姜黃素對(duì)體內(nèi)外骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響及其機(jī)制研究

顏泉

中圖分類號(hào) R738.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）07-0918-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.13

摘 要 目的：研究姜黃素對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響及其機(jī)制。方法：體外細(xì)胞試驗(yàn)分為對(duì)照組（二甲基亞砜），姜黃素低、中、高濃度組（10、20、40 ?mol/L），姜黃素高濃度+內(nèi)源性微小核糖核酸-21模擬物（agomiR-21）組和姜黃素高濃度+agomiR-21陰性對(duì)照（NC）組，分別采用CCK-8和Transwell小室法檢測(cè)各組人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS和MG-63的增殖[光密度（OD值）]和侵襲能力（穿膜細(xì)胞數(shù)），分別采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法和Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-21及其靶基因PDCD4蛋白的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將MG-63細(xì)胞接種至小鼠體內(nèi)，然后將小鼠分為空白對(duì)照組（生理鹽水）、姜黃素組（20 mg/kg）、姜黃素+agomiR-21 NC組（20 mg/kg姜黃素溶液+50 mg/kg agomiR-21 NC溶液）、姜黃素+agomiR-21組（20 mg/kg姜黃素溶液+50 mg/kg agomiR-21溶液），每組8只，分別于瘤內(nèi)注射相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)給藥7 d。測(cè)量給藥后20 d內(nèi)的腫瘤體積變化，檢測(cè)第20天瘤組織中miR-21和PDCD4蛋白的表達(dá)。結(jié)果：與對(duì)照組比較，姜黃素低、中、高濃度組U-2OS、MG-63細(xì)胞的OD值和穿膜細(xì)胞數(shù)均明顯減?。≒<0.05或P<0.01）；其中姜黃素中、高濃度組U-2OS、MG-63細(xì)胞中miR-21的表達(dá)明顯減弱（P<0.05或P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）。與姜黃素高濃度+agomiR-21 NC組比較，姜黃素高濃度+agomiR-21組U-2OS、MG-63細(xì)胞的OD值和穿膜細(xì)胞數(shù)均明顯增加（P<0.01）。與空白對(duì)照組比較，姜黃素組和姜黃素+agomiR-21 NC組小鼠給藥5 d后腫瘤體積明顯減?。≒<0.05或P<0.01）；瘤組織中miR-21表達(dá)明顯減弱（P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）。與姜黃素+agomiR-21 NC組比較，姜黃素+agomiR-21組小鼠給藥5 d后腫瘤體積明顯增加（P<0.05或P<0.01）；瘤組織中miR-21表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯減弱（P<0.01）。結(jié)論：姜黃素可抑制人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS、MG-63的增殖和侵襲，其機(jī)制可能與下調(diào)miR-21表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 姜黃素；微小核糖核酸-21；骨肉瘤細(xì)胞；增殖；侵襲；體內(nèi)；體外

ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the effects of curcumin on proliferation and invasion of osteosarcoma cells and its mechanism. METHODS： In in vitro cell assay， osteosarcoma cells were divided into control group（dimethyl sulfoxide）， curcumin low-concentration， medium-concentration and high-concentration groups （10， 20， 40 ?mol/L） and curcumin high-concentration+endogenous miR-21 simulacrum （agomiR-21） group， curcumin high-concentration+agomiR-21 negative control （NC） group. The proliferation （OD value） and invasion ability （transmembrane cells number） of human osteosarcoma cells U-2OS and MG-63 were detected by CCK-8 and Transwell chamber method； the expression of miR-21 and its target gene PDCD4 protein were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot assay. In in vivo cell assay， MG-63 cells were inoculated in mice， and the mice were divided into blank control group （normal saline）， curcumin group （20 mg/kg）， curcumin+agomiR-21 NC group （20 mg/kg curcumin solution+50 mg/kg agomiR-21 NC solution）， curcumin+agomiR-21 group （20 mg/kg curcumin solution+50 mg/kg agomiR-21 solution） with 8 mice in each group； they were given intratumoral injection of relevant medicine once a day， for consecutive 7 d. The volume changes of the tumor were measured within 20 d after medication， and the expression of miR-21 and PDCD4 protein in tumor tissue were detected on 20th day. RESULTS： Compared with control group， the OD value and transmembrane cells number of U-2OS and MG-63 cells were decreased significantly in curcumin low-concentration， medium-concentration and high-concentration groups （P<0.05 or P<0.01）；the expression of miR-21 was weakened significantly in curcumin medium-concentration and high-concentration groups of U-2OS and MG-63 cells （P<0.05 or P<0.01）， while the expression of PDCD4 protein was strengthened significantly （P<0.01）. Compared with curcumin high-concentration+agomiR-21 NC group， the OD value and transmembrane cells number of U-2OS and MG-63 cells were strengthened significantly in curcumin high-concentration+agomiR-21 group （P<0.01）. Compared with blank control group， the tumor volume of mice were decreased significantly in curcumin group and curcumin+agomiR-21 NC group （P<0.05 or P<0.01）. The expression of miR-21 was decreased significantly in tumor tissue （P<0.01）， while the protein expression of PDCD4 was strengthened significantly （P<0.01）. Compared with curcumin+agomiR-21 NC group， the tumor volume of mice were increased significantly in curcumin+agomiR-21 group （P<0.05 or P<0.01）. The expression of miR-21 in tumor tissue were strengthened significantly （P<0.01）， while the expression of PDCD4 protein were weakened significantly （P<0.01）. CONCLUSIONS： Curcumin can inhibit the proliferation and invasion of human osteosarcoma cells U-2OS and MG-63， the mechanism of which may be associated with down-regulating the expression of miR-21.

