紫外分光光度法檢測豆腐渣中植物雌激素的含量

孫勇　王豐瑋　徐曉燕

[摘要]本研究主要對檢測豆腐渣中植物雌激素含量的方法展開研究，然后通過實(shí)驗(yàn)研究的方式探討紫外分光光度法的具體應(yīng)用。選取染料木素作為研究的標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)對豆腐渣中的植物雌激素含量進(jìn)行檢測。紫外分光光度法是一種基于物質(zhì)分子對不同波段光輻射吸收存在著較大差異而建立的方法。通過大量的實(shí)踐研究證明，該方法用于物質(zhì)含量的測定有著較大的優(yōu)勢，不僅操作較為簡便，而且具有較高的準(zhǔn)確度，因此該方法被廣泛應(yīng)用于保健品的檢驗(yàn)之中。本研究將該方法應(yīng)用到豆腐渣中植物雌激素的含量測量上，也同樣取得了較好的效果。

[關(guān)鍵詞]植物雌激素；檢測方法；豆腐渣；含量

中圖分類號：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20180410

隨著人們生活水平的不斷提高，如何獲得健康越來越成為人們關(guān)注的話題。在現(xiàn)在快節(jié)奏、壓力大的生活環(huán)境下，人們自身的免疫力逐漸下降，癌癥和心腦血管等疾病的發(fā)病率逐步提高，更需要營養(yǎng)來維持機(jī)能、保護(hù)健康，植物雌激素就是一個(gè)很好的選擇。

豆科植物在成長過程中會(huì)形成一定含量的植物雌激素，該物質(zhì)屬于豆科植物產(chǎn)生的二級代謝物。從眾多關(guān)于該物質(zhì)的研究中表明，大豆植物雌激素對人體生理有著積極作用，長期食用可有效降低許多疾病的發(fā)生率，如婦女更年期綜合征、高血脂、乳腺癌、骨質(zhì)疏松、前列腺疾病等，同時(shí)在抗癌方面也展現(xiàn)出較好的效果。

1植物雌激素的相關(guān)性質(zhì)

1.1植物雌激素的概念

植物中具有弱雌激素作用的化合物是植物雌激素，其弱雌激素效應(yīng)是經(jīng)過與甾體雌性激素受體以低親和度結(jié)合而發(fā)揮的。植物雌激素是一種具有和動(dòng)物雌性激素生物活性相似的植物成分，它們對激素水平不穩(wěn)定引起的一系列疾病有著很大的作用力，特別是對防治乳腺疾病、絕經(jīng)期出現(xiàn)的很多綜合征、前列腺疾病、骨質(zhì)疏松和心腦血管疾病非常有效。盡管被廣泛稱為植物雌激素，但其實(shí)它們本身并不是激素，異黃酮的活性結(jié)構(gòu)和成分，其結(jié)構(gòu)類型與女性體內(nèi)所需要的雌性激素非常相似，可以起到選擇干擾、選擇模擬、雙向調(diào)節(jié)內(nèi)分泌水平的生理作用，給廣大女性遠(yuǎn)離煩惱、追求健康帶來了新的曙光。從植物尤其是豆科類植物中提取的植物雌激素可以替代雌激素，并且還可以防止雌激素發(fā)生不良反應(yīng)。

傳統(tǒng)中醫(yī)也認(rèn)為，大豆等植物所具有的營養(yǎng)成分，在臨床上經(jīng)常用來降血糖、降脂肪、降血壓以及預(yù)防心腦血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，這是由于植物雌激素可以保護(hù)血管的彈性，降低心腦血管疾病的發(fā)生率。長期使用雌激素能針對多種生命器官產(chǎn)生“雌激素樣作用”，產(chǎn)生作用的部位包括女性乳房和卵巢。與藥物雌激素相比，紫花苜蓿、堅(jiān)果、谷物大豆中的植物雌激素食用起來既方便又安全。

