中藥六味地黃湯與單味顆粒劑混合液成分比較研究

胡耶芳 林玲易 春霞顏 劍黎劍

摘要目的：比較中藥六味地黃湯與單味顆?；旌弦河行С煞值暮俊７椒ǎ翰捎酶咝б合嗌V法，以乙腈磷酸水溶液為流動相進行梯度洗脫，流速為10 mL/min，檢測波長238 nm。定量分析2種溶液中的已知有效活性成分馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷的含量變化。結(jié)果：3批六味地黃傳統(tǒng)湯劑種馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。結(jié)論：中藥六味地黃湯單味顆粒劑混合液低于六味地黃湯有效成分含量，存在明顯差異，本研究為臨床中藥湯劑、單味顆粒劑合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞中藥；六味地黃湯；單味顆粒劑；混合液；高效液相色譜法；馬錢苷；丹皮酚；沒食子酸；芍藥苷

Comparison Study on the Components of Liuwei Dihuang Decoction and Single Ingredient Mixture

Hu Yefang， Lin Ling， Yi Chunxia， Yan Jian， Li Jian

（Pharmacy Department， Guilin Hospital of Traditional Chinese Medicine， Guilin 541002， China）

AbstractObjective：To compare the content of the effective components in the mixture of Liuwei Dihuang Decoction and single ingredient mixture. Methods：The gradient elution was carried out by using high performance liquid chromatography with acetonitrile phosphoric acid aqueous solution as mobile phase. The flow rate was 10 mL/min and the detection wave length was 238 nm. Quantitative analysis of changes in the content of two kinds of solution of known active ingredients loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin. Results：The 3 batch of Liuwei Dihuang Decoction， loganin， paeonol， gallic acid， and paeoniflorin content was significantly higher than that of the single component content of the same batch of granules in a mixed solution， respectively， for the 3 batch of single granule 145， 136， 143 times. Conclusion The traditional Chinese medicine Liuwei Dihuang Decoction mixture of single ingredient is lower than the effective ingredient content of Liuwei Dihuang Decoction， with significant differences. This study provides a scientific basis for the clinical application of traditional Chinese medicine decoction and single granule.

Key WordsLiuwei Dihuang Decoction； Single ingredient granules； Mixed liquor； HPLC； Loganin； Paeonol； Gallic acid； Paeoniflorin

中圖分類號：R2895文獻標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.048

湯劑是中醫(yī)治療疾病的主要劑型之一，以其隨證加減、組方靈活、吸收快的優(yōu)點，從古到今深受廣大患者的歡迎[12]。但因調(diào)配、煎煮、攜帶的不方便使其發(fā)展受到一定的影響。單味中藥顆粒劑的出現(xiàn)是對中藥飲片改革的一種嘗試，但中藥顆粒劑是否符合中醫(yī)辨治的需要，其與湯劑在化學(xué)組分及臨床療效方面是否一致，目前尚未得到肯定[3]。中藥六味地黃湯出自宋代名醫(yī)錢乙《小兒藥證直訣》是治療肝腎陰虛的經(jīng)典方，由熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六味藥組成，臨床常用于滋陰補腎，用于治療頭暈耳鳴，腰膝酸軟，遺精盜汗等癥[45]。中醫(yī)認為腎精滋養(yǎng)髓海，腎精虧容易導(dǎo)致腦髓失養(yǎng)神智失常，肺腎金水相生，一為氣之主，一為氣之根，故六味地黃湯可以用于肝腎不足的神經(jīng)精神疾病。本課題采用高效液相色譜法（HPLC）分析方法擬對傳統(tǒng)方劑六味地黃湯、單味顆粒劑混合液的指標(biāo)性成分進行分析，探討指標(biāo)性成分的含量變化。現(xiàn)報道如下。

1儀器與試藥

11儀器

高效液相色譜儀（1260 Agilent）；十萬分之一電子天平（AB265S，梅特勒托利多儀器有限公司）；萬分之一電子天平（ALB224，梅特勒托利多儀器有限公司）。

12試劑

對照品馬錢苷（111640201502）、丹皮酚（110708201506）、沒食子酸（110831201405）、芍藥苷（110736201509）均購買于中國食品藥品檢定研究院。

乙腈為色譜純（美國Fisher公司）；磷酸（北京化工廠）；純化水（杭州哇哈哈有限公司）。

13分析樣品

熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六種藥材均購買于廣州致信藥業(yè)有限公司，并經(jīng)桂林市中醫(yī)院藥劑科老師鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