KEYWORDS Curcumin； miR-21； Osteosarcoma cell； Proliferation； Invasion； in vivo； in vitro

骨肉瘤（Osteosarcoma）是最常見的原發(fā)于骨組織的惡性腫瘤，其惡性程度高、易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。目前骨肉瘤的治療方法依然是以手術(shù)為主，化療、放射治療為輔，但手術(shù)后局部腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和多重耐藥性等因素嚴(yán)重影響了術(shù)后預(yù)后。因此，深入研究骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，探索新的、有效的治療藥物及骨肉瘤生物治療新的分子靶點(diǎn)，對(duì)改善骨肉瘤治療現(xiàn)狀有重要意義。

姜黃素（Curcumin）是從姜科植物姜黃的根莖中提取得到的一種酚性色素，是姜黃的主要有效成份之一，具有多方面的藥理作用，如抗炎、抗氧化、降脂、抗病毒、清除自由基及抗腫瘤等，其作為一種具有良好開發(fā)前景的抗腫瘤藥已日益引起人們的重視，成為當(dāng)今科研的熱點(diǎn)[1]。已有研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可通過多種通路抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、改變細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[2-3]，但其具體作用機(jī)制仍不清楚。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一類非編碼RNA，長(zhǎng)度約為19～25 bp。miRNA參與調(diào)控個(gè)體發(fā)育和細(xì)胞凋亡、增殖及分化等生命活動(dòng)，與機(jī)體多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在人類腫瘤中存在表達(dá)異常，發(fā)揮了促癌基因或者抑癌基因的功能[4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-21（miR-21）在多種腫瘤中表達(dá)異常，其通過調(diào)控多個(gè)腫瘤相關(guān)基因，如人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因（PTEN）、程序性細(xì)胞凋亡因子4（PDCD4）、自殺相關(guān)因子配體（FasL）、超氧化物歧化酶3（SOD3）、B淋巴細(xì)胞瘤2（Bcl-2）等[5-8]，發(fā)揮重要的促癌作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，miR-21在骨肉瘤中表達(dá)顯著升高，與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[9]，有望成為骨肉瘤治療的重要靶點(diǎn)?；诖耍P者研究了姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響，及其與miR-21的關(guān)系，為闡明姜黃素在骨肉瘤中的抗癌機(jī)制提供重要的試驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)一步為骨肉瘤的抗癌治療提供新的靶標(biāo)。

1 材料

1.1 儀器

H1MF型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）；Ⅸ80型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）；7500型熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）儀（美國(guó)ABI公司）；ChemiDoc Touch型蛋白印跡檢測(cè)分析儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 藥品與試劑

姜黃素原料藥（批號(hào)：MFCD00008365，純度：94%）、二甲基亞砜（DMSO，批號(hào)：D2650，純度：99%）均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；內(nèi)源性miR-21模擬物（agomiR-21，批號(hào)：B06001，純度：99%）和agomiR-21陰性對(duì)照（agomiR-21 NC，批號(hào)：B04008，純度：99%）均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清（美國(guó)Gibco公司）；CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑 （日本Dojindo公司）；Transwell小室（美國(guó)Millpore公司）；Trizol總RNA提取試劑（美國(guó)Invitrogen公司）；RIPA細(xì)胞裂解液、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；miRNA qRT-PCR檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Gene Copoeia公司）；兔抗人PDCD4多克隆抗體（美國(guó)Abcam公司）；兔抗人β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）多克隆抗體（美國(guó)CST公司）；辣根過氧化物（HRP）酶標(biāo)記山羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.3 細(xì)胞

