• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法測定人尿中9種鄰苯二甲酸酯代謝物

    2018-09-05 12:54:30楊艷偉林少彬胡小鍵
    色譜 2018年9期
    關(guān)鍵詞:鄰苯二甲酸代謝物內(nèi)標(biāo)

    張 續(xù), 邱 天, 付 慧, 楊艷偉, 趙 峰, 林少彬, 胡小鍵

    (中國疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所, 北京 100021)

    鄰苯二甲酸酯(PAEs)是一類重要的人工合成化學(xué)品,被廣泛添加到各種工業(yè)產(chǎn)品、醫(yī)療器械、食品包裝及個(gè)人護(hù)理品中[1-3]。PAEs已被證明是一類內(nèi)分泌干擾物,具有潛在的生殖毒性、發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性及肝臟毒性[4-6]。流行病學(xué)結(jié)果表明,PAEs暴露與多種疾病相關(guān),如導(dǎo)致幼童生殖器發(fā)育畸形、早熟、增加體重指數(shù)、導(dǎo)致哮喘及過敏反應(yīng)、增加糖尿病患病率等[7-9]。為此,包括我國在內(nèi)的多個(gè)國家都對PAEs的使用進(jìn)行了限制[10]。

    我國是PAEs生產(chǎn)、銷售量大國,消耗量亦呈逐年上漲趨勢。PAEs在使用過程中極易遷移至環(huán)境中,目前在我國大氣、土壤、水體等環(huán)境介質(zhì)中均有檢出[11-14]。日常生活中,食品、呼吸、飲水、用藥以及護(hù)膚品使用都是攝入PAEs的重要途徑。PAEs在人體內(nèi)的半衰期短,可迅速水解為活性較強(qiáng)的單酯,并進(jìn)一步發(fā)生氧化或羥基化反應(yīng),再經(jīng)葡萄糖醛酸化后經(jīng)尿液排出。因此,美國、加拿大在其國家人體生物監(jiān)測計(jì)劃中,將尿中PAE代謝物作為重要的生物標(biāo)志物,用于評估PAEs的人體內(nèi)暴露[15,16]。而建立準(zhǔn)確、可靠的分析測定方法對于開展PAEs暴露評估十分重要。

    在國外,尿中PAE代謝物測定主要采用在線固相萃取液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法[17,18]。該方法由美國疾病預(yù)防控制中心建立,并成功用于美國人體生物監(jiān)測項(xiàng)目。近期,國內(nèi)建立了全自動固相萃取串聯(lián)質(zhì)譜測定10種PAE代謝物的測定方法[19]。因上述方法的固相萃取裝置在國內(nèi)普及率不高,導(dǎo)致方法推廣應(yīng)用時(shí)受到一定限制。2011年,本實(shí)驗(yàn)室[20]利用離線固相萃取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜建立了人尿中11種PAE代謝物的測定方法。該方法對鄰苯二甲酸單辛酯(MOP)、鄰苯二甲酸單異癸酯(MDP)和鄰苯二甲酸單異壬酯(MNP)等長鏈PAEs具有較好保留回收,但對鄰苯二甲酸單甲酯(MMP)和鄰苯二甲酸單乙酯(MEP)等短鏈PAEs的靈敏度不高,樣品測定時(shí)受到雜質(zhì)干擾大。但相關(guān)研究[21,22]顯示,人群實(shí)際尿液中的MOP、MDP、MNP等長鏈PAE代謝物含量檢出率極低。

    基于上述研究背景,本文建立了尿中9種常見PAE代謝物的離線固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好,能有效分離多種同分異構(gòu)體,可用于尿液中9種常見PAE代謝物的測定。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 儀器與試劑

    Waters Acqutiy UPLC-class型高效液相色譜儀(美國沃特世公司); API 4000型三重四極桿質(zhì)譜儀,配電噴霧離子(ESI)源(美國AB公司);純水儀(美國頗爾公司);漩渦震蕩儀(美國Scientific Industries公司);電子天平(美國丹佛儀器公司)。Waters 0.45 μm GHP濾膜,Waters ACQUITY UPLC BEH Phenyl色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm), Waters OASIS MAX固相萃取柱(60 mg, 3 mL)(美國沃特世公司); Supelco VISIDRY固相萃取裝置(美國Supelco公司)。

