原子吸收分光光度法測定藏藥二十五味珊瑚丸中5種重金屬含量

劉蘭 張勇倉 鐘鏵 次仁久米 王聚樂

中圖分類號 R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）07-0973-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.26

摘 要 目的：建立測定藏藥二十五味珊瑚丸中5種重金屬含量的方法，并考察西藏不同地區(qū)5個廠家生產(chǎn)的該藥品中重金屬含量情況。方法：以濃硝酸-高氯酸（4 ∶ 1，V/V）消解二十五味珊瑚丸樣品，采用火焰原子吸收分光光度法測定其中銅（Cu）、鉛（Pb）、鎘（Cd）3種重金屬元素的含量，氫化物發(fā)生原子吸收分光光度法測定其中砷（As）、汞（Hg）2種重金屬元素的含量。結(jié)果：5種重金屬元素含量檢測在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好（r均≥0.999 1）；Cu、Pb、Cd元素的檢測限分別為0.001 6、0.041 2、0.036 3 mg/L，定量限分別為0.005 3、0.137 3、0.121 0 mg/L；As、Hg元素的檢測限分別為0.325 7、0.692 3 μg/L，定量限分別為1.085 7、2.307 7 μg/L；精密度試驗的RSD均≤5.54%（n=6）；穩(wěn)定性試驗的RSD均≤3.79%；重復(fù)性試驗的RSD均≤3.72%；平均加樣回收率為91.34%～110.11%，RSD為0.66%～6.80%（n=6）。含量測定結(jié)果顯示，5個廠家的樣品中Cu含量皆未超標(biāo)，但 Cd、Hg含量均超標(biāo)；其中還有4個廠家樣品中Pb含量超標(biāo)，2個廠家樣品中As含量超標(biāo)。結(jié)論：建立的含量測定方法的準(zhǔn)確度、靈敏度較高，且穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，適用于二十五味珊瑚丸中5種重金屬含量的測定；5個廠家生產(chǎn)樣品均在一定程度上存在重金屬超標(biāo)問題。

關(guān)鍵詞 火焰原子吸收分光光度法；氫化物發(fā)生原子吸收分光光度法；二十五味珊瑚丸；重金屬；含量測定

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the contents determination of 5 heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills，and to investigate the contents of heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills produced by 5 manufacturers from different districts of Tibet. METHODS： Ershiwuwei shanhu pills were digested by HNO3-HClO4 （4 ∶ 1，V/V）. The contents of 3 heavy metals as Cu， Pb， Cd in samples were measured by flame atomic absorption spectrometry （FAAS）. The contents of 2 heavy metals as As，Hg in samples were measured by hydride generation atomic absorption spectrometry （HG-AAS）. RESULTS： 5 kinds of heavy metals have good linear relationship in the corresponding mass concentration range （all r≥0.999 1）. The limits of detection of Cu， Pb， Cd were 0.001 6， 0.041 2， 0.036 3 mg/L， and the limits of quantitation were 0.005 3， 0.137 3， 0.121 0 mg/L； the limits of detection of As， Hg were 0.325 7， 0.692 3 μg/L， and the limits of quantitation were 1.085 7， 2.307 7 μg/L. RSDs of precision tests were ≤5.54%（n=6）； RSDs of stability tests were all≤3.79%； RSDs of reproducibility tests were ≤3.72%. The average recovery rates were 91.34%-110.11% （RSDs were 0.66%-6.80%，n=6）. Results of contents determination showed that the contents of Cu in samples from 5 manufacturers were not out of limits， but the contents of Cd and Hg were all out of limits； the contents of Pb in samples from 4 manufacturers were out of limits， and the contents of As in samples from 2 manufacturers were out of limits. CONCLUSIONS： The established method has good accuracy， sensitivity， stability and reproducibility， and it is suitable for contents determination of 5 heavy metals in Ershiwuwei shanhu pills. To some extent，there is a problem of excessive heavy metals in samples from 5 manufacturers.

