雞禽流感和新城疫雙針免疫試驗

許 靜，曹志全，周 歌，邵向群，彭 園，糜曉霞，錢海燕，陳林佳，陸紅霞

（1.江蘇省儀征市畜牧獸醫(yī)站，江蘇儀征211400；2.江蘇省儀征市新集鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 儀征211403；3.江蘇省儀征市青山鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇 儀征211417）

0 引言

在國際動物衛(wèi)生法典中，禽流感和高致病性禽流感同屬A類?。?］。目前高致病性禽流感和新城疫在我國仍是危害養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染病，加上市場流通日益活躍，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了嚴峻的考驗。為了減少防疫人員的工作量，提高工作效率，減少由于疫苗免疫帶來的應激，選擇合適的疫苗，采取合理的免疫程序以促使雞群的這兩種疾病的免疫抗體水平能夠長時間的維持在較高的水平顯得尤為重要。實際生產(chǎn)中常使用的新城疫Ⅰ系苗毒力較強，對雛雞有一定的致病性，60日齡以上的雞才可以使用，且該苗不能用于產(chǎn)蛋雞，可引起產(chǎn)蛋量大幅下降。新城疫CS株疫苗，免疫效果與新城疫Ⅰ系苗相似，但不能用于初生雛雞和產(chǎn)蛋雞。新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）毒力低，可在雛雞、青年雞、產(chǎn)蛋雞上使用，但維持的時間較短［2］。新城疫油乳劑滅活苗可用于雛雞預防新城疫，且不受母源抗體的干擾，能長時間的維持較高水平抗體，使產(chǎn)蛋雞安全地度過整個產(chǎn)蛋期，抵抗新城疫強毒的侵襲［3］，但價格昂貴。針對上述情況為達兩病的免疫效果，同時減少基層防疫人員的工作量，本實驗將禽流感滅活苗和新城疫同時雙針接種雛雞，新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免，用新城疫油乳劑滅活苗二免，以了解新城疫油乳劑滅活疫苗和禽流感滅活疫苗同時免疫的效果。結(jié)果顯示，試驗中采取的免疫程序能使兩種疾病的免疫抗體長時間的維持在較高的水平。

1 試驗材料和方法

1.1 試驗疫苗

重組禽流感H5亞型三價滅活苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）：鄭州乾元浩股份有限公司生產(chǎn)，批號2016067；新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）：廣西麗源生產(chǎn)，批號20160424；新城疫油乳劑滅活苗揚州威克生產(chǎn)，批號1604039，疫苗按使用說明書的條件進行保存、運輸和使用。

1.2 試驗雞的選擇

隨機選擇儀征市新集鎮(zhèn)農(nóng)戶飼養(yǎng)的4群相似日齡的雛雞，分為 A、B、C、D組。

1.3 主要試驗儀器和檢測抗原

采血器、微量加樣器，振蕩器，96孔V型一次性反應板，禽流感抗原 H5亞型 RE-6株（2016008）、H5亞型 RE-7株（2016017）、H5亞型 RE-8株（2016006），哈爾濱維科生產(chǎn)，禽流感H5亞型RE-6株HI試驗陽性血清（2016002），禽流感H5亞型RE-7株HI試驗陽性血清（2016001），禽流感 H5亞型RE-8株HI試驗陽性血清（2016005），哈爾濱維科生產(chǎn)，禽流感H5亞型陰性血清（2017001），哈爾濱維科生產(chǎn)，雞新城疫血凝抑制抗原（20160401），青島易邦生產(chǎn)，新城疫陽性血清（20160904），青島易幫生產(chǎn)，新城疫陰性血清（20160701），青島易幫生產(chǎn)。

1.4 免疫試驗設計

A、B、C、D組的雞分別于15日齡采集血樣，用血凝（HA）／血凝抑制（HI）試驗檢測雞的禽流感和新城疫母源抗體，結(jié)果為0～2log2。A、B、C組在36日齡左右進行禽流感和雞新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）雙針免疫，劑量為禽流感滅活苗0.5L／羽肌肉注射，雞新城Ⅳ系苗（Lasota株）2羽份／羽滴鼻；間隔3周后再進行禽流感和雞新城疫油乳劑滅活苗雙針免疫，劑量為禽流感滅活苗1L／羽肌肉注射，雞新城疫油乳劑滅活苗1L／羽肌肉注射。D組僅使用禽流感和雞新城疫油乳劑滅活苗免疫雙針免疫1次，劑量為禽流感滅活苗0.5L／羽肌肉注射，雞新城疫油乳劑滅活苗0.5L／羽肌肉注射。具體分組和免疫情況見表1。

（1）免疫接種試驗。在首次接種后的1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月分別采集血液，用HA／HI試驗檢測其免疫抗體效價。每次采集的血樣及時分離血清，保存在冰柜-20℃冷凍待檢。