    MMP、MEP、鄰苯二甲酸單芐酯(MBZP)、鄰苯二甲酸單環(huán)己酯(MCHP)、鄰苯二甲酸單(2-乙基-5-氧己基)酯(MEOHP)、鄰苯二甲酸單(2-乙基-5-羥己基)酯(MEHHP)、鄰苯二甲酸單甲酯內(nèi)標(biāo)(MMP-[13C4])、鄰苯二甲酸單乙酯內(nèi)標(biāo)(MEP-[13C4])、鄰苯二甲酸單芐酯內(nèi)標(biāo)(MBZP-[13C4])、鄰苯二甲酸單環(huán)己酯內(nèi)標(biāo)(MCHP-[13C4])、鄰苯二甲酸單(2-乙基-5-氧己基)酯內(nèi)標(biāo)(MEOHP-[13C4])、鄰苯二甲酸單(2-乙基-5-羥己基)酯內(nèi)標(biāo)(MEHHP-[13C4])、鄰苯二甲酸單正丁酯內(nèi)標(biāo)(MNBP-[13C4])、鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯內(nèi)標(biāo)(MEHP-[13C4]),質(zhì)量濃度均為100 mg/L,純度均大于95%,購于美國Cambridge Isotope Laboratories。鄰苯二甲酸單異丁酯(MIBP)、鄰苯二甲酸單正丁酯(MNBP)、鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯(MEHP),純度均大于95%,購于美國Accu Standard公司。鄰苯二甲酸單異丁酯內(nèi)標(biāo)(MIBP-[2D4])純度大于98%,購于加拿大TRC公司;含MEP、MIBP、MNBP、MEOHP、MEHHP、MEHP、MBZP的吸煙人群尿中有機(jī)污染物標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)(簡稱標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì))購于美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院(NIST)。

    葡萄糖醛酸酶(85 000 U/mL)液體酶和葡萄糖醛酸酶固體酶購于美國Sigma公司;乙腈購于德國Merck公司;乙酸銨和甲酸(均為HPLC級)購置于美國CNW公司;乙酸(純度大于99.8%)購于美國Fluka公司;氨水(25%~28%,體積分?jǐn)?shù),下同)購于美國Damas-beta公司;乙酸乙酯(HPLC級)購于美國Fisher公司;純水為純水儀所制超純水,18.2 MΩ·cm。

    1.2 溶液配制

    準(zhǔn)確稱取MIBP、MNBP、MEHP及MIBP-[2D4]各0.010 0 g,用甲醇定容至10.0 mL。用甲醇稀釋10倍,配制成100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別取MMP、MEP、MCHP、MBZP、MIBP、MEOHP、MEHHP和MEHP標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 mL, MNBP標(biāo)準(zhǔn)儲備液3.0 mL,用甲醇定容至25.0 mL,配制成9種PAE代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液,于4 ℃保存待用,其中MNBP為12.0 mg/L,其余8種物質(zhì)均為4.0 mg/L。

    分別取MMP-[13C4]、MEP-[13C4]、MCHP-[13C4]、MBZP-[13C4]、MIBP-[2D4]、MEOHP-[13C4]、MEHHP-[13C4]、MEHP-[13C4]和MNBP-[13C4]內(nèi)標(biāo)儲備液1.0 mL,用甲醇定容至25.0 mL,配制成4.0 mg/L的9種PAE代謝物內(nèi)標(biāo)使用液,于4 ℃保存。

    用甲醇將PAE代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋為2.0、1.0、0.5、0.1、0.05和0.01 mg/L標(biāo)準(zhǔn)序列溶液,4 mg/L內(nèi)標(biāo)使用液稀釋為1 mg/L。分別向7支5 mL離心管中加入2 mL人工尿液,加入100 μL上述標(biāo)準(zhǔn)序列溶液、40 μL 1 mg/L內(nèi)標(biāo)溶液、20 μL葡萄糖醛酸酶、500 μL 1 mol/L乙酸銨溶液(pH=6.5),與樣品一起進(jìn)行前處理后,標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的質(zhì)量濃度分別為0、1、5、10、50、100和200 μg/L(MNBP為此曲線質(zhì)量濃度的3倍),內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度為40 μg/L。

    1.3 實(shí)驗(yàn)條件與方法

    尿液酶解:冷凍尿液先在4 ℃冰箱中解凍過夜再放置室溫,充分震蕩后取2 mL,加入500 μL乙酸銨溶液(1 mol/L, pH 6.5),加入40 μL 1 mg/L同位素內(nèi)標(biāo),加入20 μL葡萄糖醛酸酶,充分震蕩后在37 ℃水浴中避光酶解2 h,加入1 mL 25%~28%氨水,充分震蕩后以1 500 r/min的速度離心10 min,取上清進(jìn)行固相萃取。

    固相萃取:依次用3 mL乙腈和3 mL純水活化OASIS MAX固相萃取柱,上清液依靠自然重力過柱(速度保持在1 mL/min);后依次用3 mL水和3 mL乙腈快速淋洗,空氣吹干8 min;用3 mL含2%(體積分?jǐn)?shù),下同)甲酸的乙腈-乙酸乙酯(1∶1, v/v)洗脫。洗脫液氮吹近干,用5%乙腈水溶液定容至1 mL,樣品渦旋混勻30 s后過0.45 μm GHP濾膜,上機(jī)待測。

