6種殺菌劑對蘋果輪紋病的毒力測定

惠娜娜　李繼平　張大為　郭建明　王立　鄭果

摘要：采用生長速率法測定了6種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的毒力。結(jié)果表明，氟硅唑、戊唑醇、多菌靈對菌絲的抑制作用最為明顯，氟硅唑在處理劑量為0.800 μg/mL時，抑制率為96.04%；戊唑醇在處理劑量3.200 μg/mL時，抑制率為96.21%；多菌靈在處理劑量0.320 μg/mL時，抑制率為92.20%。氟硅唑和多菌靈對蘋果輪紋病菌的毒力較強， EC50分別為0.038 52 μg/mL和0.067 54 μg/mL；其次為戊唑醇和吡唑醚菌酯，EC50分別為0.154 8 μg/mL和1.504 23 μg/mL；苯醚甲環(huán)唑和異菌脲EC50分別為4.357 08 μg/mL和4.875 82 μg/mL。苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果輪紋病菌的毒力最弱。

關(guān)鍵詞：蘋果輪紋?。粴⒕鷦?；毒力測定

中圖分類號：S436.611.1 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-1463（2018）07-0042-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.07.014

Abstract：With the parents of hybrid hot pepper Ganke 5 as the experimental material， three kinds of hybrid pollination methods commonly used in pepper production were compared. The results show that the effect of tweezers castration-bolt line marking treatment （traditional method） was the best， and fertile fruit percentage， yield and quality of seed were significantly higher than those of manual emasculation-smear mark treatment， peeling and castration-calyx marking treatment （improved method）. The working efficiencies of different hybridization methods are also completely different， and the differences between treatments are very significant.

Key words：Pepper；Seed production；Ways of hybridizition；Hybridization rate；Efficiency

甘肅是我國的蘋果生產(chǎn)大省，具有發(fā)展蘋果產(chǎn)業(yè)得天獨厚的自然條件，有18個縣被農(nóng)業(yè)部列為全國蘋果生產(chǎn)優(yōu)勢區(qū)域重點縣。蘋果輪紋病是近年來我國蘋果生產(chǎn)上危害較為嚴(yán)重的一種病害，在各主產(chǎn)區(qū)均有不同程度發(fā)生，主要為害蘋果的枝干及果實，發(fā)病嚴(yán)重時田間病果率可達70%～80%，且貯藏期仍可持續(xù)發(fā)病[1 ]。前期調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病在甘肅省靈臺縣、禮縣發(fā)生嚴(yán)重，一般年份果實發(fā)病率在20%～30%，重病年份可達50%～60%，嚴(yán)重制約當(dāng)?shù)靥O果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[1 ]。

蘋果輪紋病是由蘋果輪紋病菌[Botryosphaeria dothidea（Moug.ex Fr）Ces. et De Not]侵染引起的病害，目前在生產(chǎn)中對輪紋病的防治主要依賴化學(xué)藥劑，常用的殺菌劑有苯并咪唑類、三唑類、甲氧基丙烯酸脂類、代森類以及銅制劑等。苯并咪唑類的主要品種有多菌靈、甲基硫菌靈，輪紋病菌對該類殺菌劑較敏感。而多菌靈和甲基硫菌靈在蘋果病害防治上已經(jīng)用了40多年，已相繼有在生產(chǎn)上產(chǎn)生抗藥性菌株的報道[2 - 5 ]。三唑類殺菌劑是近20 a來最受果農(nóng)歡迎的殺菌劑，蘋果產(chǎn)區(qū)常用的品種有苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、氟硅唑、丙環(huán)唑、己唑醇等，以苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇和氟硅唑最多見。有學(xué)者研究了蘋果輪紋病菌對苯醚甲環(huán)唑和氟硅唑敏感性，發(fā)現(xiàn)存在著敏感性下降的群體，兩種藥劑存在較大的抗性風(fēng)險[6 ]。以上研究都集中在山東、陜西等蘋果生產(chǎn)傳統(tǒng)大省，尚未見甘肅蘋果產(chǎn)區(qū)蘋果輪紋病菌的相關(guān)研究報道。鑒于此，我們開展了甘肅省蘋果主產(chǎn)區(qū)殺菌劑對蘋果輪紋病菌的敏感性及控制效果研究，以明確當(dāng)?shù)剌喖y病菌對不同殺菌劑的抗性水平，為甘肅省黃土溝壑蘋果產(chǎn)區(qū)蘋果輪紋病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g，蒸餾水定容至1 000 mL）。

