腸腺癌組織中CK7、CK20、CEA、Ki—67表達水平的臨床病理意義

潘運迎　楊得志　覃興善　陳柳紅

【摘要】 目的：探討腸腺癌腫瘤組織中CK7、CK20、CEA、Ki-67表達水平與其臨床病理特征的關(guān)系。方法：選取2015年1月-2017年3月于本院確診并進行治療的腸癌患者139例，均采用免疫組織化學(xué)染色Envision法檢測其腸腺癌組織中CK7、CK20、CEA、Ki-67表達水平。結(jié)果：患者CK7、CK20、CEA表達陽性率分別為10.79%（15/139）、90.65%（126/139）、90.65%（126/139），Ki-67的增殖指數(shù)為（61±22）%；CK7的表達在不同部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CK20的表達在不同部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型及臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CEA的表達在不同組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Ki-67的表達在組織學(xué)類型、臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：CK7、CK20表達情況有助于腺癌來源部位的判斷；CK7、CEA陽性表達者，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力更強；CK20可能促進腺癌細胞分化，CEA則可能阻礙細胞分化；Ki-67的增殖活性與腫瘤的低分化程度及高臨床分期相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 腸腺癌； CK7； CK20； CEA； Ki-67

Clinicopathological Significance of the Expression of CK7，CK20，CEA，Ki-67 in Intestinal Adenocarcinoma/PAN Yunying，YANG Dezhi，QIN Xingshan，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（17）：-148

【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between the expression level of CK7，CK20，CEA，Ki-67 in intestinal adenocarcinoma and its clinicopathological features.Method：A total of 139 patients with colorectal cancer diagnosed and treated in our hospital from January 2015 to March 2017 were selected.The expression levels of CK7，CK20，CEA and Ki-67 in intestinal adenocarcinoma were detected by immunohistochemical staining and Envision.Result：The positive rates of CK7，CK20 and CEA were 10.79%（15/139），90.65%（126/139） and 90.65%（126/139） respectively，and the proliferation index of Ki-67 was（61±22）%.The expression of CK7 in different locations and lymph node metastases were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of CK20 in different locations，tumor size，histological type and clinical stage were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of CEA in different histological types and lymph node metastasis were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.The expression of Ki-67 in histological type and clinical stage were compared，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The expression of CK7 and CK20 are helpful to the prediction of the origin of adenocarcinoma，and the positive expression of CK7 and CEA has stronger lymph node metastasis.CK20 may promote differentiation of adenocarcinoma cells，while CEA may block cell differentiation，and the proliferation activity of Ki-67 is related to the low degree of tumor differentiation and high clinical stage.

【Key words】 Intestinal adenocarcinoma； CK7； CK20； CEA； Ki-67

First-authors address：Hospital of Traditional Chinese Medicine of Liuzhou，Liuzhou 545000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.17.038

腸癌是一種全球范圍內(nèi)發(fā)病率和致死率均較高的消化道惡性腫瘤，全世界每年新發(fā)病例約有120萬，死于該疾病者約60萬。分別居男性和女性惡性腫瘤的發(fā)病率中第三和第二位。隨著我國人民飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，腸癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢。中國國家癌癥中心2015年的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示我國結(jié)直腸癌發(fā)病率、死亡率在全部惡性腫瘤中均位居前5位[1]。大腸癌的好發(fā)部位為直腸和乙狀結(jié)腸，病理類型以腺癌為主，高發(fā)年齡>60歲[2]。大多數(shù)患者確診時已到中晚期，生存率<30%[3]。目前，對于腸癌的臨床病理特征、分子分型、治療手段等領(lǐng)域的研究均取得了長足進展[4-6]，但其診療效果仍有待于進一步提高。本研究中分子標(biāo)記CK7、CK20、CEA、Ki-67在腸腺癌的診斷、鑒別診斷、預(yù)后判斷及臨床篩查中有重要價值。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2017年3月于本院確診并進行治療的腸癌患者139例。納入標(biāo)準(zhǔn)：按照2010版WHO標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性腸癌；術(shù)前未進行放化療；行腸癌根治術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：活檢標(biāo)本；免疫組化的資料不完整者。其中男79例，女60例；年齡29～88歲，平均年齡64.4歲；直腸癌56例，結(jié)腸癌79例中右半結(jié)腸（盲腸+升結(jié)腸）33例、橫結(jié)腸9例、降結(jié)腸9例、乙狀結(jié)腸28例，十二指腸癌4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者57例（其中有衛(wèi)星結(jié)節(jié)者9例），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者82例；組織學(xué)類型：原位腺癌1例，普通型腺癌130例（高分化腺癌25例，中分化腺癌87例，低分化腺癌18例），黏液腺癌（所含黏液區(qū)占腫瘤組織的50%以上）8例；腫瘤大小：≤2 cm者9例，2.1～4.9 cm者61例，≥5 cm者69例；TNM臨床分期：0期1例，Ⅰ期20例，Ⅱ期59例（Ⅱa期57例，Ⅱc期2例），Ⅲ期53例（Ⅲa期2例，Ⅲb期45例，Ⅲc期6例），Ⅳ期6例。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，患者知情同意。

