全自動(dòng)生化儀檢測(cè)高同型半胱氨酸血癥大鼠血漿同型半胱氨酸及葉酸濃度

周肈魁 王 捷 時(shí)建國(guó) 閔 沛 秦慶君

在急癥治療中，生化檢驗(yàn)發(fā)揮著極為重要的作用，包括電解質(zhì)檢測(cè)、腎功能檢測(cè)等多個(gè)項(xiàng)目，檢驗(yàn)報(bào)告能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床的治療工作?？焖佟?zhǔn)確的生化檢驗(yàn)報(bào)告能夠?qū)⒏嗟闹委煏r(shí)間爭(zhēng)取給急癥患者，促進(jìn)臨床治療成功率的提升[1]。本研究旨在對(duì)高同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)血癥大鼠血漿Hcy及葉酸濃度的全自動(dòng)生化儀檢測(cè)進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備與材料

AU-680型全自動(dòng)生化儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)。健康斷乳Wistar大鼠24只(購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。AIN-93動(dòng)物飼料和AIN-93G配方飼料均購(gòu)自北京科奧協(xié)力有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

選用健康斷乳Wistar大鼠24只，全部為雄性，6周齡，體質(zhì)量150～170 g，平均體質(zhì)量(160±10)g。進(jìn)行1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后依據(jù)隨機(jī)數(shù)表法將24只大鼠分為研究組(高Hcy血癥組)與對(duì)照組，每組12只。兩組采用不同飲食飼養(yǎng)。研究組大鼠食用AIN-93飼料，含1.7%L-蛋氨酸，對(duì)照組大鼠食用AIN-93G配方飼料。在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院外科實(shí)驗(yàn)中心封閉式飼養(yǎng)籠中飼養(yǎng)兩組大鼠，控制飼養(yǎng)溫度為18～22℃，平均(20±2)℃，讓大鼠自由飲水，進(jìn)行18周的連續(xù)飼養(yǎng)。

1.3 大鼠Hcy和葉酸濃度的測(cè)定

飼養(yǎng)18周后大鼠進(jìn)行1 d禁食，對(duì)其進(jìn)行腹腔麻醉，在此過程中將3%水合氯醛充分利用起來，取10 ml左右心臟血，對(duì)其進(jìn)行10 min的離心，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，取血清分裝在微量離心(Eppendorf，EP)管中，凍存在-80 ℃溫度下。以較快的速度向髂動(dòng)脈分叉處分離主動(dòng)脈，方向?yàn)檠刂鲃?dòng)脈弓，將主動(dòng)脈取下，在10%甲醛固定液中放置胸主動(dòng)脈上段1 cm左右，在液氮中放置其他主動(dòng)脈部分，最后凍存在-80 ℃溫度下。采用貝克曼AU-680型全自動(dòng)生化儀對(duì)兩組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度進(jìn)行測(cè)定。

1.4 觀察評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察記錄兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度測(cè)定值，并進(jìn)行比較分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度分別為(22.3±4.9)μmol/L和(121.3±14.1)ng/ml；對(duì)照組大鼠的血漿Hcy和葉酸濃度分別為(4.8±0.4)μmol/L和(110.3±12.2)ng/ml，研究組大鼠血漿Hcy濃度顯著高于對(duì)照組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.303，P＜0.05)，但兩組大鼠的血漿葉酸濃度之間差異不顯著，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.886，P＞0.05)，見表1。

表1 兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度比較(±s)

表1 兩組大鼠血漿Hcy及葉酸濃度比較(±s)

注：表中Hcy為同型半胱氨酸。

組別 只數(shù) Hcy(μmol/L） 葉酸(ng/ml）研究組 12 22.3±4.9* 121.3±14.1對(duì)照組 12 4.8±0.4 110.3±12.2 t值 4.303 1.886 P值 ＜0.05 ＞0.05