1.1.2 供試菌株 從甘肅省靈臺縣富士果園采集病果，采用組織分離法[7 ]，從病果皮部病健交界處切下3 mm×3 mm×1 mm的小塊，放入70%酒精消毒 30 s，然后將其轉(zhuǎn)入10 g/kg汞消毒1 min，用無菌水清洗 3 遍后，置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA） 培養(yǎng)基上。25 ℃條件下培養(yǎng)5 d后，挑取菌落邊緣的菌絲進行病原菌初步純化，按照柯赫氏法則進行驗證，將純化后的菌株接種在PDA試管斜面中，于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 供試藥劑 供試原藥有98%戊唑醇原藥、 98.2%氟硅唑原藥、95.8%苯醚甲環(huán)唑原藥、97%多菌靈原藥、96%異菌脲原藥、97.5% 吡唑醚菌酯原藥，均購自青島瀚生生物科技股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥液配制 先將戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲、吡唑醚菌酯、多菌靈、氟硅唑原藥溶于二甲基亞砜中，配成10 000 μg/mL 的母液，于冰箱（4 ℃）中貯藏備用。

1.2.2 含藥培養(yǎng)基的配制 在預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，根據(jù)培養(yǎng)基的用量，用移液槍吸取一定量的藥劑母液，將其加入溶化并冷卻至50 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中，充分搖勻后等量倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，配制成含系列濃度藥劑的培養(yǎng)基。重復(fù) 4 次，以不含藥劑的0.1%的Tween-80水溶液處理為空白對照。

1.2.3 蘋果輪紋病菌對供試藥劑的敏感性測定 采用生長速率法[7 ]。先將蘋果輪紋病菌在PDA培養(yǎng)基上活化5 d，用直徑為5.0 mm的打孔器從菌落邊緣打取菌餅，分別移接到含有戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟硅唑、異菌脲、吡唑醚菌酯、多菌靈6個梯度劑量（氟硅唑0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800 μg/mL；苯醚甲環(huán)唑0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800 μg/mL；吡唑醚菌酯0.050、0.100、0.200、0.400、0.800、1.600 μg/mL；異菌脲 0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000 μg/mL；戊唑醇0.100、0.200、0.400、0.800、1.600、3.200 μg/mL；多菌靈0.010、0.020、0.040、0.080、0.160、0.320 μg/mL）的PDA平板上，置26℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)。

連續(xù)培養(yǎng)4 d后，用游標(biāo)卡尺測定菌落徑向線性生長量，求平均值，減去5.0 mm菌餅直徑，即為菌落增長直徑。測量每個重復(fù)的試驗結(jié)果，然后求出每個處理對病原菌的菌絲增長抑制率。通過菌絲生長抑制概率值和藥劑濃度對數(shù)值之間的線性回歸分析，求出各藥劑對菌株的有效抑制中濃度（ EC50）值。

菌絲抑制生長率（%） =[（對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑） /對照菌落生長直徑]×100。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 用Microsoft Excel 2003、DPS 數(shù)據(jù)處理工作平臺對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對蘋果輪紋病菌菌絲生長的影響

6種殺菌劑在不同處理劑量下對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制效果（表1）可知，在供試濃度范圍內(nèi)，氟硅唑、戊唑醇、多菌靈對菌絲的抑制作用最為明顯，其次為異菌脲和吡唑醚菌酯，苯醚甲環(huán)唑?qū)z的抑制效果最差。氟硅唑在處理劑量為0.800 μg/mL下菌落直徑為3.12 mm，抑制率為96.04%；戊唑醇在處理劑量3.200 μg/mL下菌落直徑為2.99 mm，抑制率為96.21%；多菌靈在處理劑量0.320 μg/mL下菌落直徑為6.16 mm，抑制率為92.20%，這3種藥劑對蘋果輪紋病菌有較好的防治效果。