    色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH Phenyl (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm)。流動相A為0.1%乙酸水溶液,流動相B為0.1%乙酸乙腈溶液。梯度洗脫:0~14.5 min, 95%A~50%A; 14.5~18.0 min, 50%A~10%A; 18.0~19.0 min, 10%A; 19.0~19.5 min, 10%A~95%A; 19.5~23.0 min, 95%A。流速為0.3 mL/min,柱溫箱溫度為室溫,進(jìn)樣量為10 μL。

    離子化方式:ESI-;檢測方式:多離子反應(yīng)監(jiān)測(MRM);碰撞氣(CAD)壓強(qiáng):3.4×104Pa;氣簾氣(CUR)壓強(qiáng):2.1×105Pa;霧化氣(GS1)壓強(qiáng):1.7×105Pa;加熱氣(GS2)壓強(qiáng):2.1×105Pa;噴霧電壓(IS): -4 500 V;去溶劑溫度(TEM): 450 ℃;掃描時(shí)間:50 ms。9種PAE代謝物及對應(yīng)同位素內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間、離子對、碰撞電壓(CE)和去簇電壓(DP)等參數(shù)見表1。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 前處理優(yōu)化

    2.1.1酶的選擇

    以標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)為樣品,比較不添加酶、添加固體酶和添加液體酶3種方式對標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)包含的7種PAE代謝物測定值的影響。結(jié)果顯示,添加葡萄糖醛酸酶后PAE代謝物測定值高于不添加酶的測定值,說明在前處理過程中對樣品進(jìn)行去葡萄糖酸基酶解處理十分必要。添加液體酶可獲得與標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)更為接近的測定結(jié)果(見表2)。因此本文選擇添加液體酶。此外,PAE代謝物在尿中以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)共存。為探討9種PAE代謝物在尿中的不同存在形式,選擇10個(gè)不同來源的尿液樣品,分別對其進(jìn)行不加酶和加酶處理,并測定兩種處理方式下的9種PAE代謝物質(zhì)量濃度C1(不加酶)和C2(加酶)。當(dāng)C1/C2大于0.5時(shí),說明該類物質(zhì)主要以游離態(tài)形式存在;當(dāng)C1/C2小于0.5時(shí),則表示該類物質(zhì)主要以結(jié)合態(tài)存在。結(jié)果如圖1所示,MMP、MEP、MBZP在尿液中的存在形式以游離態(tài)為主,而MEHP以結(jié)合態(tài)為主。

    表 1 9種鄰苯二甲酸酯(PAE)代謝物及同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

    * Quantitative ion.

    表 2 PAE代謝物標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)在不同酶解方式中的質(zhì)量濃度(n=3)

    圖 1 不酶解及酶解處理后尿中8種PAE代謝物的質(zhì)量濃度比值Fig. 1 Ratio of mass concentrations of the eight PAE metabolites in the urine with or without enzymatic treatment C1: mass concentration of the PAE metabolites with enzymatic treatment (μg/L); C2: mass concentration of the PAE metabolites without enzymatic treatment (μg/L). MCHP was not detected.

    2.1.2酶解時(shí)間的確定

    分別用液體葡萄糖醛酸酶水解標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)1.5、2和24 h,比較酶解時(shí)間對PAE代謝物測定結(jié)果的影響。以MEHHP為例,酶解1.5和2 h時(shí)測定標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)中MEHHP的質(zhì)量濃度分別為(20.6±0.5)和(23.6±0.8) μg/L。與水解1.5 h相比,水解2 h時(shí)的MEHHP質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)中MEHHP的參考質(zhì)量濃度(24.8±0.40) μg/L更為接近。而在酶解24 h時(shí),MEHHP的質(zhì)量濃度為(23.1±0.96) μg/L,與酶解2 h的質(zhì)量濃度相比差異不顯著。因此本文酶解時(shí)間最終確定為2 h。

    2.1.3凈化條件的優(yōu)化

    目前用于尿中PAE代謝物凈化處理的固相萃取柱主要有Waters OASIS HLB柱[23]、VARIAN NEXUS柱[20]和Waters OASIS MAX柱[19]。Waters OASIS WAX柱雖未被用于尿中PAE代謝物測定,但可用于指甲、毛發(fā)中的PAE代謝物前處理凈化[24]。比較了上述幾種常用固相萃取柱對PAE代謝物的凈化效果。結(jié)果顯示,上述4種固相萃取柱對9種PAE代謝物均具有較好的保留特性。但Waters OASIS HLB需要兩步凈化,以有效去除尿中的堿性有機(jī)物及鹽成分,操作步驟較為繁瑣[23]。使用VARIAN NEXUS固相萃取柱時(shí),MMP、MEP兩種代謝物的色譜峰較寬,基線不穩(wěn),樣品中目標(biāo)化合物含量低時(shí)色譜峰形差,影響定量結(jié)果。使用Waters OASIS WAX柱對樣品進(jìn)行前處理后,收集了上樣和淋洗過程的過濾液并上機(jī)測定,結(jié)果顯示,淋洗液中可檢出目標(biāo)化合物,這表明在前處理過程中存在目標(biāo)化合物損失。使用同樣方法測定Waters OASIS MAX柱的上樣及淋洗過濾液,未見目標(biāo)化合物檢出。洗脫液經(jīng)氮?dú)獯蹈?復(fù)溶后上機(jī)測定,各目標(biāo)化合物均具有較好的色譜峰形。因此,本文選擇Waters OASIS MAX柱對樣品進(jìn)行固相萃取凈化。

