馬錢子堿及其納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)比較研究

管慶霞 張悅 鄒淑君 孫爽 李云行 華曉丹 楊志欣 李秀巖 王艷宏

中圖分類號(hào) R945；R969.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）20-2777-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.20.09

摘 要 目的：建立測(cè)定大鼠血漿中馬錢子堿質(zhì)量濃度的方法，并比較馬錢子堿及其納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體（NLC）在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異。方法：16只雄性SD大鼠隨機(jī)分為馬錢子堿NLC溶液組和馬錢子堿溶液組（均以生理鹽水為溶劑，質(zhì)量濃度均為1.28 mg/mL），每組8只。所有大鼠均于尾靜脈單次注射相應(yīng)藥物溶液（10 mg/kg），分別于給藥前及給藥后15、20、30、40、45、60、90、120、150、180、210、240、480 min自眼底靜脈叢毛細(xì)血管取血0.5 mL，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定。色譜柱為Dikma C18，流動(dòng)相為甲醇-含乙酸和三乙胺的混合水溶液（30 ∶ 70，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm，流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。采用DAS 2.0軟件計(jì)算兩組大鼠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，采用F檢驗(yàn)考察兩者的差異。結(jié)果：馬錢子堿血藥濃度的線性范圍為1.03～66.00 ?g/mL（R2=0.999 6），定量下限為1.03 ?g/mL，最低檢測(cè)限為0.515 ?g/mL；日內(nèi)、日間RSD<5%；方法回收率為84.90%～100.88%、提取回收率為80.60%～91.98%（RSD均小于10%）。大鼠尾靜脈單次注射馬錢子堿NLC溶液與馬錢子堿溶液后的平均藥-時(shí)曲線均符合二室模型，吸收半衰期（t1/2α）分別為（0.24±0.11）、（0.06±0.03）h，消除半衰期（t1/2β）分別為（2.90±0.22）、（0.57±0.32）h，藥-時(shí)曲線下面積（AUC0-t）分別為（88.00±6.98）、（28.50±5.87）?g·h/mL，AUC0-∞分別為（109.96±7.99）、（45.06±6.66）?g·h/mL。與馬錢子堿溶液組比較，馬錢子堿NLC溶液組大鼠的tl/2α、t1/2β、AUC0-t、AUC0-∞均顯著增加，清除率、藥物從中央室消除的一級(jí)速率常數(shù)、藥物從中央室向周邊室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級(jí)速率常數(shù)均顯著降低（P<0.05或P<0.01）；而兩組大鼠藥物從周邊室向中央室轉(zhuǎn)運(yùn)的一級(jí)速率常數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：本研究建立的HPLC法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，靈敏度、精密度及回收率高，可用于大鼠血漿中馬錢子堿質(zhì)量濃度的測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)的研究。將馬錢子堿制成NLC后，其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化明顯，藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，清除率顯著降低。

關(guān)鍵詞 馬錢子堿；納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體；高效液相色譜法；血藥濃度；藥動(dòng)學(xué)；大鼠；比較研究