1.2植物雌激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)

異黃酮、二苯乙烯和木酚素是天然存在于植物中的成分，顯示出一定的雌激素活性，但其生物活性相對較弱，與哺乳動(dòng)物雌激素17β-雌二醇的結(jié)構(gòu)相似，主要是與雌二醇的特征更為相似，其中包括一對羥基和苯酚環(huán)，對雌激素受體吸附后者起著決定性的作用。然而，不同的植物雌激素結(jié)構(gòu)存在的一些細(xì)小差異可能會(huì)極大地改變雌激素活性。植物雌激素的結(jié)構(gòu)式見圖1。

1.3植物雌激素的特點(diǎn)

1.3.1雙向調(diào)節(jié)作用

植物雌激素的結(jié)構(gòu)類似物與雌激素活性有關(guān)，表現(xiàn)出協(xié)同抑制植物雌激素。雙向調(diào)節(jié)作用是指當(dāng)人體內(nèi)雌激素水平過低時(shí)，植物雌激素占據(jù)雌激素受體，發(fā)揮弱雌激素的效應(yīng)，表現(xiàn)出體內(nèi)雌激素水平升高；當(dāng)人體內(nèi)雌激素水平過高時(shí)，植物雌激素受體占據(jù)“競爭”的地位，同時(shí)發(fā)揮弱雌激素效應(yīng)，因此一般表現(xiàn)出較低的雌激素水平。

1.3.2具有選擇性

和植物雌激素親和力很強(qiáng)的是膀胱、前列腺、心腦血管這些受體，但和卵巢、骨組織、乳房、子宮等的親和力比較弱，其活性僅為雌性激素的1N99～1/999 99。植物雌激素能選擇性地與雌激素結(jié)合，減少雌激素誘發(fā)癌癥的概率。

1.4不同加工方法對植物雌激素含量的影響

各種豆制品的植物雌激素種類和含量分布是不同的，不僅與種植環(huán)境和品種有關(guān)，還與加工過程緊密相連。熱處理、水處理、凝固等加工工藝過程和方法對大豆制品中的植物雌激素含量和物種分布也是有影響的，特別是大豆分離蛋白和大豆?jié)饪s蛋白的不同制取方法對植物雌激素含量的影響是最大的。

1.4.1熱處理

植物雌激素遇到過熱的水會(huì)增加向外的滲透速度，熱水的滲透使大量的植物雌激素減少，同時(shí)大豆制品中的植物物種分布由于熱處理會(huì)發(fā)生改變，因?yàn)槊傅幕钚栽跓崽幚頃r(shí)會(huì)不斷升高，把植物雌激素糖苷水解為自由型植物雌激素，所以自由型植物雌激素的比重在大豆制品中會(huì)逐漸增加。

1.4.2水處理

浸泡會(huì)使植物雌激素的9%丟失在水中，而且經(jīng)過水處理后的大豆中植物雌激素游離型有所增加。

1.4.3發(fā)酵工藝

發(fā)酵會(huì)改變植物雌激素的物種分布，但并不影響植物雌激素的含量，發(fā)酵后產(chǎn)品的主要存在形式是自由型植物雌激素，這是由于在發(fā)酵的過程中，水解酶產(chǎn)生的大量菌水解了雌激素糖苷，從而自由型的植物雌激素就會(huì)有所增加。

1.4.4凝固工藝

在豆腐渣的凝固過程中，植物雌激素會(huì)因?yàn)槟虛p失于乳清中，損失率為39%。

1.4.5加工提取方法

大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白含量由于提取植物雌激素的方法也會(huì)有所影響?？扇苄蕴妓衔锶绻脻駸崴捶ㄏ礈斓玫綕饪s蛋白的植物雌激素含量與原料大豆中的含量非常接近，但是大豆?jié)饪s蛋白的植物雌激素用55%～60%的乙醇溶液洗滌，提取得到的只為原料中的1/9。

