丹芪偏癱膠囊對(duì)慢性腦缺血大鼠認(rèn)知功能的影響

劉建萍，王進(jìn)博，王 洋，陳 濤

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193；2.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品審評(píng)中心，北京 100070）

丹芪偏癱膠囊為國(guó)家中藥6類新藥，由丹參、黃芪、赤芍等14味藥物組成，主要用于腦梗死的恢復(fù)期[1－2]。有研究表明，丹芪偏癱膠囊可以增加中風(fēng)患者的腦血流量[3]，改善功能性自立及神經(jīng)修復(fù)[4]，對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與減輕腦水腫、抗氧化及抑制血漿內(nèi)皮素（ET）生成有關(guān)[5]。臨床研究表明，口服丹芪偏癱膠囊治療中風(fēng)后遺癥130例，療程2個(gè)月，總有效率達(dá)到96.92%，患者治療后較治療前臨床癥狀改善明顯[6]。

慢性腦缺血又稱為慢性低灌注，即慢性的腦血流量供應(yīng)不足，可對(duì)腦組織造成不同程度的損傷，是臨床常見(jiàn)的一種病理狀態(tài)，具有存活率低、致殘率高、病程長(zhǎng)等特點(diǎn)。其多伴于血管性癡呆、阿爾茨海默病等疾病的發(fā)病過(guò)程[6]，發(fā)病的早起主要表現(xiàn)是認(rèn)知功能的損害，而認(rèn)知功能包括學(xué)習(xí)、記憶、定向能力和思維能力等內(nèi)容，因此評(píng)價(jià)認(rèn)知功能的主要指標(biāo)是學(xué)習(xí)記憶能力的改善[7]。為探討丹芪偏癱膠囊對(duì)慢性腦缺血的治療作用，實(shí)驗(yàn)采用改良的Pulsinell四動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)制備大鼠模型，觀察丹芪偏癱膠囊對(duì)腦缺血大鼠平衡及學(xué)習(xí)記憶能力的影響，為驗(yàn)證其治療缺血性腦病的有效性提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量（230±20）g（購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014－0004，置于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。室溫（20±2）℃，濕度60%±5%。

1.2 藥品 丹芪偏癱膠囊（批號(hào)：201505007，天津市石天藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。

1.3 儀器 MorriS水迷宮視頻分析系統(tǒng)（淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）；大小鼠疲勞儀（DXP－2，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)流程 大鼠造模前分別進(jìn)行Morris水迷宮、平衡能力實(shí)驗(yàn)，篩選符合造模的大鼠。造模2周后，造模成功的大鼠平均分組，給藥治療。造模成功大鼠連續(xù)給藥4周。

2.2 前腦缺血模型制備 四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠缺血模型（Forebrain）被廣泛應(yīng)用于學(xué)習(xí)記憶能力研究，是全腦缺血的經(jīng)典模型。本項(xiàng)目擬采用本課題組前期建立的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行模型復(fù)制，簡(jiǎn)要步驟如下：大鼠禁食24 h后，頸部、頭部刮毛備皮，分離雙側(cè)頸總，埋線，縫合。大鼠腦立體定位儀固定，俯臥，電凝第一頸椎橫突孔下雙側(cè)椎動(dòng)脈，縫合，消毒。24 h后大鼠于清醒狀態(tài)，夾閉雙側(cè)頸總15 min，然后開(kāi)放動(dòng)脈夾再灌注。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，保持肛溫（37±0.5）℃，以大鼠出現(xiàn)意識(shí)消失、眼球蒼白、瞳孔散大、呼吸加深加快，對(duì)疼痛刺激無(wú)反應(yīng)、翻正反射和瞳孔對(duì)光反射消失，為模型成功標(biāo)志。模型不成功或出現(xiàn)驚厥癲癇狀態(tài)的大鼠棄除。假手術(shù)組只分離雙側(cè)頸總，找到第一頸椎橫突孔，不電凝，不夾閉頸總動(dòng)脈。