KEYWORDS Flame atomic absorption spectrometry； Hydride generation atomic absorption spectrometry； Ershiwuwei shanhu pills； Heavy metals； Content determination

二十五味珊瑚丸是由人工麝香、珊瑚、珍珠母、廣木香、紅花、朱砂、榜那等25味藥材組成的復(fù)方制劑[1]，在1997年被原衛(wèi)生部批準(zhǔn)為國家中藥保護品種[2]，主要用于白脈?。瓷窠?jīng)系統(tǒng)疾?。┑闹委?，有清熱定驚、開竅、通絡(luò)、止痛等功效[3-4]，現(xiàn)收載于2015年版《中國藥典》（一部）中[5]。該藥中的朱砂、青金石、爐甘石、磁石、禹糧土等10味礦物藥是其重要組成部分[6-7]，其中不乏重金屬元素。由于藏藥療程較長的特點，可能導(dǎo)致重金屬在體內(nèi)蓄積中毒，故而為該藥的使用帶來了較大的風(fēng)險，極大地影響了該藥的臨床應(yīng)用[8-9]。銅（Cu）、鉛（Pb）、鎘（Cd）、砷（As）、汞（Hg）等重金屬嚴(yán)重影響人體健康[10]，國際和國內(nèi)都對其提出了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)[11]。目前，對二十五味珊瑚丸中重金屬含量的報道極少，僅有少量關(guān)于其中Hg含量的報道[12-13]，且2015年版《中國藥典》（一部）收載的二十五味珊瑚丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下并未對其重金屬含量進行檢查。鑒于此，筆者采用火焰原子吸收分光光度法對西藏不同地區(qū)5個廠家生產(chǎn)的二十五味珊瑚丸中Cu、Pb、Cd 3種重金屬元素的含量進行分析，并利用氫化物發(fā)生原子吸收分光光度法對其中As、Hg 2種重金屬元素的含量進行分析，為該藥的質(zhì)量控制提供一定的試驗依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

AA-7000型原子吸收分光光度計與Cu、Pb、Cd、As、Hg空心陰極燈（北京東西分析儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

二十五味珊瑚丸為分別購自西藏拉薩市某藏藥A廠（批號：15084A，規(guī)格：1 g/丸）、西藏拉薩市某藏藥B廠（批號：150201，規(guī)格：1 g/丸）、西藏山南市某藏藥C廠（批號：150401-180，規(guī)格：1 g/丸）、西藏日喀則市某藏藥D廠（批號：150401，規(guī)格：0.25 g/丸）、西藏昌都市某藏藥E廠（批號：140901，規(guī)格：0.25 g/丸）；Cu、Pb、Cd、As、Hg元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液（國家鋼鐵材料測試中心，批號分別為：GSB G 62024-90、GSB G 62071-90、GSB G 62040-90、GSB G 62028-90、GSB G 62069-90，質(zhì)量濃度均為1 000 mg/L）；濃硝酸、高氯酸等均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器工作條件

采用火焰原子吸收分光光度法測定Cu、Pb、Cd含量，儀器工作條件見表1。采用氫化物發(fā)生原子吸收分光光度法測定As、Hg含量，儀器工作條件見表2。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 將二十五味珊瑚丸用研缽研成粉末，干燥，準(zhǔn)確稱取干粉 1.0 g于 100 mL錐形瓶中，加入15 mL混合酸液（HNO3與HClO4體積比為4 ∶ 1），輕輕振搖使混合酸液面浸沒樣品，靜置48 h。置電爐上加熱消解至溶液澄明后，繼續(xù)加熱消解至冒濃白煙，直至白煙散盡，消解液呈微黃色，放冷，轉(zhuǎn)入50 mL量瓶中，用 2%HNO3溶液洗滌錐形瓶3次，洗液合并于量瓶中， 2%HNO3溶液定容，搖勻，即得。

2.2.2 空白溶液的制備 不加二十五味珊瑚丸粉末樣品，其余方法同“2.2.1”項下，制備缺藥品的空白溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 分別取“1.2”項下Cu、Pb、Cd、As、Hg元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 mg/L）適量，用2%HNO3為溶劑制備系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液：Cu為0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.00 00 mg/L，Pb為0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0 mg/L，Cd為0.0312 5、0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0 mg/L，As為6.250 0、12.500 0、25.000 0、50.000 0、100.000 0 μg/L，Hg為6.250 0、12.500 0、25.000 0、50.000 0、100.000 0 μg/L。

