柴達(dá)木大肥菇多糖對(duì)小鼠的抗疲勞作用

焦迎春，曠慧，吳嘉南，何成日，陳啟和

（1.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧 810016）（2.浙江大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)系，浙江杭州 310058）（3.韓德秀平壤輕工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)研究所，朝鮮平壤）

柴 達(dá) 木 大 肥 菇 （Agaricus bitorquis(Quél.) Sacc.Chaidam）是青藏高原柴達(dá)木盆地特殊生態(tài)環(huán)境條件下的一種野生大型食用真菌，營(yíng)腐生[1]。子實(shí)體肥大，子實(shí)體顏色從白色至暗黃色，平均重400 g～800 g，菌肉肥厚，味道細(xì)嫩鮮美[2]。菌肉結(jié)構(gòu)緊密、含水量低、耐儲(chǔ)運(yùn)，很受當(dāng)?shù)剞r(nóng)牧民的喜愛(ài)，被廣泛采食和銷售。研究表明，柴達(dá)木大肥菇中必需氨基酸含量豐富，占氨基酸總量的35.84%，粗蛋白、粗脂肪、粗纖維含量分別為24.0%，2.10%和17.32%，同時(shí)維生素B2和鉀、磷、鈣和鎂等礦質(zhì)元素含量較高[3]。

運(yùn)動(dòng)性疲勞是一個(gè)極其復(fù)雜的身體變化綜合反應(yīng)過(guò)程，研究證明在長(zhǎng)時(shí)間高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)中，糖原耗盡、血糖濃度降低、乳酸堆積、尿素氮積累、運(yùn)動(dòng)過(guò)程中離子（如K+、Ca2+、Mg2+）等代謝紊亂、氧自由基的積累等因素都能誘發(fā)運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生[4]。通過(guò)有針對(duì)性地補(bǔ)充外源性營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或者藥物活性成分來(lái)延緩或者防止運(yùn)動(dòng)疲勞的發(fā)生，是解決運(yùn)動(dòng)性疲勞的有效途徑之一。目前相關(guān)研究表明，多糖不僅具有抗氧化、抗腫瘤、抗缺氧和預(yù)防心血管疾病等功能[5,6]，還具有抗疲勞作用[7]。Du等[8]研究發(fā)現(xiàn)，從粒毛盤(pán)菌中分離得到的多糖能延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間，具有抗疲勞作用；Li等[9]研究發(fā)現(xiàn)從瑪卡中分離得到的多糖組分MPS-1和MPS-2均能延長(zhǎng)小鼠的游泳時(shí)間，降低小鼠血清中LA、LDH和BUN水平，提高HG水平，表明該兩種多糖具有抗疲勞作用，且其抗疲勞活性呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。Ni等[10]研究表明，西藏地區(qū)生長(zhǎng)的四種藥用植物多糖可以延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間，降低血液中葡萄糖水平和超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，增加血液中尿素氮、甘油三酯、丙二醛水平和乳酸脫氫酶活性，從而表現(xiàn)出抗疲勞作用。

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于柴達(dá)木大肥菇的研究較少，且主要集中于柴木大大肥菇子實(shí)體的營(yíng)養(yǎng)成分分析、菌絲體生物學(xué)特性等相關(guān)的研究，而尚未見(jiàn)關(guān)于柴達(dá)木大肥菇多糖及其生物功能活性的研究。本研究通過(guò)采用熱水浸提法提取柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體多糖、發(fā)酵液多糖和菌絲體多糖，并研究三種多糖對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間及力竭游泳結(jié)束后小鼠血液中Hb、血清中BUN、LDH和LA含量、肝臟中HG含量變化的差異性，研究柴達(dá)木大肥菇多糖的抗疲勞作用，為在青藏高原獨(dú)特生境下這一野生珍稀食用真菌的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠（雌雄各半）購(gòu)自甘肅中醫(yī)學(xué)院，體重 26～28 g。飼養(yǎng)環(huán)境適宜，通風(fēng)，安靜，溫度為18～25 ℃，濕度為35%～50%。