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the determination of brucine concentration in plasma of rats， and to compare the pharmacokinetic differences between brucine and its nanostructure lipid carrier （NLC） in rats. METHODS： Sixteen male SD rats were randomly divided into brucine NLC solution group and brucine solution group （using normal saline as solvent， and containing brucine 1.28 mg/mL）， with 8 rats in each group. They were given relevant solution 10 mg/kg via tail vein. Blood sample 0.5 mL was collected from fundus venous plexus capillary before medication and 15， 20， 30， 40， 45， 60， 90， 120， 150， 180， 210， 240， 480 min after medication. HPLC method was adopted. The determination was performed on Dikma C18 column with mobile phase consisted of methanol-water containing acetic acid and triethylamine （30 ∶ 70，V/V） at the flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was set at 265 nm， and column temperature was 30 ℃. Sample size was 10 μL. Pharmacokinetic parameters of rats in 2 groups were calculated by using DAS 2.0 software， and the difference of them were compared by F test. RESULTS： The linear range of brucine plasma concentration were 1.03-66.00 ?g/mL （R2=0.999 6）； the limit of quantitation was 1.03 ?g/mL， and lowest detection limit was 0.515 ?g/mL. RSDs of intra-day and inter-day were lower than 5%； method recoveries were 84.90%-100.88%， extraction recoveries were 80.60%-91.98%（all RSDs were lower than 10%）. Average plasma concentration-time curve of single administration of brucine NLC solution and brucine solution were all in line with two-compartment model after medication via tail vein. The pharmacokinetic parameters included t1/2α were （0.24±0.11） and（0.06±0.03）h； t1/2β were （2.90±0.22） and （0.57±0.32）h； AUC0-t were （88.00±6.98） and （28.50±5.87）?g·h/mL； AUC0-∞ were（109.96±7.99） and （45.06±6.66）?g·h/mL. Compared with brucine solution group， t1/2α， t1/2β， AUC0-t and AUC0-∞ of brucine NLC solution group were increased significantly； while CL， k10 and k12 were decreased significantly， with statistical significance （P<0.05 or P<0.01）. There was no statistical significance in k21 between 2 groups （P>0.05）. CONCLUSIONS： Established HPLC method is simple， specific， sensitive， precise and highly recoverable. It can be used for the determination of plasma concentration and phamacokinetic study of brucine in rats. After brucine NLC is prepared， the pharmacokinetic parameters of brucine change significantly； retention time of brucine is significantly prolonged and the clearance rate decreases significantly.

KEYWORDS Brucine； Nanostructure liquid carrier； HPLC； Plasma concentration； Pharmacokinetics； Rat； Comparative study

馬錢子堿（Brucine）是從馬錢科植物馬錢（Strychnos nux-vomica L.）的干燥成熟種子中提取得到的一種吲哚類生物堿。研究表明，該化合物具有多種藥理作用，如抗腫瘤[1-2]、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)痛、抗炎等[3-6]，其中抗腫瘤作用是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。然而，由于存在水溶性差、半衰期短、生物利用度低等缺點(diǎn)，使得馬錢子堿的臨床應(yīng)用受到限制[7]。

納米技術(shù)因其在藥物傳遞方面具有高效、定向、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于靶向給藥系統(tǒng)研究，是藥劑學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域[8]。納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體（NLC）是采用納米技術(shù)制備的可負(fù)載活性成分的新型脂質(zhì)納米粒，因加入了與固態(tài)脂質(zhì)性質(zhì)相差較大的液態(tài)油，所得制劑具有較高的晶體缺陷[9-10]，從而能容納更多的藥物分子，有效地避免了傳統(tǒng)脂質(zhì)體包封率低、貯存過程中藥物易泄漏等現(xiàn)象的發(fā)生[11-13]。NLC不僅具有生物相容性好、靶向作用強(qiáng)、藥物體內(nèi)滯留時(shí)間長(zhǎng)、生物利用度高等優(yōu)點(diǎn)，而且可以提高藥物的包封率和載藥量[14-15]。因此，將馬錢子堿制成NLC后有望延長(zhǎng)其在體內(nèi)的作用時(shí)間，提高其靶向性，減少其對(duì)心臟、腎臟等其他臟器的毒副作用[16-17]。本課題組前期已成功制備了馬錢子堿NLC，本研究在此基礎(chǔ)上，以高效液相色譜法（HPLC）為檢測(cè)手段，比較了馬錢子堿NLC與馬錢子堿溶液（以生理鹽水為溶劑）在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異，以期為馬錢子堿NLC的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

E2695-2698型HPLC系統(tǒng)（美國(guó)Waters公司）；AB265-S型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Autotune型高強(qiáng)度超聲波細(xì)胞破碎儀（美國(guó)Sonics公司）；DF-101Z型恒溫磁力攪拌器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；SB-5200D型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；BF-2000型氮?dú)獯蹈蓛x（北京八方世紀(jì)科技有限公司）；TGL-16C型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；WH-1型微型渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠有限公司）；GLZY-B型真空冷凍干燥機(jī)（上海浦東冷凍干燥設(shè)備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

馬錢子堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110706-200505，純度：≥98%）；馬錢子堿原料藥（日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社，批號(hào)：059-17，純度：>98%）；肝素鈉注射液（江蘇萬邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H32020612，批號(hào)：1209124，規(guī)格：2 mL ∶ 12 500 u）；泊洛沙姆188（德國(guó)BASF公司，批號(hào)：WOPG565B）；甲醇為色譜純，單硬脂酸甘油酯、油酸、無水乙醇等均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