1.5植物雌激素的作用

1.5.1改善膚質(zhì)，緩解更年期不適

植物雌激素的類雌激素樣作用可使人皮膚細(xì)膩、潤滑、不松弛且富有彈性；提亮膚色，使黑色素不沉著，膚色均勻；雌激素水平可以得到調(diào)節(jié)，更年期的癥狀會(huì)有所緩解。

1.5.2改善經(jīng)期紊亂

月經(jīng)期間不舒服是雌激素分泌不足引起的，植物雌激素的雙向調(diào)節(jié)作用可以使雌激素水平恢復(fù)正常，改善經(jīng)期不適的情況。

1.5.3延緩衰老

植物雌激素可以推遲更年期的到來，減緩女性卵巢功能衰退的速度。

1.5.4預(yù)防心腦血管疾病

植物雌激素可以預(yù)防心腦血管疾病，防止動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)生。

1.5.5防治骨質(zhì)疏松癥

植物雌激素可以維持人體雌激素的分泌水平，及時(shí)為人體補(bǔ)充植物雌激素，有效預(yù)防骨質(zhì)疏松。

1.5.6預(yù)防乳腺癌

雌激素的雙向調(diào)節(jié)可減少女性由于雌激素的水平過高而患乳腺癌的概率。

1.5.7改善產(chǎn)后精神障礙

婦女分娩后雌激素水平過低，還未得到恢復(fù)，容易形成精神障礙，從而導(dǎo)致植物神經(jīng)紊亂，及時(shí)補(bǔ)充植物雌激素可以有效改善產(chǎn)后精神障礙。

1.6植物雌激素的前景與展望

由于植物雌激素有明顯的生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)血管、改善骨質(zhì)疏、抗炎等，在社會(huì)上和學(xué)術(shù)界開始受到越來越多的重視，成為近年來科學(xué)家研究的重點(diǎn)。隨著人民生活水平的不斷提高，健康越來越成為人們重視的問題，大豆植物雌激素具有廣闊的前景。美國首先發(fā)現(xiàn)了植物雌激素的生理特點(diǎn)，指出大豆物質(zhì)中的最具有藥用價(jià)值的活性成分就是植物雌激素。1999年許多著名專家對于天然活性物質(zhì)具有抗癌作用展開了會(huì)議，肯定了大豆植物的雌激素是有效的抗癌活性物質(zhì)，同時(shí)指出了植物雌激素具有以下生理特點(diǎn)：（1）是保健品和藥品昂貴的添加劑和配料，可以防治肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌和乳腺癌的發(fā)生；（2）可以防治與抑制白血病、骨質(zhì)增生和心血管疾病，具有抗溶血活性和抗真菌活性。因此，在保健食品和醫(yī)藥領(lǐng)域植物雌激素將會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。

但是再好的東西也只能適量補(bǔ)充，植物雌激素也有它不利的一面，高劑量的雌激素對生長發(fā)育有不利影響，它會(huì)改變女性的月經(jīng)周期。因此，我們應(yīng)該更加深入地研究，通過進(jìn)行更多的實(shí)驗(yàn)，使植物雌激素更加科學(xué)合理地被開發(fā)和被利用。

2豆腐渣的介紹

2.1豆腐渣的來源

豆腐是最常見的豆制品，又稱水豆腐，主要的生產(chǎn)過程是制漿和凝固成形。制漿即將大豆制成豆?jié){；凝固成形即豆?jié){在熱量與凝固劑的共同作用下凝固成含有大量水分的凝膠體。豆腐渣是豆腐加工的副產(chǎn)品，是在制豆腐時(shí)濾去漿汁后所剩下的渣滓，含有較豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，其粗蛋白含量可達(dá)25%～30%，是膳食纖維中最好的纖維素，被稱為“大豆纖維”。