2.3 線性關(guān)系考察

分別量取“2.2.3”項下各元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，參考2015年版《中國藥典》（四部）通則0406第一法測定[14]，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）作圖，求出回歸方程。結(jié)果顯示，5種重金屬元素檢測在相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好（r均≥0.999 1），5種重金屬元素的線性范圍測定結(jié)果見表3。

2.4 檢測限與定量限考察

對空白溶液進行20次測定，記錄其吸光度的標(biāo)準(zhǔn)偏差δ，S為工作曲線的斜率，以3 δ/S為檢測限，10 δ/S為定量限。結(jié)果表明，Cu、Pb、Cd元素的檢測限分別為0.001 6、0.041 2、0.036 3 mg/L，As、Hg元素的檢測限分別為0.325 7、0.692 3 μg/L；Cu、Pb、Cd元素的定量限為0.005 3、0.137 3、0.121 0 mg/L，As、Hg元素的定量限分別為1.085 7、2.307 7 μg/L。

2.5 精密度考察

取“2.2.3”項下各元素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（Cu、Pb、Cd、As、Hg溶液的質(zhì)量濃度分別為5.000 0 mg/L、10.000 0 mg/L、0.500 0 mg/L、100.000 0 μg/L、100.000 0 μg/L）適量，然后按“2.1”項下儀器工作條件進樣測定，平行測定6次。結(jié)果，Cu、Pb、Cd、As、Hg含量的RSD分別為0.78%、0.03%、0.56%、5.54%、3.29%（n=6）。結(jié)果表明，方法精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性考察

取“2.2.1”項下供試品溶液（樣品來源于C廠）適量，室溫下分別放置 0、2、4、8、12 h，然后按“2.1”項下儀器工作條件進樣測定。結(jié)果，Cu、Pb、Cd、As、Hg含量檢測的RSD分別為0.70%、0.31%、0.88%、3.79%、3.68%（n=5）。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫下放置 12 h較為穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性考察

精密稱取同一批樣品（來源于C廠）適量，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，共6份，分別按“2.1”項下儀器工作條件進樣測定。結(jié)果，Cu、Pb、Cd、As、Hg的平均含量分別為 8.264 2、2.086 7、3.196 9、0.412 4、1.415 1 mg/kg，RSD分別為1.40%、0.72%、1.39%、3.72%、3.27%（n=6）。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度考察

取已知重金屬含量的樣品粉末（來源于C廠）約0.3 g，共6份，再分別加入已知含量的Cu、Pb、Cd、As、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，分別按“2.1”項下儀器工作條件進樣測定。結(jié)果，5種重金屬元素的平均加樣回收率為91.34%～110.11%（RSD為0.66%～6.80%）。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度較高，結(jié)果見表4。

2.9 樣品含量測定

取5個廠家樣品，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.1”項下儀器工作條件進樣測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算二十五味珊瑚丸中5種重金屬的含量。結(jié)果，不同廠家樣品中重金屬含量差異較大，Cu元素的含量范圍為8.208 1～10.294 0 mg/kg，Pb元素的含量范圍為2.027 5～18.720 3 mg/kg，Cd元素含量范圍為2.879 9～3.654 9 mg/kg，As元素的含量為0.319 8～12.325 4 mg/kg，Hg元素含量為0.717 1～4.974 2 mg/kg，結(jié)果見表5。

3 討論

參照我國《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》中重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)[15]：Cu元素含量應(yīng)≤20.0 mg/kg，Pb元素含量應(yīng)≤5.0 mg/kg，Cd元素含量應(yīng)≤0.3 mg/kg，As元素含量應(yīng)≤2.0 mg/kg，Hg元素含量應(yīng)≤0.2 mg/kg。本研究結(jié)果顯示，5個廠家的樣品中Cu含量均未超出限量，Cd、Hg含量均超出了限量，5個廠家中僅有C廠生產(chǎn)的樣品中Pb含量未超出限量，A、E 2個廠家生產(chǎn)的樣品中As含量均超出了限量。