清潔級(jí)雄性SD大鼠，6～7周齡，體質(zhì)量（220±25）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（黑）2013-004]。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 馬錢子堿NLC溶液 稱取單硬脂酸甘油酯30 mg、油酸25 mg，置于燒杯中，加入無水乙醇2 mL，置于60 ℃水浴中加熱，使其完全溶解，在磁力攪拌的作用下加入馬錢子堿原料藥1.28 mg，混勻，作為油相；量取1%泊洛沙姆188水溶液20 mL至另一燒杯中，置于60 ℃水浴中，作為水相。在60 ℃恒溫磁力攪拌的條件下，將油相緩緩滴加至水相中，滴加完畢后，超聲（功率：750 W，頻率：20 kHz）處理3 min，并于室溫下繼續(xù)攪拌45 min，待揮去乙醇后，得質(zhì)量濃度為0.06 mg/mL的馬錢子堿NLC混懸液。將上述混懸液冷凍干燥，即得馬錢子堿NLC凍干品。取上述凍干品適量，用生理鹽水復(fù)溶，得質(zhì)量濃度為1.28 mg/mL的馬錢子堿NLC溶液，備用。

2.1.2 馬錢子堿溶液 稱取馬錢子堿1.28 mg，用含8%乙醇的生理鹽水溶解，得質(zhì)量濃度為1.28 mg/mL的馬錢子堿溶液，備用。

2.2 分組與給藥

將16只雄性SD大鼠隨機(jī)分為馬錢子堿NLC溶液組和馬錢子堿溶液組，每組8只。所有大鼠禁食、不禁水12 h后，于尾靜脈單次注射相應(yīng)溶液，給藥劑量均為10 mg/kg。

2.3 血漿樣品的處理

取大鼠血漿樣品200 μL，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液100 μL，渦旋1 min，超聲（功率：200 W，頻率：40 kHz，下同）處理20 min，加入氯仿2 mL，渦旋5 min，超聲處理20 min，以5 000 r/min離心5 min，收集下層沉淀；上層血清繼續(xù)加入氯仿2 mL，重復(fù)上述操作。合并兩次離心所得的下層沉淀，置于37 ℃水浴中以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)眉状?00 μL復(fù)溶，渦旋2 min，以轉(zhuǎn)速12 000 r/min離心10 min后，取上清液適量，進(jìn)樣分析。

2.4 血漿樣品的檢測(cè)

2.4.1 色譜條件 色譜柱：Dikma C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-含乙酸和三乙胺的混合水溶液（每230 mL水中含乙酸2.4 mL、三乙胺0.3 mL）（30 ∶ 70，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.4.2 專屬性試驗(yàn) 取空白血漿、含藥血漿樣品（馬錢子堿質(zhì)量濃度為2.06 μg/mL）、大鼠尾靜脈注射給藥480 min后的血漿樣品各適量，分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果，在此色譜條件下，本方法的專屬性良好，馬錢子堿的保留時(shí)間約為6.90 min，血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)物的測(cè)定。

2.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取馬錢子堿對(duì)照品16.50 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，得質(zhì)量濃度為0.66 mg/mL的對(duì)照品貯備液；取上述貯備液各適量，用甲醇稀釋，得質(zhì)量濃度分別為726.00、363.00、181.50、90.75、45.43、22.66、11.33 ?g/mL的系列對(duì)照品溶液。精密量取空白血漿各200 μL，分別加入上述系列對(duì)照品溶液各20 ?L，得馬錢子堿質(zhì)量濃度分別為66.00、33.00、16.50、8.25、4.13、2.06、1.03 ?g/mL的含藥血漿樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測(cè)物質(zhì)量濃度（x，?g/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法（加權(quán)系數(shù)ω=1/x2）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=37 053x-71 623（R2=0.999 6）。結(jié)果，馬錢子堿血藥濃度的線性范圍為1.03～66.00 ?g/mL。