1.2 方法 送檢組織經(jīng)4%中性甲醛液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，3 μm厚度切片，HE染色，光鏡觀察。選取腫瘤與正常組織同時存在的蠟塊，4 μm厚度切片行免疫組化，采用Envision法，一抗為CK7、CK20、CEA、Ki-67，抗體及所用免疫組化試劑均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，操作步驟按照試劑說明書進行。同時進行陽性及陰性對照實驗。

1.3 結(jié)果判定 陽性結(jié)果明確，陽性信號的位置正確且染色特征正確[7]。（1）在陽性對照（+）且陰性對照（-）的情況下，對照HE染色切片，確定要觀測的腫瘤細胞，分析陽性染色的部位，陽性結(jié)果為相應(yīng)部位顯示棕黃色顆粒。（2）CK7、CK20、CEA陽性信號>5%判定為陽性；對Ki-67進行定量分析：選取陽性信號最多部位（計數(shù)500～2 000個細胞），計算腫瘤細胞中Ki-67增殖指數(shù)，即Ki-67陽性的百分比[8]，<10%為陰性（-），10%～50%為低表達（+）；>50%為高表達（++）[9]。所有結(jié)果均由3名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師閱片獲得。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 19.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腸癌患者腫瘤組織中CK7、CK20、CEA、Ki-67表達水平 CK7、CK20陽性信號定位于胞漿，呈細絲狀；CEA陽性信號呈細胞膜及細胞質(zhì)中均勻著色；Ki-67陽性信號定位于細胞核?；颊逤K7、CK20、CEA表達陽性率分別為10.79%（15/139）、90.65%（126/139）、90.65%（126/139），Ki-67增殖指數(shù)為（61±22）%（最低值3%，最高值90%）。

2.2 腸癌患者CK7、CK20、CEA、Ki-67表達與臨床病理特征的關(guān)系 CK7的表達在不同部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中CK7表達陽性率在十二指腸腺癌組為100%（4/4）高于結(jié)直腸癌組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4個組高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≤3個組（無轉(zhuǎn)移組+轉(zhuǎn)移數(shù)1～3個組）；在不同性別、年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型、臨床分期之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。CK20的表達在不同部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型及臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；在不同性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。CEA的表達在不同組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而在不同性別、年齡、部位、腫瘤大小、臨床分期之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Ki-67的表達在組織學(xué)類型、臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而在不同性別、年齡、部位、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

腸癌是腸黏膜及腺體發(fā)生的惡性腫瘤。目前以外科手術(shù)為主，結(jié)合放療、化療、分子靶向治療及多學(xué)科治療，使結(jié)直腸癌的規(guī)范治療取得長足進展，但因診斷時常為中晚期以及復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等問題，術(shù)后5年生存率較低。隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)在臨床病理診斷中的廣泛應(yīng)用，免疫組化標(biāo)記在腫瘤的輔助診斷、鑒別診斷，患者的預(yù)后判斷、指導(dǎo)臨床制定合理的診療計劃等方面均發(fā)揮著重要的作用[10]。本文對免疫組化標(biāo)記物CK7、CK20、CEA、Ki-67在腸癌腫瘤組織中的表達情況與患者臨床病理特征之間的關(guān)系進行研究，從而為腸癌患者的臨床診斷及預(yù)后判斷提供一定依據(jù)。

