煙蚜繭蜂產(chǎn)品生產(chǎn)及應(yīng)用技術(shù)研究（Ⅲ）

闕勁松　白崇祿　黃坤　陳華祥

摘要：【目的】明確僵蚜最適冷藏發(fā)育期、冷藏溫度及僵蚜產(chǎn)品長效冷藏方法，為提高煙蚜繭蜂產(chǎn)品利用率提供理論依據(jù)?！痉椒ā繉⒔┗?～4 d僵蚜分別置于1、3和5 ℃下進(jìn)行低溫冷藏，比較低溫對不同發(fā)育期僵蚜羽化率的影響；收集僵化2～3 d僵蚜，分別制成僵蚜盒和僵蚜葉片盒，并進(jìn)行不同外包裝處理，比較僵蚜盒和僵蚜葉片盒冷藏后僵蚜的羽化率；測定低溫冷藏7、12、17、22、27和32 d僵蚜羽化的雌蜂平均壽命及對煙蚜的寄生量，比較低溫冷藏對煙蚜繭蜂成蜂壽命和產(chǎn)卵能力的影響?！窘Y(jié)果】在1 ℃下冷藏，僵蚜羽化率最低；5 ℃下冷藏期間僵蚜大量羽化；3 ℃下冷藏，僵化2 d僵蚜的羽化率均高于其他發(fā)育階段僵蚜，至冷藏30 d時僵蚜羽化率仍達(dá)57.34%，其次為僵化3 d僵蚜。僵蚜盒密封保濕和僵蚜葉片盒有效冷藏期分別為17和27 d；冷藏后雌蜂壽命為4.33～4.83 d，對煙蚜繭蜂的寄生量為81.36～87.78頭/株，與未冷藏雌蜂均無顯著差異（P>0.05）?！窘Y(jié)論】以僵化2～3 d僵蚜在3 ℃下進(jìn)行冷藏為宜；僵蚜葉片盒有效冷藏期比僵蚜盒長，但冷藏僵蚜盒生產(chǎn)成本更低、效率更高；低溫冷藏對煙蚜繭蜂雌蜂的壽命及產(chǎn)卵能力無明顯影響。

關(guān)鍵詞： 煙蚜繭蜂；僵蚜；低溫冷藏；羽化率；壽命

中圖分類號： S476.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：2095-1191（2018）09-1782-05