2.2豆腐渣對人的益處

大豆的植物雌激素含量非常高，而作為大豆制品的豆腐渣，其植物雌激素含量也不低。豆腐渣營養(yǎng)非常豐富，含有多種人體不可或缺的鐵、鈣、鎂等微量元素，同時(shí)富含優(yōu)質(zhì)蛋白、糖和植物油，素有“植物肉”的美譽(yù)，對人的益處特別多。

2.2.1消油降脂

含有食物纖維的豆腐渣可以吸附膽固醇，從而防止吸收多余的膽固醇，有效降低血液中膽固醇的含量，防止增加血液黏度，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、中風(fēng)等疾病的發(fā)生。

2.2.2治療便秘

大量食物纖維存在于豆腐渣中，經(jīng)常吃豆腐渣能增加糞便的體積，有利于體內(nèi)毒素的排出，可以促進(jìn)腸道的蠕動(dòng)，使大便變軟，有利于排出大便，防止出現(xiàn)便秘等一系列肛腸問題。補(bǔ)益清熱的健康食品第一位當(dāng)屬豆腐渣，常食用豆腐渣可清熱潤燥、補(bǔ)氣、清理腸胃、生津止渴，熱性體質(zhì)更適合食用豆腐渣，可用于調(diào)理口臭、腸胃不清，有助于患者發(fā)熱后的恢復(fù)。

2.2.3減肥消脂

豆腐渣的特點(diǎn)是高蛋白質(zhì)、低熱量、高膳食纖維、低脂肪，人吃過之后能夠增加飽腹感，而且熱量低于其他食物，因此非常適用于減肥人群。

2.2.4降血糖

豆腐渣除了含有膳食纖維，還含有不飽和脂肪酸、粗蛋白，這些物質(zhì)有助于延緩糖分在腸道的被吸收能力，降低就餐后血糖上升的速度，使糖尿病患者的血糖得到有效的控制。

2.2.5抑制癌癥

豆腐渣中含有抑制癌癥的有效成分如豆甾醇、甾固醇，經(jīng)常食用豆腐渣，能夠大大降低結(jié)腸癌、胰腺癌的發(fā)病率。

2.2.6預(yù)防骨質(zhì)疏松癥

醫(yī)學(xué)家證明，豆腐渣除了有幫助人體消化、增加營養(yǎng)吸收、調(diào)節(jié)消化不良的功能外，對骨骼、牙齒的生長發(fā)育也大有益處，還可以增加造血時(shí)血液中的鐵含量。豆腐渣中含有大量的鈣元素，易消化吸收，吸收和消化率高達(dá)90%以上，常吃豆腐渣有利于老年人預(yù)防骨質(zhì)疏松癥。

3植物雌激素含量測定的方法

測定植物雌激素含量的方法有很多種，如紫外分光光度法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳法、薄層掃描色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。

3.1紫外分光光度法

紫外分光光度法是基于物質(zhì)分子對200～400nm光輻射的吸收而建立起來的方法。由于200～400nm光輻射的能量主要適用于物質(zhì)中原子價(jià)電子的能級躍遷，可以導(dǎo)致這些電子的躍遷。該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于保健品的日常分析植物雌激素的含量。

3.2高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

在植物雌激素被高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測時(shí)，如果色譜圖中每個(gè)峰用標(biāo)準(zhǔn)樣品定性方法確定，因?yàn)橛性S多類型的植物雌激素，所以標(biāo)準(zhǔn)樣品的需求各種各樣。植物雌激素標(biāo)準(zhǔn)樣品是特別昂貴的，目前丙二酰和乙酰形式異黃酮標(biāo)準(zhǔn)樣品尚無任何供應(yīng)廠商，合成標(biāo)準(zhǔn)樣品或自行分離的方法非常麻煩，不提倡使用。若檢測使用植物雌激素水解為苷元，如果水解加入氯離子會(huì)使色譜柱的使用壽命大大縮短，從而使用高效液相色譜法定性和定量分析植物雌激素有很多不方便。用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法聯(lián)用技術(shù)檢測植物雌激素，解決了定性由于缺乏標(biāo)準(zhǔn)樣品的分析問題，能快速準(zhǔn)確地確定色譜峰在色譜圖的歸屬。因?yàn)楸：鸵阴Ｐ问疆慄S酮的異黃酮糖苷和摩爾消光系數(shù)相同，根據(jù)異黃酮糖苷標(biāo)準(zhǔn)樣品來計(jì)算響應(yīng)因子的含量，所以只需要3種異黃酮糖苷標(biāo)準(zhǔn)品，便可用于定量分析所有的植物雌激素，植物雌激素的定性和定量分析因此也很方便。