2.2 對蘋果輪紋病的抑制作用

室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表2）可知，供試的6種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的毒力差異顯著。氟硅唑、多菌靈和戊唑醇的毒力較強，其EC50分別為0.038 52 μg/mL、0.067 54 μg/mL和0.154 80 μg/mL；其次為吡唑醚菌酯，EC50為1.504 23 μg/mL，苯醚甲環(huán)唑和異菌脲EC50分別為4.357 08 μg/mL和4.875 82 μg/mL；異菌脲的EC50值高于其他5種藥劑，其對蘋果輪紋病菌的毒力最弱。6種藥劑的相關(guān)系數(shù)均在0.96以上，表明藥劑劑量與抑制作用呈較高的相關(guān)性。

3 小結(jié)與討論

施用殺菌劑是目前防治蘋果輪紋病最為有效的措施之一，生產(chǎn)中可以選用的藥劑也較為豐富，但由于農(nóng)藥經(jīng)銷商的利益驅(qū)動及果農(nóng)科學(xué)用藥水平的限制，造成果農(nóng)在生產(chǎn)上使用的農(nóng)藥品種較為單一，進而導(dǎo)致蘋果輪紋病病菌的抗性發(fā)展非常迅速，為蘋果輪紋病的有效防控帶來潛在風(fēng)險。

劉鵬等[2 ]研究表明，多菌靈對蘋果輪紋病有較強的抑制作用。范昆等[8 ]研究發(fā)現(xiàn)三唑類殺菌劑戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果輪紋病的抑制效果較好，該類藥劑在蘋果輪紋病防治中具有較大應(yīng)用潛力。王麗等[9 ]研究認(rèn)為戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑?qū)μO果輪紋病菌有較好的抑制作用。范昆等[10 ]報道，多菌靈和氟硅唑?qū)μO果輪紋病菌菌絲生長抑制作用較強。本試驗所選的6種殺菌劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長均表現(xiàn)出較好的抑制作用，表明該菌株對化學(xué)藥劑的抗性水平較低。研究結(jié)果顯示，氟硅唑抑制作用最為明顯，EC50值最低，對病菌的毒力最強，其次分別為多菌靈和戊唑醇，這與其他學(xué)者的研究報道一致。因此，針對甘肅果區(qū)的蘋果輪紋病防治，推薦選用氟硅唑、多菌靈和戊唑醇等藥劑進行化學(xué)防治，同時應(yīng)注意藥劑的交替使用。本研究所選蘋果輪紋病菌株較少，不能全面反應(yīng)甘肅省蘋果輪紋病對殺菌劑的抗性水平，后期將開展不同產(chǎn)地蘋果輪紋病菌對殺菌劑敏感性測定。

參考文獻：

[1] 李光旭，沈永波，高艷敏. 蘋果輪紋病菌侵染機制的研究[J]. 果樹學(xué)報，2007，24（1）：16-20.

[2] 劉 鵬，周增強，國立耘. 蘋果輪紋病菌對多菌靈、亞胺唑和丙環(huán)唑的敏感性[J]. 果樹學(xué)報，2009，26（6）：907-911.

[3] 李曉軍，范 昆，曲健祿，等. 蘋果輪紋病菌對多菌靈的敏感性測定[J]. 果樹學(xué)報，2009，26（4）：516-519.

[4] 馬志強，李紅霞，袁章虎，等. 蘋果輪紋病菌對多菌靈抗藥性監(jiān)測初報[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2000（3）：94-96.

[5] 楊煒華，劉開啟. 蘋果輪紋病菌對多菌靈、甲基硫菌靈的抗藥性測定[J]. 植物保護學(xué)報，2002，29（2）：191-192.

[6] 劉保友，張 偉，欒炳輝，等. 蘋果輪紋病菌對苯醚甲環(huán)唑和氟硅唑的敏感性及其交互抗性[J]. 植物病理學(xué)報，2013，43（5）：541-548.

[7] 方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.

[8] 范 昆，李曉軍，張 勇，等. 山東省蘋果輪紋病菌對三種三唑類殺菌劑的敏感性檢測[J]. 植物保護，2013，39（1）：133-136.

[9] 王 麗，周增強，侯 琿. 三唑類殺菌劑對蘋果主要病原菌的毒力及田間防效[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，

45（7）：82-86.

[10] 范 昆，付 麗，張 勇，等. 10種殺菌劑對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)毒力及田間防治效果研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2016，28（10）：32-35.

（本文責(zé)編：陳 珩）