2.3 實(shí)驗(yàn)分組和給藥方法 分為假手術(shù)組、模型組、丹芪偏癱膠囊組，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)[8]確定的丹芪偏癱膠囊的有效劑量給藥（43.2 mg/mL），模型組和假手術(shù)組給予羧甲基纖維素鈉溶液。造模后2周開(kāi)始給藥，給藥周期為1個(gè)月。模型組和假手術(shù)組給濃度為0.005 mg/mL的羧甲基纖維素鈉溶液，給藥組給濃度為43.2 mg/mL的丹芪偏癱膠囊的羧甲基纖維素鈉溶液。按正常人體質(zhì)量為60 kg計(jì)算，大鼠的標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量為200g，丹芪偏癱膠囊人的臨床給藥計(jì)量為4.8g/d，按《中國(guó)藥典》體表面積計(jì)算法，大鼠給藥劑量為432 mg/kg。

2.4 MorriS水迷宮實(shí)驗(yàn)

2.4.1 水迷宮裝置 Morris水迷宮由圓形水池、平臺(tái)以及記錄裝置三部分組成。水池用不銹鋼板制成，直徑1.2 m，高50 cm，厚3 mm，內(nèi)壁為黑色，周圍由黑色幕布圍住。池壁上等距離標(biāo)記東、南、西、北4個(gè)入水點(diǎn)，東西及南北兩點(diǎn)連線將水池等分為4個(gè)象限，分別稱西南（SW）、西北（NW）、東南（SE）及東北（NE）象限，將一個(gè)直徑為12 cm、高為28 cm的圓柱形平臺(tái)固定放置于SW象限的中心位置上，平臺(tái)頂部沒(méi)于水面下1 cm，水迷宮內(nèi)置加熱和測(cè)量溫度裝置，水溫恒定，保持在（25±1）℃之間。池壁、池底及平臺(tái)均用黑色膠紙粘貼，水顏色染為黑色，目的是徹底的隱藏平臺(tái)，讓小鼠在水中不能通過(guò)視覺(jué)來(lái)辨認(rèn)平臺(tái)。在水中實(shí)驗(yàn)的目的是使大鼠失去嗅覺(jué)感應(yīng)，只能通過(guò)記憶尋找平臺(tái)以達(dá)到隱蔽平臺(tái)的目的。記錄分析裝置由攝像裝置(懸掛于水池正上方約2 m處）和電腦分析系統(tǒng)組成。測(cè)試期間，周圍環(huán)境以及水迷宮池壁上的參照物均保持不變，并保持室內(nèi)安靜。

2.4.2 定位航行實(shí)驗(yàn) 測(cè)試的前一天，為了減少應(yīng)激反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，各組實(shí)驗(yàn)大鼠在學(xué)習(xí)訓(xùn)練前均被放于除去平臺(tái)的Morris水迷宮中約90 s，以熟悉環(huán)境降低應(yīng)激反應(yīng)，適應(yīng)活動(dòng)結(jié)束后將平臺(tái)放回原處。實(shí)驗(yàn)時(shí)平臺(tái)位置固定不變，分別使大鼠從不同象限的入水點(diǎn)入水，訓(xùn)練時(shí)將動(dòng)物面朝池壁輕輕放入水中，記錄鼠從入水到找到平臺(tái)的游泳路線的長(zhǎng)度及找到平臺(tái)的時(shí)間。如果90 s內(nèi)找不到平臺(tái)，潛伏期記為90 s，并將鼠引于平臺(tái)上記憶30 s。訓(xùn)練結(jié)束后計(jì)算各組動(dòng)物潛伏期平均值，共進(jìn)行5d。

2.4.3 空間探索實(shí)驗(yàn) 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束24 h后，撤除平臺(tái)，從原平臺(tái)對(duì)側(cè)象限入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄其在90 s內(nèi)的游泳路徑、原平臺(tái)象限的停留時(shí)間、穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)及其運(yùn)動(dòng)速度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并記錄其運(yùn)動(dòng)軌跡。

2.5 平衡能力實(shí)驗(yàn) 將鼠放在大鼠疲勞儀上，第一次以4 r/min恒定轉(zhuǎn)速適應(yīng)2 min，20 rpm/min適應(yīng)1 min。接著將疲勞儀的轉(zhuǎn)速調(diào)整，調(diào)整方式為：在1 min鐘按恒定速率將轉(zhuǎn)速由0 rpm/min升高到28 r/min，并讓大鼠在28 rpm/min轉(zhuǎn)速的疲勞儀上保持5 min，在這6 min的時(shí)間內(nèi)記錄大鼠掉落的次數(shù)以及維持在疲勞儀上的最長(zhǎng)時(shí)間，測(cè)3次，取平均值。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，P＜0.05認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 定位航行實(shí)驗(yàn) 1）在造模前的水迷宮實(shí)驗(yàn)中，主要是篩掉一些個(gè)體差異比較大的大鼠，用以減小個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，所以只選擇了基礎(chǔ)值一樣、個(gè)體差異小的大鼠來(lái)進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。為了消除大鼠個(gè)體間的差異，特在實(shí)驗(yàn)造模前進(jìn)行了水迷宮篩選，隨著訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間會(huì)逐漸縮短，各組大鼠之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

