ELISA法和膠體金試紙條法在乙肝表面抗原檢測中的應用研究

鄔劍 李慧玲

摘 要：目的 研究ELISA法和膠體金試紙條法（GICA）在乙肝表面抗原檢測中的準確度和特異性，分析方法的應用價值。方法 選取本院婦幼保健院檢驗科在2016年5月～2017年12月收集的共計460例血樣標本，分別運用ELISA法及GICA法進行檢測，比較檢測結果。結果 ELISA法乙肝表面抗原陽性率為47.61%，GICA法陽性率為41.96%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。ELISA法及GICA法在對乙型病毒性肝炎表面抗原檢測結果上具有密切的相關性（P<0.05）。ELISA法靈敏度和特異度均高于GICA法（P<0.05）。結論 ELISA法在陽性率、特異度及靈敏度等指標上均較GICA法高，但由于GICA法器材更為小巧、簡潔直觀，且無需大型設備輔助，較為廣泛地應用于普查及急診前檢查中。

關鍵詞：乙肝表面抗原；膠體金；乙型病毒性肝炎

中圖分類號：R446.6 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.09.050

文章編號：1006-1959（2018）09-0155-02

Abstract：Objective To study the accuracy and specificity of ELISA and colloidal gold strip method in the detection of hepatitis B surface antigen.Methods A total of 460 blood samples were collected from laboratory Department of Maternal and Child Health Hospital from May 2016 to December 2017.ELISA and GICA methods were used to detect and compare the results.Results The positive rate of HBsAg in ELISA was 47.61%，and the positive rate in GICA was 41.96%，the difference was statistically significant （P<0.05）.The ELISA method and GICA method have close correlations on the results of surface antigen detection of hepatitis B virus（P<0.05）.The sensitivity and specificity of ELISA were higher than those of GICA（P<0.05）.Conclusion The ELISA method is more accurate than the GICA method in terms of positive rate，specificity，and sensitivity，but the GICA method is more compact，simple，and intuitive，and does not require large-scale equipment，and is widely used in census and pre-emergency tests.

Key words：Hepatitis B surface antigen；Colloidal gold；Viral hepatitis type B

乙型病毒性肝炎（viral hepatitis type B）是由乙型肝炎病毒引起的以肝臟病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病，簡稱乙肝，在全球的發(fā)病率呈逐漸增高趨勢，據(jù)統(tǒng)計，全球大約存在20億乙肝病毒攜帶者[1]，乙肝是目前世界范圍感染率最高的疾病。目前對乙肝的檢測主要采用時間分辨熒光免疫法、酶聯(lián)免疫吸附法、微粒子酶免疫分析法以及膠體金免疫層析法。在檢測方法的準確度方面，尚未達成共識。我院采用酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA法與膠體金免疫層析法GICA進行檢測，為比較兩種方法的檢測準確性，現(xiàn)對我院搜集的460例乙肝樣本進行回顧性分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取佳木斯市婦幼保健院檢驗科在2016年5月～2017年12月收集的共計460例血樣標本，標本收集后分別采取ELISA法，以及GICA，在結果得出之前，血樣標本存放于-20 ℃的醫(yī)用冰柜中。

1.2儀器與方法

1.2.1儀器與設備 GICA試劑：艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的乙肝表面抗原試劑盒（20121215）；ELISA試劑：上海科華生物技術有限公司生產(chǎn)的乙肝表面抗原試劑盒（20121107）；血液分析儀：原子高科股份有限公司生產(chǎn)Sysmex4500血液分析儀；混勻器：上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)75-2型微量攪拌器；微粒子酶免疫分析儀：貝克曼庫爾特UniCel DxI800免疫分析系統(tǒng)；酶標儀：美國Molecular Devices；水浴箱：日本希森美康株式會社生產(chǎn)HH-W600恒溫水浴箱；生化分析儀：美國nova生化分析儀；洗板機：雷杜RT-3900自動洗板機