    Waters OASIS MAX柱為混合陰離子交換柱,具有陰離子交換和反相吸附兩種模式。因此,向樣品中加入氨水,可促進(jìn)PAE代謝物離子化,增加其在Waters OASIS MAX柱上的保留能力。通過比較乙腈、甲醇和含2%甲酸的甲醇水溶液(2∶3, v/v)3種不同淋洗液,發(fā)現(xiàn)以3 mL乙腈淋洗后可獲得相對較好的加標(biāo)回收率。在洗脫液中加入適量甲酸可調(diào)節(jié)Waters OASIS MAX柱pH值,有助于PAE代謝物的洗脫。因此,進(jìn)一步比較了含1%、2%和4%甲酸的乙腈-乙酸乙酯(1∶1, v/v)的洗脫效果,結(jié)果顯示,用含2%甲酸的乙腈-乙酸乙酯(1∶1, v/v)洗脫能夠獲得相對滿意的加標(biāo)回收率。最后比較了不同用量的洗脫液(1~6 mL)對洗脫效果的影響,確定使用3 mL含2%甲酸的乙腈-乙酸乙酯(1∶1, v/v)溶液進(jìn)行洗脫。

    2.2 液相色譜方法的優(yōu)化

    含苯基的硅膠鍵合固定相對PAE類物質(zhì)具有良好的分離效果。因此,本文比較了CSH Fluoro-Phenyl柱、BEH Phenyl柱和Phenyl柱對9種PAE代謝物的分離效果。結(jié)果顯示,Phenyl柱對大部分PAE代謝物分離效率良好,但不能實(shí)現(xiàn)MIBP和MNBP兩種同分異構(gòu)體的分離,其保留時(shí)間接近,色譜圖呈現(xiàn)交叉峰,相互之間影響定量分析。CSH Fluoro-Phenyl柱和BEH Phenyl柱均能實(shí)現(xiàn)PAE代謝物的有效分離。但與BEH Phenyl柱相比,目標(biāo)化合物在CSH Fluoro-Phenyl柱上的保留較長。在實(shí)際工作中,使用BEH Phenyl柱比CSH Fluoro-Phenyl柱節(jié)約1/3工作時(shí)間。因此,選用BEH Phenyl柱對9種PAE代謝物進(jìn)行分離。

    PAE代謝物是一系列具有極性差異的羧基化合物,在中性或堿性條件下可出現(xiàn)不同程度的解離。因此,在流動相中加入適量乙酸可抑制羧酸解離,增強(qiáng)目標(biāo)化合物在色譜柱上的保留。通過調(diào)研文獻(xiàn)[19,22],本文采用0.1%乙酸水溶液和0.1%乙酸乙腈作為流動相,對目標(biāo)化合物進(jìn)行梯度洗脫,以實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的有效分離。實(shí)際尿液中,MBP以MIBP和MNBP兩種同分異構(gòu)體狀態(tài)共存,分別代表了不同種類PAE物質(zhì)的暴露。其中MIBP是DIBP(鄰苯二甲酸二異丁酯)的代謝產(chǎn)物,而MNBP是DNBP(鄰苯二甲酸二正丁酯)和BZBP(鄰苯二甲酸二芐基酯)的代謝產(chǎn)物。通過對兩種同分異構(gòu)體的有效分離,可反映出人體受到不同PAEs的暴露情況。在目前國內(nèi)的研究方法[22,25,26]中,尚未見到能將MIBP和MNBP進(jìn)行有效分離。本文通過優(yōu)化梯度洗脫程序,實(shí)現(xiàn)了MIBP和MNBP的有效分離和精準(zhǔn)定量(見圖2)。

    圖 2 9種PAE代謝物在尿液中的提取離子色譜圖Fig. 2 Extracted ion chromatograms of the nine PAE metabolites in the urine sample MCHP and MBZP showed spiked (2 μg/L) human urine sample.

