括人體必需8種氨基酸在內(nèi)的其余13種氨基酸皆有，總氨基酸（TAA）含量在14.83～33.01 mg·g-1之間，不同種類的氨基酸總量呈極顯著差異，人體必需氨基酸（EAA）含量為6.55～13.29 mg·g-1，必需氨基酸與非必需氨基酸比值（EAA/NEAA）除了美麗紅山茶偏低外，其余四種皆達到了WHO/FAO的理想蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（表1），種子蛋白質(zhì)均具有較高的營養(yǎng)價值。

3.3 長柱紅山茶和貴州紅山茶可作為優(yōu)質(zhì)油茶新品種開發(fā)利用

本研究中，五種野山茶種子中皆含有13種氨基酸，總氨基酸（TAA）含量為14.83～33.01 mg·g-1，人體必需氨基酸（EAA）含量為6.55～13.29 mg·g-1，總氨基酸含量和人體必需氨基酸含量皆是長柱紅山茶和貴州紅山茶較高。在營養(yǎng)評價中顯示，長柱紅山茶種子中各必需氨基酸的RC值均>1，貴州紅山茶種子中除第一限制性氨基酸纈氨酸（Val）的RC值為0.882外，其余RC值均>1，表明長柱紅山茶和貴州紅山茶種子中的各項必需氨基酸含量都較高。我國現(xiàn)行茶油標(biāo)準(zhǔn)GB11765-2003規(guī)定（中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，2003），主要脂肪酸組成中，飽和脂肪酸7%～11%，其中油酸C18∶174%～78%、亞油酸C18∶27%～14%，也就是說貴州五種野山茶的油酸和亞油酸組成的不飽和脂肪酸含量均未達到我國現(xiàn)行茶油標(biāo)準(zhǔn)。但是貴州紅山茶和長柱紅山茶的油酸和亞油酸相對較高，僅分別相差5.29、3.86和5.69、3.41，較為接近我國現(xiàn)行茶油標(biāo)準(zhǔn)，而且出油率分別達到43.91%、43.93%，與推廣栽培的油茶農(nóng)家品種僅分別相差6.85和6.83個百分點。因此，長柱紅山茶和貴州紅山茶的氨基酸含量較高，油脂質(zhì)量等級指標(biāo)接近我國現(xiàn)行茶油標(biāo)準(zhǔn)，可以作為優(yōu)質(zhì)的油茶新品種加以開發(fā)利用。

3.4 因地制宜和推廣種植不同產(chǎn)地的油茶品種具有現(xiàn)實意義

油茶是中國主要的傳統(tǒng)食用油，自公元前三世紀《山海經(jīng)》記載“員木，南方油食也”以來，油茶（Camellia oleifera cv.）已經(jīng)過兩千多年的種植和選育而成為世界四大木本油料之一，在我國南方地區(qū)的高山及丘陵地帶廣泛栽培（莊瑞林，2008）。貴州位于長江、珠江上游的分水嶺地帶，總面積17.167×104 km2，80%以上地區(qū)年均氣溫為11～19 ℃、年均降雨量為1 100～1 300 mm，黔西高原由于在冬半年受到西南暖流的影響，降雨較多，因而全省的干濕狀況又出現(xiàn)地區(qū)性差異，貴州所處的地理位置及氣候特點的適應(yīng)，發(fā)育了亞熱帶常綠闊葉林植被成分，但又由于普遍受到太平洋季風(fēng)、印度洋季風(fēng)以及源于西伯利亞的極地大陸氣團的影響，在貴州同時發(fā)育了濕潤性常綠闊葉林（貴州東部和中部地區(qū)）及半濕潤性常綠闊葉林（貴州西部地區(qū)），兩者之間又有過渡性植被成分，因而使貴州山區(qū)形成了高原性、季風(fēng)性、多樣性的復(fù)雜生態(tài)環(huán)境。盡管氣候條件有一定的區(qū)域性差異，但皆較為適合山茶屬植物的生長發(fā)育。本研究中，不同種類山茶種子的千粒重存在顯著差異，其中長柱紅山茶種子顆粒最大（3 289.7g）；不同種類的山茶種子其含水率呈顯著差異，小黃花茶含水量最高（48.85%），長柱紅山茶最低（39.52%）；不同山茶種子的含油率呈顯著差異，含油率較高的是長柱紅山茶（43.93%）和貴州紅山茶（43.91%）。貴州五種野山茶種子中千粒重、含水量、含油率皆因產(chǎn)地環(huán)境不同而有顯著差異，這是其原產(chǎn)地及生態(tài)環(huán)境的對油茶植物生長的影響和物競天擇的結(jié)果，進化了相應(yīng)的生理潛能和適應(yīng)機制，因而造成不同油茶植物種類之間的差異性結(jié)果。因此，在貴州油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展上因地制宜地制定發(fā)展規(guī)劃，依據(jù)生態(tài)適宜性原則開展引種栽培和品比試驗，選育出適合不同區(qū)域推廣種植的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)油茶新品種具有重要意義。

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