21色譜條件

流動相：乙腈（A）～01%磷酸水溶液（B）梯度洗脫（0～5 min，5%A；5～15 min，5%A→15%A；15～20 min，15%A；20～45 min，15%A→45%A；45～50 min，45%A；50～55 min，45%A→100%A；55～60 min，100%A）流速：10 mL/min；波長：238 nm；柱溫35 ℃；進樣量：10 μL。

22對照品溶液的制備

分別精密吸取對照品馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷適量至10 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，制得馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷濃度分別為0205 mg/ mL、0045 2 mg/ mL、0142 8 mg/ mL、0131 2 mg/ mL的混合對照品溶液。

23供試品溶液的制備

湯劑制備：取熟地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮六種藥材按配方比例（24∶12∶12∶9∶9∶9）煎煮3次，8倍溶媒量，首次煎煮60 min，第2，3次煎煮30 min，合并水煎液，濃縮至250 mL，精密量取25 mL溶液，至50 mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得[6]。

24配方顆粒溶液制備本研究所需配方顆粒嚴格按照生產(chǎn)工藝進行生產(chǎn)，經(jīng)水煎、提取、濃縮、干燥、制粒，成品備用，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)量的配方顆粒加入一定量水溶解，制得單味顆粒劑混合液，量取25 mL按照上述方法處理，即得單味顆粒劑混合液供試液[7]。

25專屬性試驗取六味地黃藥材，按供試品溶液制備的方法制備不含熟地黃、山茱萸和牡丹皮的陰性對照品溶液，按以上色譜的條件得樣品、對照品以及陰性對照品比較，結(jié)果顯示，無其他成分干擾目標(biāo)成分的測定。

26線性關(guān)系考察

分別精密取混合對照品溶液2、4、8、10、15、20 μL，按21項下色譜條件進行測定，以馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷對照品峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為Y=1 7235X～125（r=0999 8，線性范圍為041～410 μg）、Y=1 6217X～125（r=0999 7，線性范圍為0090 4～0904 μg）、Y=1 5437X～125（r=0999 7，線性范圍為0285 6～2856 0 μg）、Y=1 4787X～125（r=0999 7，線性范圍為0264～264 μg）。

27中間精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄4種對照品的峰面積，并計算RSD值，結(jié)果顯示馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷4種對照品RSD值分別為05%、032%、048%、056%，均小于10%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

28供試品溶液穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定，記錄馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷4種成分峰面積，并計算RSD值分別為072%、067%、023%、065%，結(jié)果顯示供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

29重復(fù)性試驗

精密吸取六味地黃湯樣品溶液6份，按222項下方法制備供試品溶液，按21項下色譜條件進行測定，記錄并計算馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷4種成分含量及RSD值，結(jié)果顯示4種成分含量分別為0328、0056、0132 3、0248 mg/g，RSD值分別為058%、067%、028%、045%均小于10%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

210回收率試驗

精密吸取六味地黃湯樣品溶液6份置100 mL容量瓶中，分別加入制備好的混合對照品溶液（馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷濃度分別為0205 mg/mL、00452 mg/mL、0142 8 mg/mL、0131 2 mg/mL）3 mL，按222項下方法制備供試品溶液，計算4種對照品回收率及RSD值。結(jié)果顯示，4種對照品加樣回收率分別為：122%、144%、021%、053%。結(jié)果表明，該方法可行。見表1。

211樣品測定結(jié)果

分別取3批傳統(tǒng)六味地黃湯樣品溶液及配方顆粒樣品溶液，按222項下方法制備供試品溶液，按21項下色譜條件進行測定，測定4種對照品馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷峰面積，并計算含量，結(jié)果3批六味地黃傳統(tǒng)湯劑種馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。見表2。

3討論

六味地黃方劑味傳統(tǒng)滋補肝腎藥方，其方劑中主要由山茱萸、澤瀉、熟地黃、山藥、茯苓和牡丹皮等6味藥材組成[811]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，該方具有增強免疫力、抗氧化、降血脂、抑制腫瘤擴散等功效[1216]。臨床上多用于治療慢性前列腺炎、腎病、高血壓、女性更年期綜合征等疾病[1722]。隨著中藥劑型的不斷改變，新劑型、新技術(shù)的不斷改進，六味地黃制劑已呈現(xiàn)多樣化，但傳統(tǒng)湯劑有很多不足，如攜帶不便、貯存不便、飲用不便，配方顆粒的出現(xiàn)，避免了上述的不足，但配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑的指標(biāo)性成分的含量還存在差異性。

本研究制備六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液所需藥材均為相同批次中藥飲片制備而成，且單味顆粒需要量均由湯劑混合液藥材折算而成，綜合以上兩點，該試驗結(jié)果更具客觀性、真實性、可比性。本研究建立了同時測定馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷4種有效成分的含量測定方法，經(jīng)方法學(xué)考察顯示該方法穩(wěn)定、可行。