1.2.2操作方法 全血標本離心10 min后，吸取適量血清進行檢測。①GICA法將檢驗溫度維持在20～25 ℃，溫度平衡，此后將膠體金試紙條進行標記并置于工作臺上。樣本溫度平衡后，取80 μl標本滴于試紙上。若樣本中存在乙肝表面抗原，凝聚顯色，兩條紅線為陽性，一條紅線為陰性。若無紅色條帶出現(xiàn)，應重新進行試驗。②ELISA法：取出試劑盒，反應條和試劑，進行室溫平衡（30 min左右），樣本加入微孔反應條，封存，置于37 ℃環(huán)境下1 h。將20 ml洗滌液加入480 ml蒸餾水中混勻配置洗滌液。打開反應條，將洗滌液注滿反應條，靜置5 s后甩干，重復5次。取試劑盒內(nèi)A、B液各50 μl滴入反應條內(nèi)，反應條封板，使用微量攪拌器對反應條進行混勻，置于37 ℃恒溫水浴箱內(nèi)保存30 min。讀取450 nm波長，零值校隊，后詳細讀取OD值。

判斷值（CO）計算方法，判斷值=陰性對照結果OD平均值/3+0.100。若樣本血清檢測發(fā)現(xiàn)CO值

1.3統(tǒng)計學方法 利用SPSS16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用（x±s）表示，通過兩獨立樣本t檢驗統(tǒng)計分析兩組間均數(shù)比較，P<0.05表明差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1兩種方法檢測乙肝表面抗原陽性率比較 GICA法測得的陽性率41.96%， 低于ELISA法測得的陽性率為47.61%，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2兩種方法檢測乙肝表面抗原的靈敏度和特異度比較 隨訪患者229例。ELISA法及GICA法的靈敏度及特異度不存在完全一致性，進行χ2分割檢驗，ELISA法靈敏度和特異度均高于GICA法，見表2。

3 討論

我國是乙肝疾病高發(fā)國家，乙肝患者中的病毒血清學標志物對于判斷病變活動狀況具有重要意義。研究表明[2]在感染乙肝病毒之后血液中檢測可以發(fā)現(xiàn)一種病毒型病毒學標志物就是乙肝表面抗原，簡稱為HBsAg，可在感染乙型肝炎病毒后的早期出現(xiàn)，該物質(zhì)本質(zhì)無傳染性，但常與乙肝病毒伴隨出現(xiàn)，因此臨床將其視為是否感染乙肝病毒的標志。

臨床采用ELISA和GICA法檢測乙肝患者的血清學標志物，酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術[3]。膠體金免疫層析法GICA通過顯示樣品中的分析物與結合墊上的免疫膠體金相互作用并形成復合物，出現(xiàn)的紅色膠體金，進行檢測[4]。

通過對我院應用兩種方法進行檢測患者血清標記物發(fā)現(xiàn)，GICA法檢測陽性率為41.96%， ELISA法檢測陽性率為47.61%，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），隨訪患者229例，ELISA法及GICA法的靈敏度及特異度不存在完全一致性，χ2分割檢驗后，ELISA法靈敏度和特異度均高于GICA法（P<0.05）。

ELISA法具有較高的診斷陽性率，并具有較高的靈敏度和特異度，同時ELISA法可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。但GICA法器材更為小巧、簡潔直觀，且無需大型設備輔助，可以較為廣泛地應用于普查及急診前檢查中。

參考文獻：

[1]李伶俐，孫俊聰.400例乙肝表面抗原膠體金試條法與ELISA法檢測結果分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2014，28（28）：35-36.

[2]郝青華.膠體金試紙條法和ELISA法在乙肝表面抗原檢測中的效果分析[J].醫(yī)學信息，2014，27（34）：57-57.

[3]李小云.ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原結果分析[J].醫(yī)學美學美容，2015（3）：225-225.

[4]曾妮，葉興，黃河浪.乙肝免疫球蛋白聯(lián)合乙肝疫苗阻斷乙型肝炎母嬰傳播的系統(tǒng)評價[J].中華疾病控制雜志，2017，21（1）：48-51.

收稿日期：2018-3-10；修回日期：2018-3-20

編輯/王朵梅