3.1 CK7在腸癌組織中的表達及意義 CK7是細胞角蛋白亞型之一，主要表達于腺上皮細胞，如：乳腺、肺、胃、胰腺、膽管上皮、卵巢等處。有研究報道CK7在結(jié)直腸癌組織中陽性表達率為10%～27%[11]。目前已證明有三條分子通路涉及腸癌的發(fā)生：即染色體不穩(wěn)定，微衛(wèi)星不穩(wěn)定和鋸齒狀通路。鋸齒狀通路以異常甲基化為特征，伴有不同基因突變[12-13]。余力等[14]報道，在68例結(jié)、直腸癌中CK7表達陽性率為39.7%，CK7的表達很可能是循增生性息肉-鋸齒狀腺瘤-癌變途徑發(fā)生結(jié)直腸癌的標(biāo)志物之一。廖謙和等[15]報道CK7在胃腺癌、癌旁異型增生組織及腸化組織中均高表達，陽性率大于80%。CK7陽性細胞可能代表一種分化程度較低的細胞。表達強度隨組織分化程度降低而增強。郭春紅等[16]報道，在結(jié)直腸癌卵巢轉(zhuǎn)移組織中CK7（-）、CK20（+）、CDX-2（+）、CEA可能（+）。CK7表達陽性的腸癌細胞是否具有更強的轉(zhuǎn)移能力，有待于進一步研究。本研究結(jié)果顯示，CK7總體表達陽性率為10.79%，CK7的表達在不同部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中在十二指腸中表達陽性率為100%（4/4），在結(jié)直腸癌中表達陽性率為8.15%（11/135），CK7在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4個組的陽性率為30.77%（4/13），顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≤3個組8.73%（11/126）；而在不同性別、年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型、臨床分期之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3.2 CK20在腸癌組織中的表達及意義 CK20是一種選擇性表達于胃腸道腺上皮細胞的中間纖維蛋白，在結(jié)直腸癌中的表達穩(wěn)定，且陽性率>90%[17]。CK20具有維持細胞形態(tài)、調(diào)節(jié)細胞分化等功能。分化差的細胞可出現(xiàn)CK20的表達缺失。本研究結(jié)果顯示，CK20表達陽性率為90.65%，CK20的表達在不同部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型及臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），在不同性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），與上述研究結(jié)果一致。其中在十二指腸腺癌中的表達率25.00%（1/4）顯著低于結(jié)直腸癌組，腫瘤最大徑≤2 cm組CK20表達率66.67%（6/9）顯著低于腫瘤最大徑>2 cm組（2.1～4.9 cm組和≥5 cm組），低分化腺癌中CK20表達率77%顯著低于高、中分化腺癌。CK20在原位腺癌中呈陰性表達。但因病例數(shù)過少，僅1例，其意義尚不明確。結(jié)直腸腺癌組織中CK20（+）、CK7（-），但因CK20在腸癌表達的特異性較低[10]，實際病理診斷工作中常結(jié)合其他免疫組化標(biāo)記物，如：villin、CDX-2等共同協(xié)助腸腺癌的診斷及轉(zhuǎn)移灶中腺癌來源的判斷。此外，本研究提示：CK20可能促進細胞的增殖；且CK20陽性可能與癌細胞分化相關(guān)，分化程度越高，CK20陽性表達率越高。

3.3 CEA在腸癌組織中的表達及意義 CEA是一種在胎兒腸道產(chǎn)生的癌胚抗原，在胃腸道腺癌、肺腺癌和甲狀腺髓樣癌中高表達，在成人結(jié)腸正常黏膜上皮中也有表達。但CEA在癌組織中及正常黏膜中的表達模式不同，在腺癌組織中，CEA陽性信號均勻分布在細胞表面，而在正常黏膜中則呈極性分布，主要分布于腺腔表面細胞膜和細胞頂部細胞質(zhì)[18]。夏翠鋒等[19]研究顯示，CEA在大腸癌組織中顯著高表達，臨床分期越高，合并肝轉(zhuǎn)移，CEA陽性率越高。本研究中CEA的表達在不同組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而在不同性別、年齡、部位、腫瘤大小、臨床分期之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。其中CEA在高分化腺癌組的陽性表達率為76%（19/25），顯著低于其他組織學(xué)類型；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中CEA陽性表達率為85.37%（70/82）顯著低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。表明腸腺癌中CEA高表達可能與抑制腫瘤細胞分化及促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

3.4 Ki-67在腸癌組織中的表達及意義 Ki-67是臨床病理診斷工作中常用的反映細胞增殖活性的標(biāo)記物。Ki-67主要位于細胞核內(nèi)，其抗原表達與細胞周期高度相關(guān)，其表達始于G1后期，在S、G2期逐漸上升于M期達到高峰，有絲分裂結(jié)束后迅速降解并消失，靜止期（G0期）細胞不表達[20]。有研究報道Ki-67與腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良相關(guān)[21]。也有研究認為Ki-67增殖指數(shù)只與腫瘤浸潤腸壁的深度有關(guān)（P<0.05），與其他因素并無統(tǒng)計學(xué)關(guān)系[13]。本研究中顯示Ki-67總體增殖指數(shù)為（61±22）%，Ki-67的表達在組織學(xué)類型、臨床分期之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而在不同性別、年齡、部位、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。其在原位腺癌中不表達，黏液腺癌中以低表達為主75.00%（6/8），普通型腺癌中隨分化程度降低，Ki-67高表達的比例提高，從52.00%（13/25）增加至72.22%（13/18）；在臨床分期中，0期為原位癌，Ki-67不表達，在0～Ⅱ期中Ki-67高表達的比例為55.00%（44/80）低于Ⅲ～Ⅳ期的68.80%（40/59）。表明腫瘤細胞的增殖活性與腫瘤的低分化程度及高臨床分期相關(guān)，推測Ki-67高表達可能與預(yù)后不良相關(guān)。

綜上所述，CK7、CK20在腸癌的臨床病理診斷中有重要參考價值，且CEA、Ki-67與組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及腫瘤分期等臨床病理特征有一定的關(guān)系，從而為患者的預(yù)后判斷提供一定的參考依據(jù)。但因本研究病例數(shù)較少，且病例來源僅限于本院就診者，不具有廣泛的代表性，因此本研究有一定的局限性。有待于更多的相關(guān)研究，對本研究結(jié)果加以驗證或進行補充。

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（收稿日期：2018-04-23） （本文編輯：董悅）