中藥消毒乳劑滅菌實(shí)驗(yàn)研究

趙文嘉，趙 欣，金宏飛，吳品昌

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)本科生，遼寧 沈陽 110847；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)本科生，遼寧 沈陽 110847；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110847）

許多中藥在體外有較強(qiáng)的抗菌抗病毒效果，尤其是一些芳香化濕、清熱解毒的中藥有廣泛的抗菌作用和體內(nèi)外抗病毒效果。本研究中用蒼術(shù)等7味中藥提取液進(jìn)行滅菌實(shí)驗(yàn)，報(bào)道如下。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)儀器。乙醇冷凝回流提取裝置、乙醇減壓蒸餾回收裝置、電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、超凈工作臺(tái)（梅州市紀(jì)元應(yīng)用研究所）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、標(biāo)準(zhǔn)恒溫水浴、721型分光光度計(jì)、真空干燥箱（鞏義予華儀器設(shè)備有限公司）、EBAl2高速離心機(jī)（14000rpm）、30W紫外線燈、手動(dòng)壓力噴壺。

實(shí)驗(yàn)藥材。蒼術(shù)、板藍(lán)根、金銀花、連翹、廣藿香、薄荷、桂枝、天然香料熏衣草精油，均采購自安徽市安國藥材公司，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥實(shí)驗(yàn)室鑒定符合用藥要求。

實(shí)驗(yàn)菌種和培養(yǎng)基。金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸桿菌、白色念珠球菌，綠膿桿菌，均由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)生化實(shí)驗(yàn)室保存，提供。普通肉湯（瓊脂）培養(yǎng)基，主要用于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌培養(yǎng)。沙保氏（瓊脂）培基，主要用于白色念珠菌和乙型溶血性鏈球菌培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長期的各菌液接種于營養(yǎng)瓊脂斜面37℃進(jìn)行24h培養(yǎng)（白色念珠菌28℃進(jìn)行48h培養(yǎng)）。新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物，用10g/L蛋白胨磷酸緩沖液洗下菌苔，麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，將菌液調(diào)整至2×106/mL，供實(shí)驗(yàn)用［1］。

2 中草藥消毒乳劑的制備

中草藥有效成分的提取。取蒼術(shù)、板藍(lán)根、金銀花等6味中藥，粉碎成20目，按比例配方、混勻，置于5L的圓底燒瓶中，分別加入8倍量水，浸泡6h，煎煮lh，提取3次，合并提取液，濃縮，加入95%乙醇，便加邊攪拌使含醇量為70%。減壓濃縮，調(diào)pH至中性，得濃縮液，制成中草藥抗菌劑，備用。廣藿香、桂枝采用蒸餾法，提取揮發(fā)油，將所得揮發(fā)油用無水硫酸鈉進(jìn)行干燥備用。

乳化劑的篩選和制備。選擇一定量聚山梨酯-80與山梨醇酐單油酸酯-80按不同比例進(jìn)行混合作為乳化劑，分別用離心法觀察乳化劑的穩(wěn)定性，比較乳化結(jié)果，選擇最佳乳化劑。將篩選好的乳化劑加入揮發(fā)油中，再次離心，分別用室溫儲(chǔ)存、低溫儲(chǔ)存、高溫儲(chǔ)存方法測(cè)試其乳濁液的穩(wěn)定性［1］。

3 試管法抗菌實(shí)驗(yàn)

取一定量消毒乳劑，加入l%氯化鈉，再加入二倍量水，加熱至沸使其破乳，置冰箱中冷卻使其分層，分取水層，加入0.5%聚山梨酯-80，制成等比水溶液作為樣品原液。校準(zhǔn)pH至7.4～7.6，離心，分裝，高壓滅菌，冷卻后4℃冰箱內(nèi)保存，備用。試管法抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。1到6號(hào)試管中加菌液和消毒原液，并對(duì)消毒乳劑進(jìn)行稀釋，第7管不加菌作為藥液對(duì)照，第8管不加藥作為菌液生長情況對(duì)照，置37℃溫箱中培養(yǎng)24h，觀察各管生長情況［2］。

表1 中藥消毒乳劑抗菌效果

凡能抑制試驗(yàn)菌生長的最高藥物稀釋度為該藥物對(duì)試驗(yàn)菌的最低抑制濃度見表2［3］。然后分別將未生長菌的培養(yǎng)液再接種于適當(dāng)?shù)沫傊桨迳希缗囵B(yǎng)后重新長出試驗(yàn)菌，則說明僅有抑菌作用，如沒有細(xì)菌長出則說明該藥有殺菌作用，也可依次找出最小殺菌濃度。

表2 藍(lán)草空氣消毒乳抗菌測(cè)定結(jié)果

4 實(shí)驗(yàn)室空間抗菌實(shí)驗(yàn)

選擇密封良好、容積約1m2的金屬消毒柜，控制溫度37℃，濕度飽和，以1.5kg/cm2的氣壓向柜內(nèi)霧噴菌液10min（噴菌為0.5mL/min），噴菌30min后，以1kg/cm2的氣壓向柜內(nèi)霧噴消毒乳劑20min（噴藥量為1mL/min），進(jìn)行滅菌，并同時(shí)在一對(duì)照組消毒柜內(nèi)以相同實(shí)驗(yàn)條件霧噴含2%乙醇溶液，兩組消毒時(shí)間均定于消毒前10min，消毒后10min、30min和60min，空氣采樣3次，對(duì)每一菌種進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)。采樣以負(fù)壓從出氣孔抽取柜內(nèi)氣體1min，并使生理鹽水進(jìn)行滅菌。采樣液經(jīng)10倍連續(xù)稀釋后吸取0.1mL接種到普通瓊脂平板并用無菌玻璃推子涂勻，待菌液吸收后倒轉(zhuǎn)平板培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)菌落［4］。

中草藥消毒乳劑在噴藥后60min，對(duì)乙型溶血型鏈球菌的殺滅率為97.6%，金黃色葡萄球菌的殺滅率為91.8%，對(duì)白色念珠球菌的殺滅率為93.7%，對(duì)大腸桿菌的殺滅率為55.8%，對(duì)綠膿桿菌的殺滅率為90.8%（見表3）。對(duì)不同菌株的減少量進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果F=15.22，P＜0.01，說明中草藥消毒乳劑對(duì)不同菌株的抑菌能力差異非常顯著，根據(jù)表3中消毒60min后殺滅率數(shù)據(jù)排序，中草藥消毒乳劑對(duì)受試各菌株的抑菌能力從高到底依次為：乙型溶血型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌（見表3）［4］。中藥消毒成本低、毒副作用小、刺激性小，所以中藥消毒乳劑有廣闊的應(yīng)用前景。

表3 中藥消毒乳化劑抗菌實(shí)驗(yàn)