3 討論

紀(jì)鐵梅[2]研究表明，心血管疾病的一個(gè)重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素為高Hcy血癥。動(dòng)物模型研究結(jié)果表明，Hcy能夠通過損傷內(nèi)皮及其功能、提升氧化應(yīng)激、對(duì)脂質(zhì)代謝造成影響等各種機(jī)制致病，促使心腦血管疾病發(fā)病危險(xiǎn)性的提升。高Hcy血癥能夠?yàn)檠焊吣隣顟B(tài)提供良好的前提條件，增加膽固醇合成，減少載脂蛋白A1合成，進(jìn)而減少高密度脂蛋白生成，將粘附分子表達(dá)上調(diào)，對(duì)鈣離子進(jìn)行誘導(dǎo)，使其作為第二信使在平滑肌細(xì)胞中將作用充分發(fā)揮出來。高Hcy血癥損傷內(nèi)皮功能的機(jī)制為，為內(nèi)皮細(xì)胞凋亡提供良好的前提條件，減少一氧化氮合成，增加非對(duì)稱性二甲基精氨酸生成，增多內(nèi)皮素釋放。高Hcy血癥在動(dòng)物模型中能夠促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成。Scott等[3]研究表明，在促進(jìn)動(dòng)脈斑塊進(jìn)展速度加快、擾亂內(nèi)皮功能以及促進(jìn)血栓形成的過程中，高膽固醇血癥與高Hcy血癥具有協(xié)同作用。

近年來，臨床研究中逐漸闡明了細(xì)胞內(nèi)致動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激、L-高半胱氨酸在細(xì)胞內(nèi)金屬硫蛋白上作用促進(jìn)混合二硫共軛化合物的形成、金屬硫蛋白同型半胱氨酸活性功能在?；髥适В瑪_亂氧化還原穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)血管疾病發(fā)生速度的加快。Liu等[4]研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂可能極易在高Hcy細(xì)胞致病作用下發(fā)生?？傮w而言，高Hcy血癥影響心血管疾病發(fā)生的機(jī)制可能為細(xì)胞內(nèi)外多種機(jī)制。

He等[5]研究表明，心血管疾病的一個(gè)重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素為血漿Hcy濃度提升，心血管風(fēng)險(xiǎn)會(huì)隨著血漿Hcy濃度的提升而提升，服用0.5～5.0 mg/d葉酸能夠在一定程度上降低血漿Hcy濃度。但是現(xiàn)階段，臨床尚未明確心血管疾病是否能夠在口服葉酸的作用下得到有效預(yù)防。

目前，全自動(dòng)生化分析儀、血?dú)夥治鰞x是臨床通常采用的生化檢驗(yàn)設(shè)備。Zhang等[6]研究表明，全自動(dòng)生化分析儀不同于血?dú)馍瘍x，臨床可以適當(dāng)調(diào)整檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)參考范圍，在參考范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)合理分析。Li等[7]研究表明，在鉀、鈉、氯的檢測(cè)中，AU-680型全自動(dòng)生化儀與PL2000PLUS血?dú)馍瘍x相比，具有較好的結(jié)果，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因?yàn)槎呔哂胁煌臋z測(cè)原理，AU-680型全自動(dòng)生化儀運(yùn)用間接離子選擇電極法。同時(shí)，二者具有不同的檢測(cè)樣本[8]。此外，鉀、鈉、氯三種離子在細(xì)胞內(nèi)外具有不同的含量[9-11]。相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者[12-16]采用AU-680型全自動(dòng)生化儀與ABL80型血?dú)夥治鰞x檢測(cè)了202例急診患者的鉀、鈉、氯三種離子含量，以對(duì)其電解質(zhì)進(jìn)行了解，發(fā)現(xiàn)和血?dú)馍瘍x相比，AU-680型全自動(dòng)生化儀的檢測(cè)含量顯著較高。本研究結(jié)果表明，研究組大鼠的血漿Hcy濃度顯著高于對(duì)照組，但兩組大鼠的血漿葉酸濃度之間的差異不顯著，與上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

全自動(dòng)生化儀檢測(cè)高Hcy血癥大鼠血漿Hcy濃度提升，葉酸濃度提升不顯著，臨床中可以依據(jù)血漿Hcy濃度對(duì)高Hcy血癥進(jìn)行診斷。