0 引言

【研究意義】天敵昆蟲產(chǎn)品化是生物防治的必要途徑，特別是用于大規(guī)模釋放的天敵（時敏和陳學(xué)新， 2015）。寄生蜂被大量用于生物防治，由于其重要的科學(xué)及經(jīng)濟(jì)價值，早在80年前即開展對寄生蜂低溫冷藏的研究。影響寄生蜂低溫冷藏效果的因素復(fù)雜，主要來自于寄生蜂體外環(huán)境與蟲體本身，而溫度強(qiáng)度和冷藏時間是最主要的體外因素（王虎誠等， 2011；趙靜等， 2014）。低溫冷藏是延長天敵昆蟲儲存期的一種最簡單、最常用的方法，大多數(shù)天敵昆蟲在3～15 ℃的條件下生長發(fā)育減緩，因此可增加冷藏時間（徐學(xué)農(nóng)和王恩東， 2008；陳華祥等，2017）。對于煙蚜繭蜂而言，如何長時間存儲僵蚜并使其保持較高的羽化率和生命力，一直是煙蚜繭蜂產(chǎn)品化生產(chǎn)的中心問題?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】相關(guān)研究表明，煙蚜繭蜂不同蟲態(tài)的冷藏效果差異明顯，一般情況下，成蟲受低溫影響最嚴(yán)重，而蛹相對適合用于冷藏（李玉艷，2011）。受地域的影響，不同地域煙蚜繭蜂的冷藏結(jié)果也有所差異。在福建，陳茂華等（2005）在5 ℃冰箱中對不同發(fā)育階段煙蚜繭蜂的耐冷藏性進(jìn)行比較，結(jié)果表明，僵化3 d僵蚜為煙蚜繭蜂最適冷藏期，冷藏30 d后羽化率可保持在72.33%左右；在貴州，陳文龍和閆玉芳（2012）對僵化1～5 d僵蚜進(jìn)行不同溫度冷藏，發(fā)現(xiàn)僵化3 d僵蚜在5 ℃下進(jìn)行冷藏為宜，冷藏25 d后僵蚜羽化率為74.00%；在冷藏后成蜂壽命和產(chǎn)卵能力方面，兩項(xiàng)研究的結(jié)果相似，即在一定時間范圍內(nèi)（<30 d），低溫冷藏對煙蚜繭蜂成蜂壽命及產(chǎn)卵能力無明顯影響。不同地域煙蚜繭蜂的滯育情況也有所不同。在河北，李玉艷等（2013）對誘導(dǎo)煙蚜繭蜂滯育的方法進(jìn)行詳述報道，指出以2～3齡煙蚜繭蜂幼蟲在8 ℃、L∶D=8∶16的條件下低溫處理后，其滯育率可達(dá)54.35%；吳興富等（2000）發(fā)現(xiàn)，在云南玉溪煙蚜繭蜂無越冬現(xiàn)象、不滯育?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】煙蚜繭蜂的發(fā)育受溫度（氣候）影響較明顯，不同地區(qū)煙蚜繭蜂生態(tài)學(xué)特性存在差異，因此，應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂驐l件，結(jié)合煙蚜繭蜂的發(fā)育狀況進(jìn)行煙蚜繭蜂低溫冷藏研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】比較不同低溫對僵化1～4 d煙蚜繭蜂羽化率的影響，并進(jìn)一步測試僵蚜盒和僵蚜葉片盒的有效冷藏期及低溫冷藏對成蜂壽命和產(chǎn)卵能力的影響，以明確煙蚜繭蜂（云南種群）的最適冷藏發(fā)育期，為煙蚜繭蜂商品化生產(chǎn)打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試煙苗品種為K326，包衣煙籽由玉溪中煙種子公司生產(chǎn)提供。種蚜、種蜂為云南省紅河州彌勒縣新哨三角地?zé)熝晾O蜂繁育基地飼養(yǎng)。僵蚜盒、冷藏箱等材料由昆明潤彩農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司提供。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 煙蚜繭蜂最適冷藏發(fā)育期及冷藏溫度試驗(yàn)

毛筆挑取僵化1、2、3和4 d的僵蚜各100頭分裝入自制僵蚜盒中，分別置于1、3和5 ℃、相對濕度70%的人工氣候箱中冷藏，5 d后取出（以后每隔5 d取出一批，至冷藏30 d）置于25 ℃、相對濕度70%的恒溫箱中，每天定時觀察統(tǒng)計僵蚜羽化情況，若連續(xù)3 d無僵蚜羽化，結(jié)束試驗(yàn)，以不分僵化天數(shù)僵蚜冷藏后羽化率為對照。每處理重復(fù)3次。

1. 2. 2 僵蚜盒和僵蚜葉片盒低溫冷藏試驗(yàn) 收集（采摘）僵化2～3 d僵蚜，分別制成僵蚜盒和僵蚜葉片盒，把僵蚜盒和僵蚜葉片盒進(jìn)行不同外包裝后[處理Ⅰ：用塑料袋密封僵蚜盒；處理Ⅱ：在僵蚜盒上噴少量水后用塑料袋密封僵蚜盒；處理Ⅲ：僵蚜葉片盒不密封；對照Ⅰ（CKⅠ）：僵蚜盒不密封、不冷藏；對照Ⅱ（CKⅡ）：僵蚜葉片盒不密封、不冷藏]置于15 ℃下處理12 h→10 ℃下處理12 h→5 ℃下處理24 h→3 ℃冷庫中分別冷藏5、10、15、20、25、30和35 d后取出，先置于10～15 ℃的冷藏箱內(nèi)2 d、再轉(zhuǎn)入25 ℃的人工氣候箱內(nèi)任其羽化（實(shí)際冷藏時間分別為7、12、17、22、27和32 d），每天定時統(tǒng)計羽化數(shù)量，連續(xù)5 d不再有羽化時結(jié)束統(tǒng)計，并解剖未羽化的僵蚜。對照為載有僵蚜的煙葉置于25 ℃的人工氣候箱內(nèi)任其羽化，每處理重復(fù)3次。