人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS和MG-63均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫，由瀘州市人民醫(yī)院骨科室保存。

1.4 動(dòng)物

SPF級(jí)重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）小鼠32只，♂，體質(zhì)量18～22 g，6～8周齡，均購(gòu)自瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（川）2013-065。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組

U-2OS、MG-63細(xì)胞采用含10%胎牛血清、100 u/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于5%CO2、37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。體外細(xì)胞試驗(yàn)分為對(duì)照組（DMSO），姜黃素低、中、高濃度組（10、20、40 ?mol/L，即4、8、16 mg/L），姜黃素高濃度+agomiR-21 NC組和姜黃素高濃度+agomiR- 21組。

2.2 荷瘤小鼠模型建立與分組

將0.2 mL（約1×106個(gè)）MG-63細(xì)胞懸液皮下注射于SCID小鼠的左后肢，每天觀察小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)情況并記錄。待小鼠皮下腫瘤結(jié)節(jié)體積約為100 mm3時(shí)，即表明骨肉瘤荷瘤小鼠模型建立成功。將32只造模成功的小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（生理鹽水）、姜黃素組（20 mg/kg）、姜黃素+agomiR-21 NC組（20 mg/kg姜黃素溶液+50 mg/kg agomiR-21 NC溶液）、姜黃素+agomiR-21組（20 mg/kg姜黃素溶液+50 mg/kg agomiR-21溶液），每組8只，分別于瘤內(nèi)注射相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)給藥7 d。自第1次給藥開始記時(shí)，每5天測(cè)量腫瘤大小1次，共測(cè)量4次，于第20天結(jié)束測(cè)量。頸椎脫位法處死小鼠，切取腫瘤，測(cè)量，按公式計(jì)算腫瘤體積，腫瘤體積=（W2×L）×1/2，式中，W為腫瘤最寬部分長(zhǎng)度，L為腫瘤最長(zhǎng)部分長(zhǎng)度。

2.3 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力

2.3.1 姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U-2OS、MG-63細(xì)胞，分別以1×104 個(gè)/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)12 h后，按“2.1”項(xiàng)下對(duì)照組和姜黃素低、中、高濃度組加藥，每組3個(gè)復(fù)孔，作用12、24、48 h后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，37 ℃孵育2 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定細(xì)胞的光密度（OD）值，OD值越大表示細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。

2.3.2 過表達(dá)miR-21對(duì)姜黃素抑制人骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期U-2OS、MG-63細(xì)胞，分別以1×104 個(gè)/孔接種于96孔板中，培養(yǎng)12 h后，按“2.1”項(xiàng)下對(duì)照組、姜黃素高濃度+agomiR-21 NC組、姜黃素高濃度+ agomiR-21組加藥，每組3個(gè)復(fù)孔，作用48 h后，每孔加入10 μL CCK-8試劑，37 ℃孵育2 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定細(xì)胞的OD值。

2.4 Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力

取U-2OS、MG-63細(xì)胞，按“2.1”項(xiàng)下分組加藥，作用24 h后，將各組細(xì)胞分別接種于底膜基質(zhì)膠預(yù)鋪的24孔板Transwell小室中，上室接種無血清培養(yǎng)基配制的細(xì)胞懸液200 ?L（約1×105個(gè)/孔），下室加入含10% 胎牛血清的培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)箱中孵育48 h，取出小室用棉簽擦去上室內(nèi)的基質(zhì)膠和細(xì)胞，4%多聚甲醛固定10～30 min后，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗細(xì)胞3次，再用0.1%結(jié)晶紫染色20 min，清水洗3次，于100倍顯微鏡下觀察細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)（呈紫紅色的細(xì)胞），隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)，取平均數(shù)，穿膜細(xì)胞數(shù)越多表示侵襲能力越強(qiáng)。

2.5 qRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中miR-21表達(dá)

取“2.3.1”項(xiàng)下處理24 h的U-2OS、MG-63細(xì)胞和“2.2”項(xiàng)下各組小鼠瘤組織，依據(jù)Trizol說明書提取總RNA，按照miRNA qRT-PCR檢測(cè)試劑盒說明書操作，將所得RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用qRT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中miR-21表達(dá)水平。所有引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，miR-21上游引物序列為：5′ -TAGTTATCAGACTGATGTTGA-3′ ，下游引物序列為：5′ - ACAACATCAGTCTTGATAACTA-3′ ，擴(kuò)增長(zhǎng)度為108 bp；snRNA U6（miRNA檢測(cè)內(nèi)參）上游引物序列為：5′ -CGCTTCGGCAGCACATATACTAA-3′ ，下游引物序列為：5′ -TATGGAACGCTTCACGAATTTGC-3′ ，擴(kuò)增長(zhǎng)度為120 bp。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共40循環(huán)。采用 2-ΔΔct相對(duì)定量法（目的基因ct值/內(nèi)參基因ct值）對(duì)miR-21表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量。