1.1.2 試驗(yàn)材料

野生型柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體和斜面菌種均由青海省農(nóng)林科學(xué)院野生所提供。挑選菇型整齊、發(fā)育成熟、無(wú)病蟲(chóng)害的子實(shí)體進(jìn)行凍干處理，得到的干粉冷藏（4 ℃）備用。

斜面菌種采用PDA斜面在23 ℃下活化15 d，得到的活化菌種4 ℃下保藏備用。

1.1.3 主要試劑

尿素氮（BUN）、氰化高鐵血紅蛋白（Hb）、乳酸（LA）、乳酸脫氫酶（LDH）、肝糖原（HG）等試劑盒，南京建成生物工程研究所；紅景天苷（純度＞99%），國(guó)藥生物制品檢定所；DEAE-52纖維素，北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司；葡聚糖系列標(biāo)準(zhǔn)品(3000、4320、12600、50000和110000 u)，北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1260 infinity HPLC-GPC 系統(tǒng)，安捷倫科技有限公司；Agilent G1362A示差折光檢測(cè)器，安捷倫科技有限公司；DHP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；Eppendorf Centrifuge 5417R小型臺(tái)式冷凍型離心機(jī)，德國(guó) Eppendorf公司；Freezone 2.5冷凍干燥儀，美國(guó)Labconco公司；RV8旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國(guó)IKA公司；電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；TU-181紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；SW-CJ-IQ單人凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

采用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖濃度[11]。稱取干燥至恒重的標(biāo)準(zhǔn)無(wú)水葡萄糖20 mg，加入20 mL蒸餾水，配制成1 mg/mL的葡萄糖溶液。分別吸取0、0.1、0.2、0.3/、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 和 1 mL 葡萄糖溶液，用蒸餾水定容到1 mL，在1 mL多糖溶液中加入0.5 mL 6%苯酚溶液和 5 mL 濃硫酸，沸水浴中加熱15 min后冷卻，于490 nm下測(cè)定吸光值。以葡萄糖濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制準(zhǔn)曲線y=0.0121x+0.0564，R2=0.9988。

1.3.2 多糖提取

1.3.2.1 子實(shí)體多糖（PS）

參考文獻(xiàn)方法，采用熱水浸提法[12]。按料液比=1:20（g/mL）（柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體干粉1 g:蒸餾水20 mL），于 80 ℃下水浴提取 3 h，離心、濃縮，得到子實(shí)體多糖提取物。

1.3.2.2 發(fā)酵液多糖（PFB）

取1 cm大小的斜面菌種2～3塊，接于液體種子培養(yǎng)基中（100 mL/250 mL三角瓶，培養(yǎng)基組成為（g/L）：土豆提取物 200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨 5 g），于搖床避光震蕩培養(yǎng)（20±2 ℃，130±5 r/min）7～8 d。按照10%的接種量將種子液接種于新鮮液體發(fā)酵培養(yǎng)基中（100 mL/250 mL三角瓶，培養(yǎng)基組成（g/L）：土豆 200 g，麥芽糖 35 g，CaCl20.1 g，復(fù)合維生素 B 1 g，蛋白胨5.5 g），放入搖床避光震蕩培養(yǎng)（培養(yǎng)條件同上）[13]。將發(fā)酵液混合體系進(jìn)行過(guò)濾，濾液即為發(fā)酵液。按料液比=1:5（mL/mL）（柴達(dá)木大肥菇發(fā)酵液 1 mL:蒸餾水 5 mL），于 80 ℃下水浴提取 3 h 后離心濃縮。

1.3.2.3 菌絲體多糖（PM）

將1.3.2.2中液體培養(yǎng)后的發(fā)酵液混合體系進(jìn)行過(guò)濾，得到的固形菌絲體用蒸餾水沖洗3遍，放入干燥箱中進(jìn)行烘干，用無(wú)菌處理后的研缽將菌絲體研碎，稱重。按料液比=1:10（g/mL）（柴達(dá)木大肥菇菌絲體干粉 1 g:蒸餾水 10 mL），于 80 ℃下水浴提取 3 h 后離心濃縮。