    2.3 基質(zhì)效應(yīng)評價(jià)及定量方法選擇

    利用HPLC-MS/MS進(jìn)行復(fù)雜基質(zhì)的污染物測定時(shí),其復(fù)雜基質(zhì)可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響,因此,在方法建立時(shí)需進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)(ME)評價(jià)[24]。本方法中,由于無法獲得不含PAE代謝物的實(shí)際尿液基質(zhì),因此利用人工尿液代替實(shí)際尿液基質(zhì)。分別用人工尿液和乙腈溶液配置兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,質(zhì)量濃度為0、0.39、0.78、1.57、3.13、6.25、12.5、25、50、100和200 μg/L,將人工尿液配置的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行前處理,與乙腈標(biāo)準(zhǔn)曲線一同上機(jī)測定,按文獻(xiàn)[27]中基質(zhì)效應(yīng)計(jì)算方法對絕對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評估。結(jié)果顯示,9種PAE代謝物最終計(jì)算的|ME|范圍為0.81%~15.42%,說明絕對基質(zhì)效應(yīng)良好。在評估相對基體效應(yīng)時(shí),選擇了6份不同來源的實(shí)際尿液,將上述尿液進(jìn)行前處理后,得到6個(gè)不同的尿液基質(zhì)。取490 μL上述尿液基質(zhì),加入10 μL 100 μg/L9種PAE代謝物混合內(nèi)標(biāo)。通過計(jì)算9種同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜響應(yīng)峰面積,評估其相對基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果顯示9種PAE代謝物在不同來源的尿液基質(zhì)中質(zhì)譜信號強(qiáng)度穩(wěn)定,峰面積精密度為8.3%,說明相對基質(zhì)效應(yīng)穩(wěn)定。

    基質(zhì)效應(yīng)評估結(jié)果顯示,在進(jìn)行定量檢測時(shí)可用標(biāo)準(zhǔn)曲線代替基質(zhì)匹配工作曲線。然而,本文在利用標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配工作曲線對NIST質(zhì)控樣進(jìn)行定量分析時(shí),發(fā)現(xiàn)以人工尿液為基質(zhì)的基質(zhì)匹配工作曲線對NIST質(zhì)控樣進(jìn)行定量分析更為準(zhǔn)確。雖然基質(zhì)效應(yīng)評價(jià)中表示基質(zhì)效應(yīng)可忽略,但為獲得更為準(zhǔn)確的測定結(jié)果,本文采用人工尿液基質(zhì)匹配的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行定量計(jì)算。

    此外,評估了外標(biāo)定量法的準(zhǔn)確性。結(jié)果顯示,標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)在前處理過程中出現(xiàn)不同程度的損失,無法呈現(xiàn)良好線性。而選擇性質(zhì)相似的同位素作為內(nèi)標(biāo),能夠提供準(zhǔn)確的定性和定量信息,校正方法誤差,顯著提高方法的準(zhǔn)確度和精密度。

    2.4 線性范圍、方法檢出限和定量限

    標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合過程中采用不同的權(quán)重方式會對標(biāo)準(zhǔn)曲線定量結(jié)果造成影響。因此,本文比較了不加權(quán)重、1/x和1/x23種權(quán)重方式對定量結(jié)果的影響。結(jié)果顯示,以1/x2權(quán)重模式下計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線能更好兼顧低濃度標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn),而高濃度標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)不受影響。這說明當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍跨度較大時(shí),在標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合時(shí)需將權(quán)重方式考慮在內(nèi)。

    表 3 9種PAE代謝物回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限及線性范圍

    Y: relative peak area ratio;X: mass concentration, μg/L.

    表 4 尿中9種PAE代謝物在3個(gè)加標(biāo)水平的回收率和精密度(n=6)

    * Spiked levels of MNBP were 6, 30 and 150 μg/L.

    2.5 回收率及精密度

    以實(shí)際尿液進(jìn)行3個(gè)加標(biāo)水平的9種PAE代謝物加標(biāo)回收試驗(yàn),加標(biāo)水平分別為2、10和50 μg/L(MNBP為6、30和150 μg/L),每個(gè)水平進(jìn)行6次平行試驗(yàn),進(jìn)行前處理后上機(jī)測定。其回收率和精密度結(jié)果如表4所示,9種PAE代謝物的回收率分別為84.1%~122%,精密度為4.5%~14.3%。在同一天及不同天對實(shí)際尿液樣品進(jìn)行前處理后上機(jī)分析測定(n=6),以確定方法的日內(nèi)精密度和日間精密度,結(jié)果如表4所示,9種PAE代謝物的日內(nèi)精密度為1.2%~9.3%,日間精密度為2.3%~10.1%。

    2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

    隨機(jī)選擇15份人尿樣本,分別在不同保存條件下對處理的樣本進(jìn)行穩(wěn)定性考察,測定樣品質(zhì)量濃度與第一天測定結(jié)果比較,如表5所示,在-20 ℃保存14天后,樣品測定值為0 h測定值的91.5%~107%,說明樣品可在-20 ℃中保存14天。反復(fù)凍融3次的結(jié)果顯示MMP和MBZP的準(zhǔn)確度與0 h測定值相比較差,說明反復(fù)凍融影響樣品測定,可能與低濃度物質(zhì)降解或揮發(fā)有關(guān)。

    表 5 9種PAE代謝物的穩(wěn)定性(n=15)

    ND: not detected.