1. 2. 3 低溫冷藏對成蜂壽命和產(chǎn)卵能力的影響

取低溫冷藏7、12、17、22、27和32 d僵蚜羽化的雌蜂各10頭，分別引入透明塑料瓶內(nèi)（10頭/瓶），置于20～27 ℃室溫條件下，每天飼喂1次10%蜜糖水，每隔24 h觀察記錄1次雌蜂成活數(shù)；以未冷藏僵蚜羽化的成蜂為對照。各處理重復(fù)3次，以加權(quán)平均數(shù)計算雌蜂的平均壽命。

將低溫冷藏7、12、17、22、27和32 d僵蚜羽化的成蜂，分別引入透明塑料瓶內(nèi)，置于20～27 ℃室溫條件下，飼喂10%蜜糖水讓其自然交配5 h后，再分別將不同冷藏時間的1頭雌蜂引入有200頭煙蚜的1株煙苗上（用60目防蟲網(wǎng)罩），置于25 ℃、相對濕度70%、光照775 lx的人工氣候箱內(nèi)任其產(chǎn)卵寄生，各處理10頭雌蜂，即10個重復(fù)。接蜂6 d后統(tǒng)計煙苗上的僵蚜和寄生蚜數(shù)量。以未冷藏僵蚜的雌蜂為對照。

1. 3 統(tǒng)計分析

采用Graphpad Prism 7和SPSS 17.0進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)差異性顯著分析，先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊性，則采用LSD方法比較各組差異性；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布且方差不齊，則采用秩和檢驗(yàn)。按以下公式計算羽化率：

羽化率（%）=羽化數(shù)/僵蚜總數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

2. 1 煙蚜繭蜂最適冷藏發(fā)育期和冷藏溫度

不同發(fā)育階段的煙蚜繭蜂僵蚜羽化率隨冷藏時間的變化趨勢如圖1所示。僵蚜羽化率隨冷藏時間的延長而降低，不同發(fā)育階段煙蚜繭蜂對低溫的適應(yīng)能力存在差異，1 ℃下冷藏5 d后，僵化2和3 d及對照組的羽化率分別為74.36%、75.77%和71.75%，顯著高于僵化1和4 d僵蚜的羽化率（P<0.05，下同）；僵化2 d僵蚜冷藏20和30 d后的羽化率分別為27.08%和9.02%，與僵化3 d冷藏20和30 d后的羽化率（27.78%和7.08%）無顯著差異（P>0.05，下同）（圖1-A）。

冷藏溫度為3 ℃時，冷藏5 d后，僵化2、3和4 d及對照組僵蚜的羽化率均在70.00%以上，而僵化1 d僵蚜的羽化率（63.35%）最低；冷藏15 d后，僵化2 d僵蚜的羽化率為79.38%，略高于僵化3 d僵蚜的羽化率（74.34%），而僵化1和4 d僵蚜的羽化率分別為37.34%和28.74%，對照組僵蚜羽化率為69.32%；冷藏30 d后各發(fā)育階段僵蚜的羽化率均低于60.00%，其中以僵化2 d僵蚜的羽化率最高（57.34%），其次是僵化3 d僵蚜的羽化率（54.09%），以僵化1 d僵蚜的羽化率最低（7.34%）（圖1-B）。