1.3.3 多糖處理

脫色：采用活性炭進(jìn)行脫色[14]。在100 mL多糖液體中加入6 g活性炭水浴（60 ℃）脫色5 min，邊攪拌邊脫色。

脫蛋白：Sevage法脫蛋白[15]。V多糖溶液:VSevage試劑=1:2配置成混合溶液經(jīng)過(guò)劇烈振搖 20～30 min脫蛋白，VSevage試劑=V正丁醇:V氯仿=1:5。蛋白質(zhì)變性后形成凝膠沉淀，通過(guò)離心分離后分出水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。從得到的粗多糖經(jīng)過(guò)脫蛋白后，計(jì)算柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液、菌絲體中多糖含量分別為：

15.25±0.13 g/100 g、11.98±0.09 g/100 mL、48.14±0.11 g/100 g。

純化：分別稱取脫蛋白后的子實(shí)體、發(fā)酵液、菌絲體粗多糖 100 mg溶解于 5 mL去離子水中，用DEAE-52纖維素層析柱層析。用去離子水洗脫，流速0.5 mL/min，分部收集，每管5 mL，苯酚-硫酸法檢測(cè)各管多糖含量（波長(zhǎng)490 nm處吸光度），分別收集不同的組分，合并相同組分，50 ℃減壓蒸發(fā)濃縮，透析48 h后將透析液真空冷凍干燥，得純化后的柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液、菌絲體多糖凍干后冷藏，備用。

1.3.4 多糖分子量測(cè)定

1.3.4.1 色譜條件

色譜條件：Agilent PL aquagel-OH 40（8 μm，300 mm×7.5 mm）凝膠色譜柱；柱溫35 ℃；流動(dòng)相為純水；流速0.8 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。檢測(cè)器為示差折光檢測(cè)器（RID）。

1.3.4.2 多糖標(biāo)準(zhǔn)品分子量大小測(cè)定

采用高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）測(cè)定多糖分子量大小。將一系列葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品用流動(dòng)相溶解，配制質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻，過(guò)0.45 μm水系納濾膜后按照1.3.4.1中的色譜條件測(cè)定系列葡聚糖標(biāo)品的分子量，以標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以相應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=-0.1732x+7.6534（R2=0.9951），根據(jù)回歸方程計(jì)算多糖相對(duì)分子質(zhì)量。 1.3.4.3 樣品分子量測(cè)定

分別將柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液、菌絲體多糖用流動(dòng)相配成質(zhì)量濃度為2 mg/mL的樣液，經(jīng)0.45 μm水系濾膜過(guò)濾后按照1.3.4.1中的色譜條件測(cè)定多糖的分子量。根據(jù)其保留時(shí)間和多糖分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液、菌絲體多糖的分子量大小。

1.3.5 多糖對(duì)小鼠的抗疲勞活性

1.3.5.1 動(dòng)物分組

將 100只小鼠隨機(jī)分為空白組（Control），紅景天苷組（Rhodiola），子實(shí)體組（PS），發(fā)酵液組（PFB）和菌絲體組（PM），每組20只，雌雄各半。分別將純化后的子實(shí)體多糖、發(fā)酵液多糖和菌絲體多糖中3個(gè)組分按照自然比例混合，得到純化后的子實(shí)體混合多糖、發(fā)酵液混合多糖和菌絲體混合多糖，喂養(yǎng)小鼠。每天在灌胃前兩個(gè)小時(shí)停止喂食，按照100 mg/kg的劑量對(duì)5組實(shí)驗(yàn)小鼠分別進(jìn)行灌胃35 d，空白組以同等體積的生理鹽水進(jìn)行灌胃。 1.3.5.2 小鼠的力竭游泳實(shí)驗(yàn)

參考West等[17]方法，略有改進(jìn)。在第35 d灌胃結(jié)束后，60 min后稱量每只小鼠的體重，在水桶（高30 cm，直徑25 cm）內(nèi)放入一定量的水，水的高度為20 cm，并保持水溫在25 ℃，一桶一鼠。當(dāng)小鼠頭部露出水面超過(guò)10 s，同時(shí)漂浮不動(dòng)時(shí)視為體力耗竭，立即記錄小鼠游泳時(shí)間。