    2.7 實(shí)際樣品測定

    利用本方法測定50份北京市人群尿液樣本。結(jié)果表明,除MCHP未檢出外,其余8種PAE均可檢出。除MBZP外,其余7種物質(zhì)檢出率為100%,結(jié)果見表6。測定結(jié)果顯示,人尿中MNBP和MIBP的濃度較高,其中位值分別為219和56.7 μg/L, MEOHP和MEHHP等代謝物處于同一水平,中位值分別為13.3和17.8 μg/L。MMP、MEP和MEHP 3種代謝物存在水平較低,分別為8.90、9.09和6.95 μg/L。上述結(jié)果表明,北京市城市居民存在廣泛的PAE暴露,需引起一定關(guān)注。

    表 6 PAE代謝物在人尿中的測定值

    P25-P70: mass concentration of PAE metabolites from 25th to 70th percentile. ND: not detected.

    3 結(jié)論

    本文建立了測定人尿液中9種PAE代謝物的UPLC-MS/MS分析方法??疾炝嗣傅姆N類、酶用量、酶解時(shí)間和凈化過程等,采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量。本方法操作簡便,結(jié)果可靠,檢出限低,重現(xiàn)性好,已應(yīng)用于生物樣本的檢測,為今后開展人體生物監(jiān)測項(xiàng)目奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    鄰苯二甲酸代謝物內(nèi)標(biāo)
    阿爾茨海默病血清代謝物的核磁共振氫譜技術(shù)分析
    氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測洗滌劑中的甲醇
    QuEChERS-氣相色譜-質(zhì)譜法測定植物油中16種鄰苯二甲酸酯
    有機(jī)熱載體熱穩(wěn)定性測定內(nèi)標(biāo)法的研究
    GC內(nèi)標(biāo)法同時(shí)測定青刺果油中4種脂肪酸
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:32
    青菜對鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的積累和代謝初探
    核磁共振磷譜內(nèi)標(biāo)法測定磷脂酰膽堿的含量
    柱前衍生化結(jié)合LC-MSn分析人尿中茶堿及其代謝物
    HPLC-MS/MS法分析乙酰甲喹在海參中的主要代謝物
    鄰苯二甲酸二丁酯的收縮血管作用及其機(jī)制
    男女免费视频国产| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩中字成人| 免费观看性生交大片5| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久精品国产综合久久久 | 又黄又粗又硬又大视频| 男的添女的下面高潮视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲国产精品专区欧美| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| av网站免费在线观看视频| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美国产精品一级二级三级| 精品福利永久在线观看| 久久这里有精品视频免费| 日日爽夜夜爽网站| 久久精品国产自在天天线| www.av在线官网国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美xxⅹ黑人| 欧美日韩亚洲高清精品| 咕卡用的链子| 国产成人精品婷婷| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 久久99精品国语久久久| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产高清国产精品国产三级| 全区人妻精品视频| 久久精品国产亚洲av天美| 91精品国产国语对白视频| 少妇的逼好多水| 久久精品国产亚洲av涩爱| 老女人水多毛片| 国产成人aa在线观看| 搡老乐熟女国产| 日本黄大片高清| 如何舔出高潮| 午夜91福利影院| 人人妻人人澡人人看| 免费观看av网站的网址| 在线观看一区二区三区激情| 国产成人免费无遮挡视频| 免费av中文字幕在线| 超色免费av| 老熟女久久久| 下体分泌物呈黄色| 亚洲av成人精品一二三区| 国产在线免费精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 一级毛片我不卡| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线观看国产h片| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲综合精品二区| 午夜福利视频精品| 99久久精品国产国产毛片| 久久韩国三级中文字幕| 国产成人免费观看mmmm| 久久99蜜桃精品久久| 国产成人精品福利久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 女人久久www免费人成看片| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 中文字幕制服av| 亚洲人与动物交配视频| 久久综合国产亚洲精品| 99香蕉大伊视频| 国产不卡av网站在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 深夜精品福利| 亚洲四区av| 高清av免费在线| 国产一区二区三区av在线| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 在线看a的网站| 亚洲国产看品久久| 亚洲国产成人一精品久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 黑人猛操日本美女一级片| 日本色播在线视频| 国产成人一区二区在线| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产综合精华液| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 男人舔女人的私密视频| 性色avwww在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 色吧在线观看| 久久99精品国语久久久| 五月开心婷婷网| 内地一区二区视频在线| 国产精品久久久久久久久免| 最近手机中文字幕大全| 色哟哟·www| 七月丁香在线播放| 母亲3免费完整高清在线观看 | 2021少妇久久久久久久久久久| 伦理电影免费视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产又色又爽无遮挡免| 中文字幕制服av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久热在线av| 国产男人的电影天堂91| 桃花免费在线播放| 视频区图区小说| 边亲边吃奶的免费视频| 九草在线视频观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 日韩av免费高清视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美xxⅹ黑人| 大陆偷拍与自拍| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久久国产欧美日韩av| 飞空精品影院首页| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产激情久久老熟女| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 最黄视频免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 制服丝袜香蕉在线| 免费大片黄手机在线观看| videosex国产| 色5月婷婷丁香| 午夜福利乱码中文字幕| kizo精华| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产精品.