2.6 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中PDCD4蛋白表達(dá)

取“2.3.1”項(xiàng)下處理24 h的U-2OS、MG-63細(xì)胞和“2.2”項(xiàng)下各組小鼠瘤組織，經(jīng)RIPA裂解液裂解，提取蛋白，BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。取等量蛋白經(jīng)10%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，轉(zhuǎn)入聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，分別經(jīng)5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，置于一抗[兔抗人PDCD4、β-actin多克隆抗體（1 ∶ 1 000）]中4 ℃孵育過夜，然后置于二抗[HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（1 ∶ 10 000）]中室溫孵育2 h，將化學(xué)發(fā)光底物滴加至PVDF膜上，收集熒光信號(hào)，分析目的蛋白PDCD4與內(nèi)參蛋白β-actin的灰度值，以目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值的比值表示PDCD4蛋白表達(dá)水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲的影響

與對(duì)照組比較，姜黃素低、中、高濃度組U-2OS、MG-63細(xì)胞作用24、48 h的OD值均顯著減?。≒<0.05或P<0.01），作用48 h的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少（P<0.05或P<0.01）。表明姜黃素對(duì)U-2OS、MG-63細(xì)胞增殖和侵襲均有抑制作用。姜黃素對(duì)U-2OS、MG-63細(xì)胞增殖能力的影響結(jié)果見表1，侵襲能力的影響結(jié)果見表2。

3.2 過表達(dá)miR-21對(duì)姜黃素抑制人骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響

與對(duì)照組比較，姜黃素高濃度+agomiR-21 NC組U-2OS、MG-63細(xì)胞的OD值和穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減??；與姜黃素高劑量+agomiR-21 NC組比較，姜黃素高劑量+ agomiR-21組U-2OS、MG-63細(xì)胞的OD值和穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增加。表明人骨肉瘤細(xì)胞中加入姜黃素后，如果再加入agomiR-21使miR-21過表達(dá)會(huì)減弱姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲的抑制效果。過表達(dá)miR-21對(duì)姜黃素抑制U-2OS、MG-63細(xì)胞增殖和侵襲的影響見表3。

3.3 姜黃素對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞中miR-21和PDCD4蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，姜黃素中、高濃度組U-2OS、MG-63細(xì)胞中miR-21表達(dá)明顯減弱（P<0.05或P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）。姜黃素對(duì)U-2OS、MG-63細(xì)胞中miR-21和PDCD4蛋白表達(dá)的影響結(jié)果見表4。

3.4 姜黃素對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響

與空白對(duì)照組比較，姜黃素組和姜黃素+agomiR-21 NC組小鼠給藥5 d后腫瘤體積明顯減?。≒<0.05或P<0.01）；與姜黃素+agomiR-21 NC組比較，姜黃素+agomiR-21組小鼠給藥5 d后腫瘤體積明顯增加（P<0.05或P<0.01）。說明姜黃素能抑制小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，但是如果過表達(dá)miR-21就會(huì)減弱姜黃素對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。各組小鼠腫瘤體積的測(cè)定結(jié)果見表5。

3.5 姜黃素對(duì)小鼠瘤組織中miR-21和PDCD4蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，姜黃素組和姜黃素+agomiR- 21 NC組小鼠瘤組織中miR-21表達(dá)明顯減弱（P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）；與姜黃素+agomiR-21 NC組比較，姜黃素+agomiR-21組小鼠瘤組織中miR-21表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01），PDCD4蛋白表達(dá)明顯減弱（P<0.01）。各組小鼠瘤組織中miR-21和PDCD4蛋白表達(dá)的測(cè)定結(jié)果見表6。

4 討論

骨肉瘤是最常見的惡性骨腫瘤，致死率及致殘率極高。骨肉瘤的治療包括手術(shù)治療和化療，目前用于骨肉瘤治療的化療藥物主要有阿霉素、順鉑、甲氨蝶呤、異環(huán)磷酰胺4類[10]，但目前用于化療的藥物對(duì)骨肉瘤細(xì)胞和人體正常細(xì)胞均有明顯的殺傷作用，不良反應(yīng)較大，因此新的輔助化療藥物和化療策略的研究對(duì)骨肉瘤的治療意義重大。