2）給藥兩周后的水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1，將給藥2周后的模型組與假手術(shù)組進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），模型組大鼠的逃避潛伏期明顯增加，同時(shí)將模型組大鼠與造模前篩選后的鼠進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說(shuō)明四動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)成功造成了大鼠腦缺血，記憶能力下降。給藥組和模型組比較結(jié)果表明，也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），丹芪偏癱膠囊給藥組大鼠的逃避潛伏期明顯縮短，說(shuō)明丹芪偏癱膠囊對(duì)慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有一定的保護(hù)作用。

3）給藥4周后的水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，給藥4周后，模型組與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），模型組的逃避潛伏期明顯增加；模型組與給藥組比較，亦出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），給藥組逃避潛伏期明顯減少,說(shuō)明丹芪偏癱膠囊能改善四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠的學(xué)習(xí)能力。

3.1.2 空間探索實(shí)驗(yàn) 空間探索實(shí)驗(yàn)主要考察大鼠在平臺(tái)象限停留的時(shí)間以及穿越平臺(tái)的次數(shù)，在平臺(tái)象限停留時(shí)間越長(zhǎng)、穿越平臺(tái)次數(shù)越多則表示大鼠的記憶能力越強(qiáng)。

1）在給藥2周和4周時(shí)，大鼠在平臺(tái)所在象限停留時(shí)間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表3。在給藥2周和4周時(shí)分別進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，給藥2周時(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠在平臺(tái)所在象限的停留時(shí)間相比于假手術(shù)組明顯縮短（P＜0.01），丹芪偏癱膠囊給藥組與模型組相比，給藥組大鼠的停留時(shí)間明顯增加（P＜0.01）；給藥4周的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠在平臺(tái)所在象限停留的時(shí)間明顯減少（P＜0.05），丹芪偏癱膠囊給藥組與模型組相比，給藥組大鼠的停留時(shí)間顯著增高（P＜0.01），說(shuō)明丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎所致的慢性腦缺血大鼠的記憶能力具有改善作用。

2）在給藥2周和4周時(shí)，大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表4。在給藥2周和4周時(shí)的大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥2周時(shí)，模型組與假手術(shù)組相比，模型組的大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯減少（P＜0.01），丹芪偏癱膠囊給藥組和模型組相比較，穿越平臺(tái)的次數(shù)增加（P＜0.05）；給藥4周時(shí)，模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯較少（P＜0.05），丹芪偏癱膠囊給藥組與模型組相比較，給藥組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)明顯增多（P＜0.01），以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠的記憶能力有明顯的改善作用。

3.2 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)結(jié)果 轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)主要考察大鼠從轉(zhuǎn)棒上掉落下來(lái)的次數(shù)和在轉(zhuǎn)棒上停留的最長(zhǎng)時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示。

3.2.1 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠掉落次數(shù)的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表5。為了消除大鼠個(gè)體間的差異性，在造模前對(duì)大鼠進(jìn)行了轉(zhuǎn)棒篩選，去除個(gè)體差異較大的，選擇個(gè)體之間差異性小的大鼠進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。造模前各組之間的掉落次數(shù)差異較小（P＞0.05），而在造模完成后，分別給藥2周和4周的轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的轉(zhuǎn)棒掉落次數(shù)明顯增加（P＜0.01），與丹芪偏癱膠囊給藥組相比，給藥組的掉落次數(shù)明顯下降（P＜0.01），說(shuō)明丹芪偏癱膠囊能明顯減少由四動(dòng)脈結(jié)扎所致慢性腦缺血大鼠的轉(zhuǎn)棒掉落次數(shù)，對(duì)認(rèn)知功能具有顯著的改善作用。

表1 丹芪偏癱膠囊對(duì)給藥2周后四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠學(xué)習(xí)能力的影響（±s）Tab.1 Effect of Danqi Piantan capsule on the learning ability of four artery ligation rats after two weeks of administration（±s）s