久久久| 在线观看免费视频网站a站| 欧美丝袜亚洲另类| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲欧洲日产国产| 91精品国产国语对白视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 伦理电影免费视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 各种免费的搞黄视频| 国产激情久久老熟女| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产探花极品一区二区| 婷婷色麻豆天堂久久| 男女无遮挡免费网站观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 美女内射精品一级片tv| 午夜久久久在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 成人国产av品久久久| 欧美精品亚洲一区二区| 美女主播在线视频| 久久免费观看电影| 男女下面插进去视频免费观看 | 人妻少妇偷人精品九色| 免费看av在线观看网站| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产最新在线播放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 美女内射精品一级片tv| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 五月天丁香电影| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日韩视频在线欧美| 国产伦理片在线播放av一区| 黄色 视频免费看| 曰老女人黄片| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 男女边摸边吃奶| 两性夫妻黄色片 | 美女国产视频在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 只有这里有精品99| 中文欧美无线码| 国产精品成人在线| 午夜福利网站1000一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 最近中文字幕2019免费版| 欧美最新免费一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日本中文国产一区发布| kizo精华| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产成人精品在线电影| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 成年人免费黄色播放视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 女性生殖器流出的白浆| 在线观看美女被高潮喷水网站| 一级片'在线观看视频| 国产精品偷伦视频观看了| 永久免费av网站大全| 日本av免费视频播放| 日韩伦理黄色片| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品国产一区二区久久| 少妇的逼好多水| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 在线观看国产h片| 一本大道久久a久久精品| a级毛色黄片| av线在线观看网站| 国产日韩欧美视频二区| 国产69精品久久久久777片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 韩国av在线不卡| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲少妇的诱惑av| 日韩电影二区| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲一区二区三区欧美精品| 中文天堂在线官网| 九九在线视频观看精品| 最近中文字幕2019免费版| 街头女战士在线观看网站| 日韩精品有码人妻一区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧洲日产国产| 成人国语在线视频| 我的女老师完整版在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产一区二区在线观看av| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色毛片三级朝国网站| 久久久久久久精品精品| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 9热在线视频观看99| 99九九在线精品视频| 水蜜桃什么品种好| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲中文av在线| 色94色欧美一区二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 伊人亚洲综合成人网| 欧美精品一区二区大全| 免费观看a级毛片全部| 在线观看三级黄色| 777米奇影视久久| 国产成人91sexporn| 精品福利永久在线观看| 超色免费av| www.色视频.com| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产精品一区二区在线观看99| 日本黄大片高清| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产一区二区三区av在线| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲国产精品一区三区| 精品少妇内射三级| 久久人人97超碰香蕉20202| 18禁观看日本| 另类亚洲欧美激情| 国产在线视频一区二区| 国产精品国产三级专区第一集| 精品人妻偷拍中文字幕| 桃花免费在线播放| 黄色毛片三级朝国网站| 97人妻天天添夜夜摸| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩欧美一区视频在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费大片黄手机在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 国产国语露脸激情在线看| 激情五月婷婷亚洲| 欧美xxxx性猛交bbbb| 丁香六月天网| 国产精品.久久久| 国产成人精品久久久久久| 国产 一区精品| 搡老乐熟女国产| 亚洲色图综合在线观看| 51国产日韩欧美| 水蜜桃什么品种好| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品.久久久| 一区二区三区精品91| 极品人妻少妇av视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲五月色婷婷综合| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久久久久久久免费av| 只有这里有精品99| 国产视频首页在线观看| 少妇熟女欧美另类| 亚洲国产精品国产精品| 黄色配什么色好看| 一区在线观看完整版| 爱豆传媒免费全集在线观看| 成人无遮挡网站| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久av网站| 国产黄色免费在线视频| 国产片内射在线| 久久 成人 亚洲| 18禁观看日本| 伦精品一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 精品国产一区二区久久| av卡一久久| 美女视频免费永久观看网站| 两个人免费观看高清视频| 国产免费一级a男人的天堂| 成人影院久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本91视频免费播放| 成年美女黄网站色视频大全免费| 色哟哟·www| 久久精品久久久久久久性| 国产乱人偷精品视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 人成视频在线观看免费观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 婷婷色综合www| 中文字幕制服av| 尾随美女入室| 国产精品国产三级专区第一集| 日本爱情动作片www.在线观看| 99热6这里只有精品| 亚洲国产看品久久| 国产精品.久久久| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 在现免费观看毛片| 99久久人妻综合| 久久国产精品大桥未久av| 精品国产乱码久久久久久小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 欧美日韩亚洲高清精品| 热99久久久久精品小说推荐| 精品熟女少妇av免费看| 各种免费的搞黄视频| 亚洲av免费高清在线观看| 高清毛片免费看| 欧美激情 高清一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 婷婷色综合www| 国产色爽女视频免费观看| 国产欧美亚洲国产| 精品国产乱码久久久久久小说| 七月丁香在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品一区二区在线不卡| 99热全是精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品无大码| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美人与性动交α欧美软件 | 亚洲在久久综合| 欧美日韩成人在线一区二区| 一区二区三区乱码不卡18| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品久久久精品久久久| 