冷藏溫度為5 ℃時，冷藏5 d對各發(fā)育階段僵蚜的羽化率均無顯著影響，各發(fā)育階段及對照組僵蚜羽化率均在80.00%以上；冷藏10 d后僵化1、2、3和4 d及對照組僵蚜的羽化率分別為81.70%、84.72%、86.32%、82.34%和79.54%，各處理間無顯著差異（圖1-C）。5 ℃下冷藏至第10 d時，僵化3和4 d的僵蚜已有部分羽化，冷藏至15 d時，僵化4 d僵蚜在冷藏期間羽化率高達(dá)40.33%，而僵化2和3 d及對照組均有不同程度的僵蚜羽化，僵化1 d的僵蚜在冷藏期間無僵蚜羽化；至冷藏20 d時，僵化1 d的僵蚜有0.33%于冷藏期間羽化，僵化2、3和4 d及對照組僵蚜于冷藏期間已大部分羽化；冷藏30 d后，雖然各發(fā)育階段僵蚜羽化率均高于1和3 ℃冷藏同期僵蚜的羽化率，但5 ℃下冷藏期間羽化和死亡煙蚜繭蜂的數(shù)量均超過總羽化數(shù)的一半，表明僵蚜不適合在5 ℃下長期冷藏（圖1-D）。

對1、3和5 ℃冷藏后連續(xù)10 d未羽化的僵蚜進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)各發(fā)育階段僵蚜在不同溫度冷藏后均未出現(xiàn)滯育個體，即未出蜂僵蚜均死亡。

2. 2 僵蚜盒和僵蚜葉片盒低溫冷藏對僵蚜羽化的影響

由表1可知，僵蚜葉片盒內(nèi)的僵蚜（處理Ⅲ）由于受到的損傷最小，其羽化率顯著高于僵蚜盒的僵蚜（處理Ⅰ和處理Ⅱ），與電動僵蚜刷對僵蚜的損傷有關(guān)；僵蚜盒經(jīng)密封保濕處理，其羽化率顯著高于不保濕處理（處理Ⅰ）（冷藏7 d除外），表明在冷藏過程中僵蚜失水對羽化有明顯影響。若以冷藏后羽化率在80.00%以上為指標(biāo)，則僵蚜葉片盒內(nèi)的有效冷藏期為27 d，僵蚜盒密封保濕的有效冷藏期為17 d，僵蚜盒不保濕的有效冷藏期為7 d。

2. 3 低溫冷藏對成蜂壽命和產(chǎn)卵能力的影響

對冷藏后的雌蜂壽命進(jìn)行測試，結(jié)果（表2）表明，冷藏后成蜂壽命為4.33～4.83 d，與未冷藏成蜂壽命（4.94 d）差異不顯著，即低溫冷藏對煙蚜繭蜂存活能力無顯著影響。

對冷藏后的雌蜂產(chǎn)卵能力進(jìn)行測定，結(jié)果（表2）表明，冷藏后的僵蚜羽化成蜂后對煙蚜的寄生量為81.36～87.78頭/株，與未冷藏成蜂寄生量（85.04頭/株）無顯著差異，說明低溫冷藏后煙蚜繭蜂的寄生能力沒有受到明顯影響。