1.3.5.3 生化指標(biāo)測(cè)定

小鼠游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即用乙醚麻醉，采樣，測(cè)定生化指標(biāo)。

（1）全血的采集：采用摘眼球法收集全血，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)Hb含量。

（2）血清的采集：將收集的全血進(jìn)行低溫離心（4 ℃，8000 r/min，10 min），上清液（即為血清）放入-20 ℃冰箱中保存，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清中LD、LDH、BUN含量。

（3）肝臟的收集：待全血取出后，立即將小鼠肝臟取出，用低溫生理鹽水漂洗3次，濾紙吸干后稱量每只小鼠肝臟重量，將小鼠肝臟組織放入-20 ℃冰箱中保存，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)HG含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以平均值（x）+標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示，并分別采用SPSS 19.0軟件和Origin 8.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析和作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 PS、PFB、PM分子量的測(cè)定

由表1可知，從柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液和菌絲體中均分離得到3種多糖組分，但3種多糖的分子量大小存在差異。在3種多糖組分中，從子實(shí)體多糖分離出來(lái)的3個(gè)多糖組分分子量均較大，其次是菌絲體多糖，而發(fā)酵液多糖組分的分子量相對(duì)最小。其中 PS-Ⅰ、PFB-Ⅰ、PM-Ⅰ所占的比例較大，其次為PS-Ⅱ、PFB-Ⅱ、PM-Ⅱ，而 PS-Ⅲ、PFB-Ⅲ、PM-Ⅲ所占的比例最小。

圖1 PS（a）、PFB（b）、PM（c）的HPGPC 圖譜Fig.1 HPGPC chromatograms of PS (a), PFB (b) and PM (c)

表1 PS、PFB、PM分子量的測(cè)定Table 1 Determination of the molecular weights of PS, PFB and PM fractions

2.1.2 PS、PFB、PM 對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

運(yùn)動(dòng)耐力是抗疲勞活性的一個(gè)直接反映指標(biāo)，小鼠力竭游泳試驗(yàn)被廣泛用做檢測(cè)多糖的抗疲勞活性[18]。由圖2可知，與空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組（紅景天苷組）相比，子實(shí)體多糖組、發(fā)酵液多糖組、菌絲體多糖組的小鼠力竭游泳時(shí)間均顯著延長(zhǎng)（p＜0.05）；3種多糖組中小鼠力竭游泳時(shí)間從大到小的排列順序?yàn)椋喊l(fā)酵液多糖＞菌絲體多糖＞菌絲體多糖，且三組之間具有顯著差異性（p＜0.05）。菌絲體多糖組的小鼠力竭游泳時(shí)間最長(zhǎng)，為 89.97±4.38 min，分別是空白組和紅景天苷組小鼠力竭游泳時(shí)間的3.03倍和1.81倍。發(fā)酵液多糖組和子實(shí)體多糖組小鼠的力竭游泳時(shí)間分別是空白組的2.33倍和1.93倍。結(jié)果表明，柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液和菌絲體多糖可以延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間，具有抗疲勞活性，且菌絲體的抗疲勞活性優(yōu)于發(fā)酵液多糖和子實(shí)體多糖。

圖2 PS、PFB、PM對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響Fig.2 Effect of PS、PFB、PM on the forced swimming time of mice

2.1.3 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血液中Hb含量的影響

圖3 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血液中Hb含量的影響Fig.3 Effect of PS, PFB, PM on Hb in blood serum of mice

劇烈運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體對(duì)氧氣的需求量增加，在運(yùn)動(dòng)疲勞中，Hb水平可以作為在機(jī)體生理變化的一個(gè)重要反映指標(biāo)[19]。由圖3可知，與空白對(duì)照組相比，3種多糖組的小鼠血清中Hb含量均有所提高，其中菌絲體多糖組的小鼠血液中Hb含量最高（517.48±101.69 mg/mL），顯著大于空白對(duì)照（236.72±15.20 mg/mL）和陽(yáng)性對(duì)照組（345.12±15.28 mg/mL）。子實(shí)體和發(fā)酵液多糖組的小鼠血液中Hb含量無(wú)顯著差異，分別為（355.32±49.53 mg/mL）和（417.87±53.94 mg/mL）（p＞0.05）；子實(shí)體多糖組的小鼠血液中Hb含量顯著高于空白對(duì)照組（p＜0.05），但發(fā)酵液多糖組小鼠血液中Hb含量與空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組均無(wú)顯著差異（p＞0.05）。