由于二十五味珊瑚丸樣品在制備成溶液后，其中的Cu、Pb和Cd元素在乙炔-空氣產(chǎn)生的火焰中可以有效地被原子化，產(chǎn)生理想的檢測信號，加之火焰原子吸收法具有重現(xiàn)性好、分析速度快、操作簡便等優(yōu)點，所以筆者采用空氣-乙炔火焰原子吸收分光光度法測定樣品中的Cu、Pb和Cd含量。參考2015年版《中國藥典》（四部）通則0406第一法[14]，樣品溶液中的As和Hg元素在酸性介質(zhì)中被還原成低沸點、易分解的氫化物或者蒸氣，然后在吸收池中被原子化，再進行原子吸收信號的檢測，可以得到較準(zhǔn)確的結(jié)果，所以本研究采用氫化物發(fā)生原子吸收分光光度法測定樣品中As和Hg元素含量。

二十五味珊瑚丸生產(chǎn)廠家眾多，為較全面地反映其中重金屬的含量情況，筆者選擇西藏4個不同地區(qū)的5個廠家的產(chǎn)品作為檢測樣品。結(jié)果表明，5個廠家的產(chǎn)品都有一定程度的重金屬超標(biāo)問題。結(jié)合之前針對藏藥重金屬含量的一些研究[16]，發(fā)現(xiàn)二十五味珊瑚丸等藏藥的重金屬超標(biāo)問題已不容忽視。

綜上所述，本研究采用原子吸收分光光度法測定了二十五味珊瑚丸中Cu、Pb、Cd、As、Hg 5種重金屬元素的含量，方法準(zhǔn)確、可靠，結(jié)果可為二十五味珊瑚丸的質(zhì)量控制提供重要的試驗依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 德吉措姆，尼珍，阿萍，等. HPLC法測定藏藥二十五味珊瑚丸中烏頭堿限量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（2）：99- 101.

[ 2 ] 張宏宇.阿昔洛韋聯(lián)合二十五味珊瑚丸治療帶狀皰疹[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2012，11（1）：44-45.

[ 3 ] 杜文兵，黃福開，羅遠(yuǎn)帶，等.二十五味珊瑚丸藥理及臨床研究進展[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，8（5）：132-134.

[ 4 ] 焦艷，姚博，周琪，等.二十五味珊瑚膠囊對繼發(fā)性脊髓損傷中腺苷的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22（28）：3090-3092.

[ 5 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：434-435.

[ 6 ] 李敏，華樺，趙軍寧，等.二十五味珊瑚丸大鼠長期毒性試驗銅、汞、鉛體內(nèi)分布研究[J].中藥藥理與臨床，2010，26（5）：537-540.

[ 7 ] 劉蘭，扎西瓊達(dá)，大邊巴，等.藏藥二十五味珊瑚丸中微量元素銅鐵含量分析[J].微量元素與健康研究，2015，32（2）：32-33.

[ 8 ] 毛萌，任小巧，楊秀巖，等.藏藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀及其研究對策[J].中醫(yī)雜志，2015，56（8）：640-644.

[ 9 ] 藍(lán)元華，黃敏，何進.引重金屬入藥是否會限制藏藥的發(fā)展[J].西藏醫(yī)藥，2008，29（2）：53-54.

[10] 袁迎. 3種中藥重金屬成分鉛、鎘的含量分析[J].中國藥房，2007，18（6）：447-448.

[11] 徐萬幫，肖鈞，蔣忠軍，等.香砂六君丸有害元素檢測與限度評估[J].時珍國醫(yī)國藥，2013，24（9）：2281-2283.

[12] 陳燕，易進海，劉玉紅，等.二十五味珊瑚丸中酯型生物堿和硫化汞的含量測定[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2010，16（3）：44-47.

[13] 劉鳳玲，李子璇，聶麗娟，等.藏藥二十五味珊瑚丸中馬兜鈴酸A 及汞鹽等重金屬含量測定[J].西藏大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2015，30（2）：65-70.

[14] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：42.

[15] 商務(wù)部.藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005：1.

[16] 張勇倉，劉蘭，達(dá)娃，等.原子吸收分光光度法測定回生甘露丸中重金屬[J].中成藥，2016，38（2）：329-331.

（收稿日期：2017-09-05 修回日期：2017-11-28）

（編輯：林 靜）