3 討論

3. 1 煙蚜繭蜂最適冷藏發(fā)育期及冷藏溫度

昆蟲是變溫動物，其生長發(fā)育受溫度的影響非常明顯，低溫可延長天敵昆蟲的發(fā)育時間，進(jìn)而延長產(chǎn)品的貨架期。不同發(fā)育階段煙蚜繭蜂對低溫的適應(yīng)能力不同（李玉艷，2011）。陳茂華等（2005）研究表明，2～3齡煙蚜繭蜂對低溫最敏感，是誘導(dǎo)煙蚜繭蜂滯育的最佳時機(jī)。低溫冷藏后，僵蚜羽化率受冷藏溫度和自身發(fā)育情況的影響，而冷藏條件對僵蚜羽化率起決定性作用。本研究結(jié)果表明，1 ℃下冷藏10 d后各處理僵蚜羽化率均低于60.00%，即1 ℃溫度過低，導(dǎo)致煙蚜繭蜂在冷藏期間難以繼續(xù)維持自身發(fā)育而死亡，不適宜煙蚜繭蜂的冷藏；在5 ℃下冷藏僵蚜，冷藏10 d后僵蚜于冷藏期間開始羽化，說明5 ℃溫度過高，對煙蚜繭蜂發(fā)育速度控制效果不明顯，不適合僵蚜長期冷藏；冷藏溫度為3 ℃時，僵化1 d的煙蚜繭蜂難以繼續(xù)發(fā)育，死亡率較高，僵化2～3 d煙蚜繭蜂對該溫度的適應(yīng)能力較強(qiáng)，可在3 ℃下繼續(xù)維持自身發(fā)育，而僵化4 d的僵蚜在該溫度下羽化率最低，其原因在于僵化4 d僵蚜大多數(shù)為即將羽化的成蜂，成蜂在3 ℃難以長時間存活，故在冷藏期間（未羽化）死亡。對各發(fā)育階段在不同溫度下冷藏后的僵蚜進(jìn)行解剖，均未發(fā)現(xiàn)滯育個體，說明在云南該溫度不能誘導(dǎo)煙蚜繭蜂滯育，與李學(xué)榮等（1999）的研究結(jié)果存在一定差異，其原因可能在于地域的不同造成煙蚜繭蜂對低溫的適應(yīng)能力存在差異。相關(guān)研究也表明，在云南，自然條件下煙蚜繭蜂終年無越冬現(xiàn)象，即不滯育（吳興富等，2000）。綜上所述，恒溫冷藏僵蚜?xí)r，在3 ℃下冷藏僵化2～3 d的僵蚜為宜。由于煙蚜繭蜂發(fā)育速度受溫度的影響較明顯，地域的差異導(dǎo)致不同地區(qū)煙蚜繭蜂發(fā)育速度不一，導(dǎo)致本研究與陳文龍和閆玉芳（2012）的研究結(jié)果（5 ℃、僵化3 d最佳）有所差異。

3. 2 僵蚜盒和僵蚜葉片盒低溫冷藏技術(shù)

在明確煙蚜繭蜂最適冷藏發(fā)育期和冷藏溫度的基礎(chǔ)上，對加工后產(chǎn)品的冷藏做進(jìn)一步研究，結(jié)果表明，短時間冷藏（7 d內(nèi)），冷藏僵蚜葉片盒、僵蚜盒加濕和不加濕3種方式處理后僵蚜羽化率與各自對照組僵蚜羽化率無明顯差異；若要長時間冷藏，則以僵蚜葉片盒冷藏效果最佳，其產(chǎn)品有效冷藏期可達(dá)27 d，冷藏27 d后羽化率為84.33%，但實(shí)際生產(chǎn)中僵蚜葉片盒的制作較費(fèi)工、費(fèi)時，且僵蚜葉片盒體積較大，運(yùn)輸和生產(chǎn)成本高。因此，本研究認(rèn)為煙蚜繭蜂產(chǎn)品的冷藏以處理Ⅱ僵蚜盒加濕密封冷藏效果最佳，其產(chǎn)品有效冷藏期為17 d，羽化率為81.33%。

3. 3 低溫冷藏對成蜂壽命和產(chǎn)卵能力的影響

僵蚜冷藏后其雌蜂的壽命與產(chǎn)卵寄生是評價產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，僵蚜冷藏后其雌蜂的平均壽命和寄生數(shù)量與未冷藏雌蜂無顯著差異，即低溫冷藏對煙蚜繭蜂成蜂壽命和產(chǎn)卵能力無明顯影響，與前人的研究結(jié)果（陳文龍和閆玉芳，2012；陳珍珍，2014）一致。

4 結(jié)論

比較不同溫度冷藏后的僵蚜羽化率，發(fā)現(xiàn)以僵化2～3 d僵蚜于3 ℃冷藏后的羽化率最高；1 ℃冷藏僵蚜溫度過低，冷藏期間僵蚜大量死亡；5 ℃溫度過高，冷藏10 d后部分僵蚜于冷藏期間羽化，不適宜僵蚜冷藏。從產(chǎn)品有效貯藏期來看，僵蚜葉片盒有效貯藏期比僵蚜盒長10 d，即保存時間更長，但結(jié)合生產(chǎn)成本和效率分析，實(shí)際生產(chǎn)中以冷藏僵蚜盒生產(chǎn)成本更低；低溫冷藏對煙蚜繭蜂雌蜂壽命和產(chǎn)卵能力無明顯影響。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）