2.1.4 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血清中BUN、LA和LDH含量的影響

2.1.4.1 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血清中BUN含量的影響

圖4 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血液中BUN含量的影響Fig.4 Effect of PS, PFB, PM on BUN in blood serum of mice

BUN、LA和LDH的變化可以直接反應(yīng)機(jī)體疲勞情況的變化，也可用來(lái)評(píng)價(jià)抗疲勞活性的有效反應(yīng)指標(biāo)。在運(yùn)動(dòng)耐力過(guò)程中，BUN含量顯著下降表明機(jī)體能有效緩解運(yùn)動(dòng)疲勞[20]。由圖4可知，與空白對(duì)照組相比（16.28±0.04 mmol/L），子實(shí)體多糖組、發(fā)酵液多糖組、菌絲體多糖組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中 BUN含量均顯著下降（p＜0.05），且分別下降了 65.78%、69.14%、72.79%和 25.68%。3種多糖組小鼠血清中BUN 含量均無(wú)顯著差異（p＞0.05），但均顯著高于與陽(yáng)性對(duì)照組（p＜0.05）。

2.1.4.2 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血清中LA和LDH含量的影響

圖5 PS、PFB、PM對(duì)小鼠血液中LA和LDH含量的影響Fig.5 Effect of PS, PFB, PM on LA and LDH in blood serum of mice

在高強(qiáng)度的劇烈運(yùn)動(dòng)中，血清中LA含量通常會(huì)升高，同時(shí)乳酸與運(yùn)動(dòng)過(guò)程中肌肉力量的減弱和肌肉酸痛的產(chǎn)生密切相關(guān)[21]。LDH可以催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)化，在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，LDH活性的增加和LA含量的下降有助于緩解運(yùn)動(dòng)疲勞，提高運(yùn)動(dòng)耐力[21]。由圖 5 可知，與空白對(duì)照組相比（24.32±2.65 mmol/L），3種多糖組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中LA含量均顯著下降（p＜0.05），且分別下降了25.21%、34.29%、37.34%和37.95%；雖然3組多糖組與陽(yáng)性對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異（p＞0.05），但多糖組小鼠血清中LA含量低于陽(yáng)性對(duì)照組。同時(shí)與空白對(duì)照組相比，3種多糖組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中 LDH活性均顯著升高（p＜0.05），且分別升高了 34.47%、38.29%、43.72%和27.03%。雖然3組多糖組與陽(yáng)性對(duì)照組之間均無(wú)顯著差異（p＞0.05），但陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中LDA含量低于3種多糖實(shí)驗(yàn)組，且菌絲體多糖組小鼠血清中LDA 含量最高，為（14.30±0.69 KU/L）。

2.1.5 PS、PFB、PM 對(duì)小鼠肝臟中 HG 含量的影響

圖6 PS、PFB、PM對(duì)小鼠肝臟中HG含量的影響Fig.6 Effect of PS, PFB, PM on HG in mice liver

在劇烈運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，除了葡萄糖，HG是主要的能源物質(zhì)，增加肝糖原儲(chǔ)備有利于提高運(yùn)動(dòng)耐力和運(yùn)動(dòng)能力[22]。由圖6可知，與空白對(duì)照組相比（17.61±1.29 mg/g），子實(shí)體多糖組、發(fā)酵液多糖組和菌絲體多糖組的小鼠肝臟中肝糖原的含量顯著升高（p＜0.05），且菌絲體多糖組的小鼠肝臟中肝糖原含量最高（127.65±18.34 mg/g），顯著高于子實(shí)體多糖組和發(fā)酵液多糖組（分別為 47.14±7.87、53.72±0.18 mg/g）（p＜0.05）。子實(shí)體多糖組和發(fā)酵液多糖組小鼠肝臟中肝糖原含量大于陽(yáng)性對(duì)照組，但無(wú)顯著差異（p＞0.05）。