2.4.4 最低檢測(cè)限及定量下限的考察 將“2.4.3”項(xiàng)下含藥血漿樣品逐級(jí)稀釋，分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并計(jì)算質(zhì)量濃度。當(dāng)信噪比（S/N）為3時(shí)，所測(cè)得的馬錢子堿質(zhì)量濃度為最低檢測(cè)限；當(dāng)S/N為10時(shí)，所測(cè)得的馬錢子堿質(zhì)量濃度為定量下限。結(jié)果，馬錢子堿的最低檢測(cè)限為0.515 ?g/mL，定量下限為1.03 ?g/mL。由此可見，本方法的靈敏度較高[18]。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 精密量取空白血漿各200 μL，分別加入“2.4.3”項(xiàng)下相應(yīng)系列對(duì)照品溶液適量，配制馬錢子堿低、中、高質(zhì)量濃度（2.06、16.50、52.80 ?g/mL）質(zhì)控樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5 d，考察日間精密度。結(jié)果，日內(nèi)RSD分別為4.07%、3.23%、4.01%（n=5）；日間RSD分別為3.23%、2.02%、3.98%（n=25），符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[18]。

2.4.6 回收率試驗(yàn) 按“2.4.5”項(xiàng)下方法配制馬錢子堿低、中、高質(zhì)量濃度（2.06、16.50、52.80 ?g/mL）質(zhì)控樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積并計(jì)算質(zhì)量濃度。按“2.4.3”項(xiàng)下方法配制馬錢子堿低、中、高質(zhì)量濃度（2.06、16.50、52.80 ?g/mL）對(duì)照品溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。將質(zhì)控樣品實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較，計(jì)算方法回收率；將質(zhì)控樣品的峰面積與上述對(duì)照品溶液的峰面積進(jìn)行比較，計(jì)算提取回收率。每個(gè)質(zhì)量濃度樣品平行操作6次。結(jié)果，各質(zhì)控樣品的方法回收率為84.90%～100.88%（RSD<5%，n=6），提取回收率為80.60%～91.98%（RSD<10%，n=6），符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[18]，詳見表1。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.4.5”項(xiàng)下方法配制馬錢子堿低、中、高質(zhì)量濃度（2.06、16.50、52.80 ?g/mL）質(zhì)控樣品，分別考察其室溫放置6 h、-20 ℃放置2周、反復(fù)凍融（-20～27 ℃）3次的穩(wěn)定性。每個(gè)質(zhì)量濃度樣品平行操作3次。結(jié)果，各質(zhì)控樣品實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度的RSD均小于10%（n=3），表明各質(zhì)控樣品在上述條件下穩(wěn)定。

2.5 藥動(dòng)學(xué)研究

16只雄性SD大鼠按“2.2”項(xiàng)下方法分組并給藥，分別于給藥前及給藥后15、20、30、40、45、60、90、120、150、180、210、240、480 min自眼底靜脈叢毛細(xì)血管取血0.5 mL，置于含肝素鈉的1.5 mL尖底離心管中，以6 000 r/min離心10 min，分離上層血漿（于-20 ℃下保存）。將上述血漿樣品分別按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定血漿中馬錢子堿的質(zhì)量濃度，并繪制其在大鼠體內(nèi)的平均藥-時(shí)曲線，詳見圖2（由于馬錢子堿溶液組大鼠給藥120 min后的血漿樣品中幾乎未檢出待測(cè)物，故圖中其血藥濃度數(shù)據(jù)截至該時(shí)間點(diǎn)）。

采用DAS 2.0軟件處理上述平均藥-時(shí)曲線數(shù)據(jù)，并進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)分析。根據(jù)阿凱克信息準(zhǔn)則（AIC）值最小和擬合優(yōu)度最優(yōu)原則，結(jié)合F檢驗(yàn)，可判定大鼠尾靜脈注射馬錢子堿NLC溶液與馬錢子堿溶液后的平均藥-時(shí)曲線均符合二室模型[19]，其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2（采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料組間比較采用F檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。

由表2可見，與馬錢子堿溶液組比較，馬錢子堿NLC溶液組大鼠的tl/2α、t1/2β、AUC0-t、AUC0-∞均顯著增加，CL、k10、k12均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。這提示制成NLC可改變馬錢子堿在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，延長(zhǎng)其半衰期和體內(nèi)滯留時(shí)間，降低其清除率，有助于其長(zhǎng)效緩釋作用的發(fā)揮。但兩組大鼠k21比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