表1 丹芪偏癱膠囊對(duì)給藥2周后四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠學(xué)習(xí)能力的影響（±s）Tab.1 Effect of Danqi Piantan capsule on the learning ability of four artery ligation rats after two weeks of administration（±s）s

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)模型組 10假手術(shù)組 10丹芪偏癱膠囊給藥組 10 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d 89.08± 2.35** 74.48±21.96** 83.53±7.81** 61.87±27.50 68.97±17.59**47.81±10.56 35.07±16.15 32.44±8.01 36.81± 6.77 22.35± 4.64 61.47±11.89## 39.27±10.23 26.82±6.88## 34.17± 9.86 19.10± 9.47#

表2 丹芪偏癱膠囊對(duì)給藥4周后四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠學(xué)習(xí)能力的影響（±s）Tab.2 Effect of Danqi Piantan capsule on learning ability of the four artery ligation rats after four weeks of administration（±s）s

表2 丹芪偏癱膠囊對(duì)給藥4周后四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠學(xué)習(xí)能力的影響（±s）Tab.2 Effect of Danqi Piantan capsule on learning ability of the four artery ligation rats after four weeks of administration（±s）s

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)模型組 10假手術(shù)組 10丹芪偏癱膠囊給藥組 10 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d 76.23±15.51 72.41±16.85** 53.40±18.25** 51.37±14.07 63.73±22.50**57.31±23.04 29.94± 9.16 20.56± 4.61 28.70± 3.52 24.40± 8.64 70.62±26.21 41.72±11.36## 24.20± 6.91## 38.34± 5.87# 16.48± 4.76##

表3 丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠平臺(tái)象限停留時(shí)間的影響（±s）Tab.3 Effect of Danqi Piantan capsule on the quadrant residence time of the four artery ligation rats（±s）s

表3 丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠平臺(tái)象限停留時(shí)間的影響（±s）Tab.3 Effect of Danqi Piantan capsule on the quadrant residence time of the four artery ligation rats（±s）s

注：與假手術(shù)組相比，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 給藥4周模型組 16.21±5.43#假手術(shù)組 26.03±8.75丹芪偏癱膠囊給藥組 37.35±9.95**動(dòng)物數(shù)10 10 10給藥2周16.95±6.97##39.86±10.47 30.4±7.08**

表4 丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)的影響（±s）Tab.4 Effect of Danqi Piantan capsule on the number ofcross platform of four artery ligation rats（±s）s

表4 丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)的影響（±s）Tab.4 Effect of Danqi Piantan capsule on the number ofcross platform of four artery ligation rats（±s）s

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 4周模型組 1.00±0.98*假手術(shù)組 2.17±0.75丹芪偏癱膠囊給藥組 3.00±0.63##動(dòng)物數(shù)10 10 10 2周1.16±0.75**2.67±0.82 2.33±0.52#

表5 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠掉落次數(shù)的影響（±s）Tab.5 Effect of Danqi Piantan capsule on the number of falling rats（±s） 次

表5 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠掉落次數(shù)的影響（±s）Tab.5 Effect of Danqi Piantan capsule on the number of falling rats（±s） 次

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別模型組假手術(shù)組丹芪偏癱膠囊給藥組動(dòng)物數(shù)10 10 10造模前 2周 4周4.94±1.89 20.89±4.03**10.67±4.39**5.20±2.00 3.78±1.88 3.05±1.02 4.61±1.91 5.56±0.98## 2.00±0.52##

3.2.2 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠最長(zhǎng)停留時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表6。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，造模前大鼠在轉(zhuǎn)棒上的最長(zhǎng)停留時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而在造模完成給藥2周和4周后，模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的最長(zhǎng)停留時(shí)間明顯減少（P＜0.05），丹芪偏癱膠囊給藥組與模型組相比，給藥組大鼠在轉(zhuǎn)棒上的最長(zhǎng)停留時(shí)間明顯增加（P＜0.05），說(shuō)明丹芪偏癱膠囊能明顯增加慢性腦缺血大鼠在轉(zhuǎn)棒上的最長(zhǎng)停留時(shí)間，對(duì)大鼠的認(rèn)知功能具有明顯的改善作用。

表6 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠最長(zhǎng)停留時(shí)間的影響（±s）Tab.6 Effect of Danqi Piantan capsule on the longest residence time in rats（±s）