本研究采用HPLC測定六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液中4種有效成分馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷的含量，結(jié)果顯示六味地黃傳統(tǒng)湯劑中4種有效成分的含量明顯高于同批的單味顆粒劑混合液中成分的含量，且分別為3批單味顆粒的145、136、143倍。分析其原因，2種樣品中的物質(zhì)基礎(chǔ)成分存在一定的差異性，2種樣品在制備過程中，因其制備工藝不同，以及樣品單煎、共煎的差異性；單味顆粒在制備過程中，增加了噴霧干燥這一過程，可能導(dǎo)致有效成分的含量存在較大的差異。本研究為臨床配方顆粒的應(yīng)用提供了依據(jù)。但該研究只是針對馬錢苷、丹皮酚、沒食子酸、芍藥苷4種有效成分的含量的差異性進行了測定，六味地黃湯中成分復(fù)雜，其他成分是否存在差異性有待進一步研究，另外，該4種有效成分的差異性能否導(dǎo)致藥效變化還有待進一步研究。為此六味地黃湯劑與單味顆粒劑混合液的等效性還需要進行更多、更深入的研究。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版.一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：X98.

[2]曾常青，曾宇，趙越，等.六味地黃湯中4種有效成分的含量測定[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（8）：10341036.

[3]譚家華，羅君，賀祝英，等.不同煎煮方法對六味地黃湯浸出物及主成分含量的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（11）：8587.

[4]王杰，劉冰，周軍，等.六味地黃配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中6種有效成分的比較研究[J].中草藥，2015，46（19）：28872891.

[5]羅云，郝偉偉，王潔，等.高效液相色譜法測定六味地黃濃縮丸特征圖譜及4種主要成分的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（10）：748751.

[6]王靈霞，朱東亮，柴逸峰.高效液相色譜法同時測定3種不同劑型六味地黃丸中4種成分的含量[J].藥學(xué)實踐雜志，2013，31（4）：296299.

[7]郭小紅，樊敏，魏春婉，等.紫外分光光度法測定六味地黃丸中丹皮酚的含量[J].甘肅醫(yī)藥，2012，31（4）：304306.

[8]崔景朝，趙自明.中藥配方顆粒研究進展（Ⅱ）——中藥單煎與合煎對比研究概況[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，19（4）：240245.

[9]鄧振雪，趙金鹿，胡容峰，等.RPHPLC法同時測定六味地黃滲透泵片中沒食子酸等7種活性成分的含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2013，30（9）：686690，700.

[10]賈瑞艷，劉影.HPLC法測定六味地黃丸（濃縮丸）中丹皮酚的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2009，22（2）：120122.

[11]宋曉，孫曉慧，李珂.HPLC測定不同廠家六味地黃丸中丹皮酚的含量[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，35（3）：200202.

[12]汪安，程桂林，單永洋，等.用原子吸收分光光度法測定六味地黃丸中銅、鉛含量的效果觀察[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12（18）：6162.

[13]邱伊星.六味地黃丸及其相關(guān)制劑的指紋圖譜質(zhì)量控制方法研究[D].長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2016.

[14]丘婷.六味地黃生物制劑片劑成型工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].廣州：廣東藥學(xué)院，2013：174.

[15]羅云，郝偉偉，張婧，等.基于多指標(biāo)成分同時檢測的六味地黃濃縮丸溶出度測定[J].中國中藥雜志，2014，39（2）：240246.

[16]張競，王艷偉.六味地黃膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究[J].中國藥業(yè)，2016，25（2）：6163.

[17]林靜，樂卿清，謝榮偉.高效液相色譜法測定六味地黃丸（濃縮丸）中馬錢苷的含量[J].海峽藥學(xué)，2010，22（6）：9192.

[18]姜建萍，曹音，李建芳.六味地黃丸含量測定方法研究進展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，16（6）：136138.

[20]劉志輝.2005年版《中國藥典》中六味地黃丸與六味地黃顆粒定量標(biāo)準(zhǔn)商榷[J].中國藥房，2005，16（22）：17561757.

[21]吳冰.數(shù)字化色譜指紋譜技術(shù)在六味地黃滴丸藥材鑒定中的應(yīng)用效果評價[J].醫(yī)藥前沿，2015，5（34）：362362.

[22]郭泉，胡容峰，高松，等.六味地黃制劑的研究現(xiàn)狀與中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐，2014，28（4）：7881.

（2017-07-26收稿責(zé)任編輯：楊覺雄）