3.3毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法的優(yōu)點(diǎn)是采樣高、速度快、分離效率高，處理起樣品來非常經(jīng)濟(jì)簡便，此方法漸漸成為植物雌激素含量的重要測定方法之一。

3.4薄層掃描色譜法

薄層掃描色譜法的優(yōu)點(diǎn)是分離效果好、取樣量少、操作簡單，但是人為操作誤差大，而且顯色劑薄層用量難以精確控制，定量準(zhǔn)確度低，分離效果不高，所以不提倡使用。

3.5氣相色譜法

氣相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是敏感性高、進(jìn)樣量少、特異性強(qiáng)、選擇性高，但是需制備衍生物來測定金雀異黃素和大豆黃素，制備樣品過程復(fù)雜，易受雜質(zhì)的干擾，價(jià)格昂貴且耗時(shí)比較久，因此該方法的普及受到了限制。

3.6高效液相色譜法

高效液相色譜法是目前在植物雌激素的研究最廣泛的測定方法之一，用不同濃度的甲醇、乙醇提取樣品，超聲回流提取直接用酸或酶水解后測定。該方法的特點(diǎn)是分離效率高、樣品的測定方法廣、樣品制備過程簡單、成本低廉、靈敏度高、測量結(jié)果的準(zhǔn)確性好等，有多樣選擇的檢測器。該方法和紫外分光光度法一樣也適用于保健品的日常分析和質(zhì)量控制，但高效液相色譜法測試時(shí)間太長，運(yùn)行成本又過高，特別是豆腐渣中植物雌激素的含量需要被反復(fù)檢查、探索和提取，不利于大規(guī)模生產(chǎn)和操作。

此外，在醫(yī)學(xué)上對植物雌激素的含量進(jìn)行測定還有酶聯(lián)免疫吸附法和時(shí)間分辨熒光免疫法，這些方法在對植物雌激素的測定方面可以達(dá)到一個(gè)很好的效果，其他方便快速的分析方法需要更進(jìn)一步的研究和使用。

通過以上對比，本研究采用紫外分光光度法分析測定豆腐渣中植物雌激素含量。

4實(shí)驗(yàn)部分

4.1實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

4.1.1儀器

紫外可見分光光度計(jì)、超聲波清洗機(jī)、電熱恒溫水浴鍋、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、電子分析天平、冷卻裝置、粉碎機(jī)、烘箱、10目標(biāo)準(zhǔn)篩。

4.1.2試劑

新鮮豆腐渣（現(xiàn)場制作）、石油醚（沸程55℃～85℃）、染料木素標(biāo)準(zhǔn)品、95%乙醇溶液。

4.2實(shí)驗(yàn)方法

4.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取染料木素標(biāo)準(zhǔn)品1.29mg，置于10mL容量瓶中，以95%乙醇稀釋攪拌至溶解，并用蒸餾水定容至刻度，搖勻靜置，濃度為129mg/L。

4.2.2樣品溶液的制備

現(xiàn)場制作的豆腐渣在55℃鼓風(fēng)機(jī)條件下鼓風(fēng)干燥72h平行至恒重，過10目篩，用石油醚脫脂48h，去除其濾液，烘干濾渣，采用超聲波法提取豆腐渣中植物雌激素。稱取已處理豆腐渣粉4.5g，溶于35mL80%的乙醇溶液中，超聲波提取的溫度為55℃，提取時(shí)間為0.5h，然后將其提取液過濾，置于50mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容至刻度靜置。