表6 丹芪偏癱膠囊對(duì)大鼠最長(zhǎng)停留時(shí)間的影響（±s）Tab.6 Effect of Danqi Piantan capsule on the longest residence time in rats（±s）

注：與假手術(shù)組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01。

分組模型組假手術(shù)組丹芪偏癱膠囊給藥組動(dòng)物數(shù)10 10 10造模前 2周 4周109.5±34.99 30.32±15.04* 19.72± 5.13**99.00±25.30 110.72±42.28 114.11±31.29 104.00±34.79 78.45±28.61##115.78±18.39##

4 討論

認(rèn)知功能包括學(xué)習(xí)、記憶、定向能力和思維能力等內(nèi)容，因此評(píng)價(jià)認(rèn)知功能的主要指標(biāo)是學(xué)習(xí)記憶能力的改善。由于慢性腦低灌注導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙和癡呆的病理生理機(jī)制尚未闡明，因而目前亦缺乏特異性的臨床防治措施。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)針對(duì)中藥提取物和中藥制劑對(duì)腦缺血再灌注后認(rèn)知功能影響方面的實(shí)驗(yàn)研究越來(lái)越多。目前常用的建立慢性腦低灌注大鼠模型的方法有雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法（BCCAO）[9－10]和改良的 Pulsinell[11]四動(dòng)脈結(jié)扎法等。本實(shí)驗(yàn)采用改良的Pulsinell四動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)[12]，術(shù)后大鼠腦組織出現(xiàn)明顯的缺血，行為學(xué)上表現(xiàn)為空間探索能力、學(xué)習(xí)、認(rèn)知以及記憶能力顯著下降。此法被國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛推崇，是目前復(fù)制慢性腦缺血模型的常用方法之一，但此法受動(dòng)物個(gè)體差異的影響較為嚴(yán)重，故在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛷?fù)制前需對(duì)動(dòng)物做初步的篩選，減少動(dòng)物之間的個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

目前評(píng)價(jià)慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的常用行為學(xué)方法有Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、網(wǎng)屏懸掛實(shí)驗(yàn)、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、避暗實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)等[13－19]。

本實(shí)驗(yàn)采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。在水迷宮實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練時(shí)間以及次數(shù)的增加，大鼠會(huì)逐漸學(xué)習(xí)并記住水中平臺(tái)的位置，故到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間（逃避潛伏期）會(huì)減少，表明大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的增強(qiáng)。模型組與假手術(shù)組及丹芪偏癱膠囊給藥組相比較，模型組大鼠的逃避潛伏期均明顯高于假手術(shù)組和丹芪偏癱膠囊給藥組，說(shuō)明丹芪偏癱膠囊對(duì)慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)能力有一定的改善作用。定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組與假手術(shù)組比較到達(dá)平臺(tái)時(shí)間、第一次到達(dá)平臺(tái)時(shí)間均顯著增加，穿越平臺(tái)次數(shù)和平臺(tái)所在象限停留時(shí)間均顯著減少，表明模型組出現(xiàn)了明顯的認(rèn)知功能障礙。與模型組比較，大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)以及在平臺(tái)所在象限停留的時(shí)間均比假手術(shù)組和丹芪偏癱膠囊給藥組大鼠明顯縮短，說(shuō)明丹芪偏癱膠囊對(duì)慢性腦缺血大鼠的記憶能力有一定的改善作用。

在轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練學(xué)習(xí)次數(shù)的增加，大鼠對(duì)轉(zhuǎn)棒的轉(zhuǎn)速有了一定的適應(yīng)記憶能力，故隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，大鼠的掉落次數(shù)會(huì)明顯減少，在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間會(huì)明顯的增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與假手術(shù)組和丹芪偏癱膠囊給藥組比較掉落次數(shù)顯著增加，最長(zhǎng)停留時(shí)間均顯著減少，表明模型組出現(xiàn)了明顯的平衡能力障礙。與模型組相比，丹芪偏癱膠囊組可在一定程度上改善大鼠的平衡能力。綜上所述，丹芪偏癱膠囊對(duì)四動(dòng)脈結(jié)扎所致的慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能有一定的保護(hù)作用。此結(jié)論提示丹芪偏癱膠囊治療慢性腦缺血可能與其改善認(rèn)知功能障礙具有一定的關(guān)系，具體的作用機(jī)制還有待深入研究。