馬錢子堿是一種高效的抗腫瘤單體化合物，但因水溶性差、毒性較強(qiáng)、生物利用度低等缺點(diǎn)制約了其在臨床上的應(yīng)用[1-2，7]。如何將藥物靶向于機(jī)體某一部位（如肝臟），使其更好地發(fā)揮治療作用，是目前臨床亟需攻克的難題。NLC作為藥物的載體用于癌癥的治療，表現(xiàn)出良好的療效，近年來已被國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注[11-13，20]。作為藥物載體，NLC粒徑較小，具有一定的被動(dòng)靶向作用，同時(shí)可進(jìn)行靶向修飾，有助于進(jìn)一步提高給藥系統(tǒng)的靶向效果[21]。鑒于此，本課題組前期將馬錢子堿制成了NLC。

為準(zhǔn)確檢測(cè)大鼠血漿中馬錢子堿的質(zhì)量濃度，本研究建立了測(cè)定其血藥濃度的HPLC法。本課題組在預(yù)試驗(yàn)中考察了不同流動(dòng)相體系、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速及柱溫等因素對(duì)其定量分析的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-含乙酸和三乙胺的混合水溶液（每230 mL水中含乙酸2.4 mL、三乙胺0.3 mL）（30 ∶ 70，V/V）、檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm、流速為1 mL/min、柱溫為30 ℃時(shí)，馬錢子堿色譜峰的峰形及分離度均較好，且不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾[22]，故將其作為最終的色譜條件。馬錢子堿是一種弱堿性的吲哚類生物堿，能與血漿蛋白結(jié)合，微溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑[23]。因此，本研究采用兩步法對(duì)血漿樣品進(jìn)行處理：第一步先用氫氧化鈉溶液使血漿中的馬錢子堿游離，第二步再用有機(jī)溶劑（氯仿）進(jìn)行液-液萃取。本課題組前期比較了甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等萃取劑的萃取效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)氫氧化鈉游離后，甲醇、乙醇、乙醚的萃取效率均低于氯仿，故最終選擇以氯仿作為萃取劑對(duì)血漿樣品進(jìn)行處理。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，本研究建立的HPLC法具有操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，靈敏度、精密度及回收率高的優(yōu)點(diǎn)，可用于血漿樣品中馬錢子堿質(zhì)量濃度的測(cè)定。

隨后，本研究以上述HPLC法為檢測(cè)手段，比較了馬錢子堿NLC溶液與馬錢子堿溶液在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征。結(jié)果顯示，大鼠尾靜脈注射馬錢子堿NLC溶液和馬錢子堿溶液后，兩者的平均藥-時(shí)曲線均符合二室模型[19]。但制成NLC后，馬錢子堿的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)發(fā)生了明顯改變：與馬錢子堿溶液（以生理鹽水為溶劑）比較，其tl/2α、t1/2β、AUC0-t、AUC0-∞均顯著增加，CL、k10、k12均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示制成NLC后，馬錢子堿在大鼠體內(nèi)的滯留時(shí)間顯著延長(zhǎng)，清除率顯著降低，有助于其發(fā)揮長(zhǎng)效緩釋作用。其原因可能是NLC有效地保護(hù)了藥物，使其被肝臟代謝的速率有所降低[24]。

綜上所述，本研究建立的HPLC法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，靈敏度、精密度及回收率高，可用于大鼠血漿中馬錢子堿質(zhì)量濃度的測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)的研究。將馬錢子堿制成NLC后，其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)變化明顯，藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間顯著延長(zhǎng)、清除率顯著降低。但本研究只考察了馬錢子堿NLC在正常大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程，而在不同種屬動(dòng)物體內(nèi)的藥物代謝過程以及病理情況下的藥物代謝過程尚有待于后續(xù)深入研究。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 孔建明. 馬錢子堿對(duì)人宮頸癌細(xì)胞HeLa及未成年小鼠子宮增質(zhì)量的影響[J]. 中成藥，2013，35（3）：610-613.

[ 2 ] 鄧旭坤，蔡寶昌，呂曉宇，等. 馬錢子堿及其脂質(zhì)體對(duì)移植性荷瘤小鼠抗腫瘤作用的對(duì)比研究[J]. 中草藥，2006，37（3）：389-393.