亚洲第一av免费看| 两性夫妻黄色片 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成人毛片60女人毛片免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 超碰97精品在线观看| 一级片免费观看大全| 91久久精品国产一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 日本色播在线视频| 亚洲高清免费不卡视频| 在线精品无人区一区二区三| 国产成人91sexporn| 亚洲高清免费不卡视频| videos熟女内射| 久久久国产精品麻豆| 五月玫瑰六月丁香| 下体分泌物呈黄色| 国产又色又爽无遮挡免| 黄片无遮挡物在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 人妻系列 视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费看不卡的av| 两性夫妻黄色片 | 久久久久网色| 免费人成在线观看视频色| 看免费成人av毛片| 少妇人妻 视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品,欧美精品| 久久久久人妻精品一区果冻| 成人二区视频| 男女下面插进去视频免费观看 | 成年av动漫网址| 免费高清在线观看日韩| 啦啦啦在线观看免费高清www| 曰老女人黄片| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品视频女| 成人影院久久| 久久久久久久大尺度免费视频| 99国产综合亚洲精品| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久久久精品免费免费高清| 91国产中文字幕| 国产1区2区3区精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲人与动物交配视频| 午夜福利,免费看| 亚洲av男天堂| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 伦精品一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 99热网站在线观看| 亚洲精品第二区| 国产成人精品福利久久| 国产男女内射视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 免费观看av网站的网址| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 韩国av在线不卡| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产成人av激情在线播放| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲经典国产精华液单| 久久久精品94久久精品| 国产精品蜜桃在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 久久久久久久精品精品| 国产xxxxx性猛交| 免费人妻精品一区二区三区视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 美女中出高潮动态图| 极品人妻少妇av视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲国产av新网站| 熟女人妻精品中文字幕| 90打野战视频偷拍视频| 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 视频在线观看一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 免费人成在线观看视频色| 99热国产这里只有精品6| 国产片特级美女逼逼视频| 黄色配什么色好看| 高清av免费在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 黄色一级大片看看| 高清av免费在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 伊人亚洲综合成人网| 免费观看性生交大片5| 久久久精品免费免费高清| 国产精品免费大片| 成年动漫av网址| 人人妻人人澡人人看| 久久精品夜色国产| 国产男女超爽视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 精品亚洲成国产av| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 五月开心婷婷网| 久久 成人 亚洲| 熟女av电影| 大码成人一级视频| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品乱久久久久久| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品国产三级专区第一集| 国产成人aa在线观看| freevideosex欧美| a级毛片黄视频| 欧美日韩综合久久久久久| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲国产精品999| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲精品一二三| 多毛熟女@视频| 天天影视国产精品| 看非洲黑人一级黄片| 人妻系列 视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品成人在线| 99热全是精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 性色avwww在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 99久国产av精品国产电影| 亚洲经典国产精华液单| 久久热在线av| 国产xxxxx性猛交| 中国三级夫妇交换| 91成人精品电影| 大片电影免费在线观看免费| 日本91视频免费播放| 日本午夜av视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 交换朋友夫妻互换小说| 下体分泌物呈黄色| 久久久久久久久久久免费av| 人人澡人人妻人| av视频免费观看在线观看| 久久久国产一区二区| 久久这里有精品视频免费| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品人妻久久久久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国国产精品蜜臀av免费| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲精品国产色婷婷电影| a级片在线免费高清观看视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 午夜视频国产福利| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲,欧美精品.| 人人澡人人妻人| 免费看不卡的av| 男女边吃奶边做爰视频| 高清在线视频一区二区三区| 欧美bdsm另类| 美女视频免费永久观看网站| 男人操女人黄网站| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜日本视频在线| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品福利永久在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲av日韩在线播放| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 午夜91福利影院| 五月开心婷婷网| 国产免费视频播放在线视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 宅男免费午夜| 国产片内射在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产av精品麻豆| 免费观看性生交大片5| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 青春草亚洲视频在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品一区二区在线不卡| 成年动漫av网址| 欧美国产精品一级二级三级| 宅男免费午夜| 在线观看美女被高潮喷水网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 欧美+日韩+精品| av在线播放精品| 日本黄色日本黄色录像| 日日爽夜夜爽网站| 国产av精品麻豆| 免费黄色在线免费观看| 亚洲精品,欧美精品| 另类精品久久| 国产成人免费观看mmmm| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费大片18禁| 亚洲成人av在线免费| 亚洲四区av|