（2）免疫反應臨床觀察。在接種疫苗后注意觀察雞的臨床狀態(tài)，并做記錄。

表1 試驗雞禽流感、新城疫雙針免疫程序 只、d

表2 各組首免后不同時期的抗體合格率%

2 試驗結(jié)果與分析

A、B、C組雛雞在36日齡左右同時進行禽流感和雞新城疫Ⅳ系苗首免，在首免3～4周后同時進行禽流感滅活苗和新城疫油乳劑滅活苗二免；D組雛雞僅在51日齡同時進行一次禽流感滅活苗和新城疫油乳劑滅活苗免疫。首免后在30 d、60 d、90 d、120 d、180 d分別采集血液，檢測禽流感和新城疫的血凝抑制價，各組首免后不同時期抗體合格率見表2。

2.1 血樣禽流感血凝抑制價

免疫30 d時，A、B、C 3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，抗體滴度都在7log2以上，D組血樣的禽流感免疫保護率為100%，抗體滴度在都7log2以上；免疫60 d，A、B、C3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，且70%的血樣抗體滴度在10log2，D組血樣的禽流感免疫保護率為100%，且30%的血樣抗體滴度在10log2；免疫90 d時，A、B、C 3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，D組血樣的禽流感免疫保護率為100%；免疫120 d時，A、B、C 3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，抗體滴度在6Log2以上，D組血樣的禽流感免疫保護率為100%，D組血樣的抗體滴度在4～6log2；免疫150 d時，A、B、C 3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，且抗體滴度仍然在6log2以上，D組血樣的禽流感免疫保護率為40%，此時已缺乏足夠的保護力；免疫180 d時，A、B、C 3組血樣的禽流感免疫保護率為100%，且抗體滴度在4～6log2，D組血樣的禽流感免疫保護率為小于40%。試驗結(jié)果顯示禽流感滅活苗免疫在僅免疫1次，劑量0.5 mL／羽時，能提供有效的免疫保護達4個月，需要在第5個月加強免疫，分析其原因，可能是由于油乳劑滅活疫苗的特性［4］，實際接種劑量0.5 mL／羽時，有效劑量達不到要求，所以實際防疫過程中建議劑量視情況略增至0.7～1 mL／羽，可提供至少6個月的有效免疫保護，達到預期效果。

2.2 血樣新城疫血凝抑制價

免疫30 d時，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為0%、100%、20%，D組血樣的新城疫免疫保護率為90%；免疫60 d，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為100%，且血樣抗體滴度均為在10log2，D組血樣的新城疫免疫保護率為100%，且血樣抗體滴度在6log2以上；免疫90 d時，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為100%，D組血樣的新城疫免疫保護率為100%；免疫120 d時，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為100%，抗體滴度仍然在7log2以上，D組血樣的新城疫免疫保護率為100%，D組血樣的抗體滴度在4～6log2；免疫150 d時，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為100%，且抗體滴度仍然在7log2以上，D組血樣的新城疫免疫保護率為80%；免疫180 d時，A、B、C 3組血樣的新城疫免疫保護率為100%，且抗體滴度在6log2以上，D組血樣的新城疫免疫保護率為60%。試驗結(jié)果顯示新城疫的免疫在僅適用新城疫滅活苗免疫1次，劑量為0.5 mL／羽，可提供有效的免疫保護達5個月；在使用新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）首免，劑量2羽份／羽，使用新城疫油乳劑滅活苗二免，劑量為1 mL／羽，可提供有效的免疫保護至少達6個月。

3 結(jié)論

根據(jù)以上試驗結(jié)果，在秋季散養(yǎng)戶集中防疫時對雛雞實施禽流感免疫時，選擇首免劑量為0.5 mL／羽，同時進行新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）首免，劑量為2羽份／羽，3～4周后進行禽流感二免，劑量為1 mL／羽；同時使用新城疫油乳劑滅活苗二免，劑量為1 mL／羽。成年雞實施禽流感免疫首免劑量為1ML／羽，同時進行新城疫油乳劑滅活苗免疫0.7 mL／羽。在免疫21 d后，進行免疫抗體監(jiān)測，結(jié)果均能達到符合農(nóng)業(yè)部要求的禽群抗體合格率。對于商品蛋雞實施14日齡首次免疫禽流感滅活苗加新城疫油乳劑滅活苗0.5 mL／羽，間隔3～4周后再用禽流感滅活苗加新城疫油乳劑滅活苗進行二免，劑量1 mL／羽，110日齡用禽流感滅活苗加新城疫油乳劑滅活苗進行加強免，劑量1 mL／羽，可為產(chǎn)蛋期提供有效的抗體保護。

通過這樣的免疫程序，既能減少防疫員對面廣量大散養(yǎng)家禽的防疫工作量，又可達到禽流感和新城疫的免疫效果，還能減少因免疫接種帶來的禽群的應激反應等問題，提高了養(yǎng)殖者的經(jīng)濟效益，達到了事半功倍的效果。