[ 3 ] 何曉瑋，范曉萍，鐘濤，等. 馬錢子堿新型給藥系統(tǒng)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，33（12）：2908-2911.

[ 4 ] 魏守鵬，李語(yǔ)玲，梁慧，等. 馬錢子堿氮氧化物的合成及戒酒藥理活性的初步評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2015，29（1）：55-59.

[ 5 ] 楊紅梅，劉若軒，李麗明，等. 不同制法馬錢子抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 中藥材，2016，39（6）：1276-1278.

[ 6 ] 張董喆，孫曙光，李偉，等. 制馬錢子對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，30（4）：539-541.

[ 7 ] 趙引利，何燕寧，楊宇杰，等. 馬錢子及其制劑藥動(dòng)學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中草藥，2015，46（11）：1710-1714.

[ 8 ] 魏麗莎，季艷霞，康振橋，等. 腫瘤靶向納米制劑研究進(jìn)展[J]. 國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2014，41（1）：68-74.

[ 9 ] 王賢兒，鐘希文，梅全喜，等. 固體脂質(zhì)納米粒在中藥經(jīng)皮給藥中的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2015，26（13）：1860-1862.

[10] DENG XK，YIN W，LI WD，et al. The anti-tumor effects of alkaloids from the seeds of Strychnos nux-vomica on HepG2 cells and its possible mechanism[J]. J Ethnopharmacol，2006，106（2）：179-184.

[11] M?LLER RH，PETERSEN RD，HOMMOSS A，et al. Nanostmctured lipid carriers （NLC） in cosmetic dermal products[J]. Adv Drag Deliv Rev，2007，59（6）：522-530.

[12] M?LLER RH，RADTKE M，WISAING SA. Solid lipid nanoparticlea （SLN） and nanoatructured lipid carriers （NLC） in cosmetic and dermatoloecal preparations[J].Adv Drug Deliv Rev，2002，54（Suppl 1）：S131-S155.

[13] 萬坤，孫立力，胡雪原，等. 姜黃素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的藥動(dòng)學(xué)[J]. 中成藥，2014，36（12）：2503-2507.

[14] 韓飛，劉洪卓，李三鳴. 固體脂質(zhì)納米粒和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中的研究進(jìn)展[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25（10）：839-844.

[15] 李楠，李錫晶，王倩. 微乳法制備姜黃素固體脂質(zhì)納米粒[J]. 中國(guó)藥房，2015，26（19）：2698-2702.

[16] 宋春曉，何書蓮，曹春鳳，等. 固體脂質(zhì)納米粒和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在藥物傳遞中的研究進(jìn)展[J]. 藥學(xué)研究，2016，35（4）：234-236、245.

[17] 于蓮，崔丹，應(yīng)曉英，等. 表面修飾脂質(zhì)納米粒給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（2）：108- 112.

[18] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典：四部[S].2015年版. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：356-368.

[19] 柳珊，楊林，廖紅，等. 吳茱黃堿納米復(fù)合物的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度研究[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（4）：325-327.

[20] SILVA EL，CARNEIRO G，CAETANO PA，et al. Nanostructured lipid carriers loaded with tributyrin as an alternative to improve anticancer activity of all-trans retinoic acid[J]. Expert Rev Anticancer Ther，2015，15（2）：247- 256.

[21] 方敏. 姜黃素納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備及其靶向性研究[D].武漢：華中科技大學(xué)，2013.

[22] 王琳，蔡寶昌，楊歡，等. 馬錢子堿溶液和馬錢子堿脂質(zhì)體在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)比較研究[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22（3）：165-167.

[23] 趙義軍，呂邵娃，古立翠，等. 馬錢子堿固體脂質(zhì)納米粒大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究[J]. 哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2014，30（3）：260-263.

[24] 邢盼盼. 馬錢子堿與甘草次酸、甘草苷配伍后對(duì)大鼠肝臟CYP450酶基因表達(dá)與蛋白活性的影響[D].武漢：湖北大學(xué)，2011.

（收稿日期：2018-03-23 修回日期：2018-08-16）

（編輯：張?jiān)拢?/p>