姜黃素對(duì)多種腫瘤具有殺傷作用，如骨肉瘤、淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、腸癌、卵巢癌等[11]。由于姜黃素是從植物中提取的天然色素，對(duì)人體幾乎沒有副作用，因此可作為一種有潛力的高效低毒抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床。但由于姜黃素難溶于水，致使其口服生物利用度低，體內(nèi)半衰期很短，難以達(dá)到有效血藥濃度，限制了其應(yīng)用。因此，提高姜黃素生物利用度，深入闡明其藥理機(jī)制意義重大。

miRNA主要通過識(shí)別靶標(biāo)mRNA分子的3′ 端非翻譯區(qū)域（3′ -UTR）的特異性結(jié)合位點(diǎn)，通過與靶標(biāo)mRNA分子完全互補(bǔ)配對(duì)或部分配對(duì)來抑制mRNA轉(zhuǎn)錄后的翻譯。已有研究證實(shí)，PDCD4是miR-21的直接靶基因，是miR-21在多種腫瘤中發(fā)揮促癌作用的重要通路之一[5-8]。本研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以下調(diào)骨肉瘤細(xì)胞中miR-21的表達(dá)，從而減弱了miR-21對(duì)靶基因PDCD4的抑制作用，并抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，在骨肉瘤模型小鼠體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)姜黃素能通過下調(diào)miR-21而發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的抗腫瘤作用。本研究結(jié)果從表觀遺傳學(xué)調(diào)控方面證實(shí)了姜黃素可通過下調(diào)促癌基因miR-21的表達(dá)，上調(diào)PDCD4蛋白表達(dá)發(fā)揮抗骨肉瘤作用，這為證明姜黃素在骨肉瘤中的抗癌機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 張英，李冬梅，邢穎.姜黃素的藥理作用與載體研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2015，26（13）：1850-1852.

[ 2 ] KUNNUMAKKARA AB，BORDOLOI D，PADMAVATHI G，et al. Curcumin，the golden nutraceutical：multitargeting for multiple chronic diseases[J]. Br J Pharmacol，2017，174（11）：1325-1348.

[ 3 ] PANDA AK，CHAKRABORTY D，SARKAR I，et al. New insights into therapeutic activity and anticancer properties of curcumin[J]. J Exp Pharmacol，2017. DOI：10.2147/JEP.S70568.

[ 4 ] SCHICKEL R，BOYERINAS B，PARK SM，et al. Micro- RNAs：key players in the immune system，differentiation，tumorigenesis and cell death[J]. Oncogene，2008，27（45）：5959-5974.

[ 5 ] WANG Z，YAO W，LI K，et al. Reduction of miR-21 induces SK-N-SH cell apoptosis and inhibits proliferation via PTEN/PDCD4[J]. Oncol Lett，2017，13（6）：4727- 4733.

[ 6 ] HUANG JH，CAO Y，ZENG L，et al. Tetramethylpyrazine enhances functional recovery after contusion spinal cord injury by modulation of MicroRNA-21，F(xiàn)asL，PDCD4 and PTEN expression[J]. Brain Res，2016，1648（Pt A）：35-45.

[ 7 ] ZHANG X，NG WL，WANG P，et al. MicroRNA-21 modulates the levels of reactive oxygen species by targeting SOD3 and TNFα[J]. Cancer Res，2012，72（18）：4707- 4713.

[ 8 ] HASHIMI ST，F(xiàn)ULCHER JA，CHANG MH，et al. Micro- RNA profiling identifies miR-34a and miR-21 and their target genes JAG1 and WNT1 in the coordinate regulation of dendritic cell differentiation[J]. Blood，2009，114（2）：404-414.

[ 9 ] HUA Y，JIN Z，ZHOU F，et al. The expression significan- ce of serum MiR-21 in patients with osteosarcoma and its relationship with chemosensitivity[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci，2017，21（13）：2989-2994.

[10] ISAKOFF MS，BIELACK SS，MELTZER P，et al. Osteosarcoma：current treatment and a collaborative pathway to success[J]. J Clin Oncol，2015，33（27）：3029-3035.

[11] QADIR MI，NAQVI ST，MUHAMMAD SA. Curcumin：a polyphenol with molecular targets for cancer control[J]. Asian Pac J Cancer Prev，2016，17（6）：2735-2739.

（收稿日期：2017-08-24 修回日期：2018-01-15）

（編輯：鄒麗娟）