4.2.3波長的選擇

分別取適量配置好的標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，用95%乙醇溶液稀釋至合適的濃度，用95%乙醇溶液做空白試驗(yàn)，在紫外區(qū)波長為200～400nm進(jìn)行掃描，采樣的間隔為1nm，勻速采樣，根據(jù)紫外吸收光譜圖確定樣品的測定波長。染料木素標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同波長時(shí)的吸光度見表1，豆腐渣待測樣品液在不同波長時(shí)的吸光度見表2。

4.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確吸取0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于10mL的容量瓶中，各加2.0mL的95%乙醇溶液，再加蒸餾水定容至刻度，搖勻靜置。用2.0mL的95%乙醇溶液加蒸餾水定容至10mL的溶液做空白試驗(yàn)，在260nm處測量溶液的吸光度，重復(fù)3次，測定結(jié)果取其平均值。染料木素標(biāo)準(zhǔn)溶液紫外吸收光譜見圖2。

4.2.5豆腐渣樣品中植物雌激素的測定

準(zhǔn)確移取1.0mL待測樣品溶液，置于10mL的容量瓶中，加2.0mL的95%乙醇，蒸餾水定容至刻度。在260nto處測量定容后溶液的吸光度，重復(fù)3次，測定結(jié)果取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，計(jì)算出植物雌激素的含量。豆腐渣待測樣品液紫外吸收光譜見圖3。

4.3結(jié)果與分析

4.3.1檢測波長的確定

從200～400nm掃描的紫外吸收光譜圖可以看出，染料木素標(biāo)準(zhǔn)品溶液在260nm處有最大紫外吸收峰，樣品液在258nm處有最大紫外吸收峰，二者的最大紫外吸收波長大體一致。由于定量分析建立在染料木素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的基礎(chǔ)上，故取260nm作為紫外檢測波長。

4.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以染料木素濃度為縱坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為C=8.063 4A-0.052 9，R²=0.999 3。

4.3.3精密度試驗(yàn)

精密吸取0.5mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，加入1.0mL的95%乙醇溶液，蒸餾水定容至刻度搖勻靜置。分別取6份定容后的溶液加至石英比色皿中的3/5處，連續(xù)在260nm處測量其吸光度，計(jì)算吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)偏差。以吸光度為縱坐標(biāo)，測定次數(shù)為橫坐標(biāo)繪制曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖5。在線性范圍內(nèi)，6次測量結(jié)果的平均吸光度為0.807 9，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.27%。由于上述誤差在可以接受的范圍內(nèi)，說明試驗(yàn)的重現(xiàn)性較好，紫外分光光度法測定豆腐渣提取物中植物雌激素具有良好的精密度。

4.3.4重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取0.5mL樣品溶液6份，置于6個(gè)10mL容量瓶中，各加1.0mL的95%乙醇溶液，蒸餾水定容至刻度并搖勻靜置。在260nm處測量其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，測定次數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖6。計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。在線性范圍內(nèi)，6次測量的平均吸光度為0.962 6，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.003 4，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差0.35%，試驗(yàn)的重現(xiàn)性較好。

4.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取0.5mL新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣品溶液各6份，置于12個(gè)10mL容量瓶中，各加1.0mL的95%乙醇，蒸餾水定容至刻度。分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h在260nm處測量溶液的吸光度，確定其穩(wěn)定性結(jié)果，以吸光度為縱坐標(biāo)，測定次數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7。標(biāo)準(zhǔn)溶液6次測量結(jié)果的平均吸光度為0.802 2，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.007 6，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.95%；樣品溶液6次測量結(jié)果的平均吸光度為0.962 1，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.002 8，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.29%；表明標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液在24h之內(nèi)是穩(wěn)定的，所以24h之內(nèi)測定提取液的吸光度是可行的。