2.2 討論

柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體、發(fā)酵液和菌絲體多糖的分子量大小不同，它們的抗疲勞活性具有差異性，該差異性可能與多糖的結(jié)構(gòu)、分子量大小相關(guān)。Li等[9]研究表明，從瑪卡中分離得到的兩種多糖（MPS-1和MPS-2）平均分子量分別為 7.6×103u 和 6.7×103u；MPS-1是由木糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖組成，而MPS-2是由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖構(gòu)成；在小鼠的被迫游泳實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，分子量較小的 MPS-2比MPS-1抗疲勞活性更強(qiáng)。

研究表明，多糖的抗疲勞作用機(jī)理可能與多糖能緩解生物體氧化應(yīng)激損傷有關(guān)，相關(guān)研究表明，在抗疲勞實(shí)驗(yàn)中，多糖會(huì)顯著影響 MDA、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽酶（GSH-Px）水平[23,24]。Wang等[24]研究表明，人參多糖具有抗疲勞作用，可以提高LDH、肌酸磷激酶（CK）、葡葡萄糖和MDA水平，降低血清中TG和GSH-Px水平，其抗疲勞作用機(jī)理可能是通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化酶的活性來(lái)減慢脂質(zhì)氧化過(guò)程，從而減弱細(xì)胞膜的氧化損害。同時(shí)他們推測(cè)，血清中TG水平的降低和葡萄糖水平的持續(xù)升高可能表明運(yùn)動(dòng)過(guò)程中合成的 TG被機(jī)體不斷利用來(lái)提供能量，導(dǎo)致糖原和葡萄糖積累，從而可以緩解運(yùn)動(dòng)疲勞。在劇烈運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，Hb含量的升高可以幫助提高小鼠細(xì)胞內(nèi)氧氣運(yùn)輸?shù)哪芰υ鰪?qiáng)，從而提高細(xì)胞的有氧呼吸作用[25]。隨著細(xì)胞的有氧呼吸作用增強(qiáng)，運(yùn)動(dòng)過(guò)程中積累的LA被消耗或LA的合成作用減弱，同時(shí)伴隨著 LDH的活性增強(qiáng)和葡萄糖的積累，該過(guò)程有利于緩解運(yùn)動(dòng)過(guò)程中肌肉疲勞和緊張，從而提高運(yùn)動(dòng)耐力[26]。目前對(duì)柴達(dá)木大肥菇的基礎(chǔ)研究比較少，而對(duì)柴達(dá)木大肥菇活性多糖的生物學(xué)功能研究地更少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)柴達(dá)木大肥菇多糖具有抗疲勞活性，但是其抗疲勞作用機(jī)理還有待深入研究。下一步研究可以從多糖分子結(jié)構(gòu)與抗疲勞活性之間的構(gòu)效關(guān)系、運(yùn)動(dòng)過(guò)程中脂類代謝、能量代謝、葡萄糖代謝和相關(guān)抗氧化酶活性的變化等方面來(lái)闡明柴達(dá)木大肥菇多糖的抗疲勞作用機(jī)理。

3 結(jié)論

通過(guò)比較柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體多糖、發(fā)酵液多糖和菌絲體多糖對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間及力竭游泳結(jié)束后小鼠血液中Hb、血清中BUN、LDH和LA含量、肝臟中HG含量變化的差異性，結(jié)果表明柴達(dá)木大肥菇子實(shí)體多糖、發(fā)酵液多糖和菌絲體多糖通過(guò)延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間、提高小鼠血液中 Hb、HG和血清中LDH含量、降低小鼠血清中BUN和LA含量，從而提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力、緩解運(yùn)動(dòng)疲勞。說(shuō)明該3種多糖具有抗疲勞作用，且菌絲體多糖的抗疲勞效果優(yōu)于子實(shí)體多糖和發(fā)酵液多糖，但是柴達(dá)木大肥菇多糖的抗疲勞作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。