4.3.6加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取O.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別置于10mL容量瓶中，各加1.0mL的95%乙醇溶液，再分別加入1.0mL樣品溶液，蒸餾水定容至刻度搖勻靜置。將配好的5份溶液分別在260nm下測量吸光度，計(jì)算回收率，加樣回收率的測定結(jié)果見表3?；厥章势骄禐?00.23%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%，表明此方法的回收率良好。

4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本研究建立了一種采用紫外分光光度測定豆腐渣中植物雌激素含量的方法。以染料木素為標(biāo)準(zhǔn)品，在其最大吸收峰260nm處測定豆腐渣中植物雌激素的含量，得回歸方程為C=8.063 4A-0.052 9，R²=0.999 3，線性范圍1.32～11.80μg/mL，平均回收率達(dá)100.23%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.85%。

5結(jié)論

5.1紫外分光光度法的主要特點(diǎn)

5.1.1靈敏度高、選擇性好

由于分光光度法的入射光以棱鏡或光柵為單色器，同時(shí)在狹縫的控制配合下可得一條譜帶很窄的單色光，因此其測定的靈敏度、選擇性和準(zhǔn)確度均比比色法高。紫外分光光度法可測定微量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測定靈敏度可達(dá)1～10μg/m，光度計(jì)定量測定的精密度可達(dá)0.5%，甚至可以更低。

5.1.2不需要樣品分離裝置

由于分光光度法使用的是純度較高的單色光，因此利用此方法測定含有兩種或兩種以上樣品組分時(shí)，不必先進(jìn)行樣品分離處理，只需選用樣品組分特征波長的單色光就可進(jìn)行測定分析。

5.1.3有多種定量方法

分光光度法不僅可采用線性回歸方式進(jìn)行定量，而且可直接通過百分消光系數(shù)與摩爾消光系數(shù)換算公式進(jìn)行定量，因而在定量方式上較比色法更具有實(shí)效性。

5.2植物雌激素相關(guān)研究

中國食品和藥物監(jiān)測局已公開確認(rèn)長期食用大豆產(chǎn)品對心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用，引起了學(xué)術(shù)界對植物雌激素的廣泛關(guān)注。但仍有許多問題需要解決，如不同植物雌激素的生物活性化合物的差異。在研究人類健康和植物雌激素的關(guān)系時(shí)，細(xì)胞分子水平與大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果的預(yù)防和治療作用是不一致的，植物雌激素實(shí)驗(yàn)劑量往往比食物中植物雌激素的含量要多得多，并且使用純度、劑量、類別和其他實(shí)驗(yàn)條件都均不相同，評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)缺乏一致性，對研究工作和植物雌激素的廣泛應(yīng)用增加了一定的難度。但是，隨著植物雌激素在維持人體健康中發(fā)揮著越來越明顯的作用，并具有其他很多雌激素不可替代的許多好處，植物雌激素的應(yīng)用將會(huì)越來越廣泛。

任何事物都有兩面性，植物雌激素也不例外。雖然豆制品一般被認(rèn)為是抑制癌癥、降低有害膽固醇的好東西，從大豆中提取的植物雌激素也被廣泛用于治療女性更年期綜合征，但是最近有科研小組發(fā)現(xiàn)，在一些情況下，豆制品也是有害的，甚至還有可能致癌。實(shí)驗(yàn)顯示，體細(xì)胞有絲分裂過程由于植物雌激素受到了嚴(yán)重影響，這表明大豆植物雌激素及其消化和分解物質(zhì)存在致癌的風(fēng)險(xiǎn)，還需要通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明其是否會(huì)嚴(yán)重影響身體的組織和器官，專家建議消費(fèi)者應(yīng)適當(dāng)服用含有濃縮植物雌激素的藥物。