超高效液相色譜串聯質譜測定果蔬中氯蟲苯甲酰胺殘留

李桂紅，李二虎，張 武，趙 瑞，李 俊，程 媛

[農業(yè)部農藥質量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)，天津 300061]

氯蟲苯甲酰胺是美國杜邦公司近年研究開發(fā)成功的殺蟲劑，屬鄰甲酰氨基苯甲酰胺類殺蟲劑。該劑主要激活魚尼汀受體，釋放平滑肌和橫紋肌細胞內貯存的鈣離子，引起肌肉調節(jié)衰弱，肌肉麻痹，直至最后害蟲死亡。氯蟲苯甲酰胺對鱗翅目害蟲的幼蟲活性高，殺蟲譜廣，持效性好，具有長而穩(wěn)定的對作物的保護作用。防治水稻主要害蟲時，迅速保護水稻，尤其對其他水稻殺蟲劑產生抗性的害蟲有特效，如稻縱

卷葉螟、二化螟、三化螟、大螟，對稻癭蚊、稻象甲、稻水象甲也有很好的防治效果。該農藥屬微毒級，對施藥人員非常安全，對稻田有益昆蟲、魚蝦也非常安全。持效期可以達到15 d以上，對農產品無殘留影響，同其他農藥混和性能好[1]。

1 試驗方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

TSQ Quantum Access三重四極桿串聯液質聯用儀(Thermo Fisher Scientific公司)；高速勻漿機(IKA?-WERKE, T25 basic)；水浴氮吹儀(N-EVAP111,Organomation Associates, Jnc.)。

1.1.2 試劑與材料

氯蟲苯甲酰胺標樣(1 000 mg/L)、甲醇、乙腈均為 HPLC 級(Merck，Darmstadt，Germany)，二氯甲烷、氯化鈉(140 ℃烘烤4 h)均為分析純；娃哈哈純凈水；氨基柱(Cleanert NH2-SPE；500 mg/6 mL)；0.22 μm過濾膜。

1.1.3 標準工作液的配制

將氯蟲苯甲酰胺標準溶液用甲醇配置成濃度為100 mg/L作為儲備液。系列濃度的標準工作溶液由氯蟲苯甲酰胺標準貯備溶液用甲醇配制(現用現配)。

1.1.4 色譜與質譜條件

色譜條件：色譜柱：Hypersil Gold(2.1×100 mm)；柱溫：室溫；流動相采用梯度洗脫(洗脫參數見表1)；進樣體積：5 μL。

表1 梯度洗脫參數

質譜條件：ESI正離子模式；噴霧電壓4000V；離子傳輸毛細管溫度：350 ℃；鞘氣：35 psi；采用選擇反應監(jiān)測(SRM)掃描模式。質量條件參數見表2。

表2 質譜質量條件參數

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品提取

稱取果蔬(粉碎樣)樣品25.00 g，置于125 mL的廣口瓶中，加入50 mL乙腈，高速勻漿1 min，然后過濾到100 mL的具塞量筒中，加入6 g氯化鈉，振搖提取2 min，靜置分層后，分離有機相和水相，量取有機相10 mL于60 ℃水浴上氮吹至近干，殘余用洗耳球吹干。用2 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)混合液溶解，待凈化。

1.2.2 樣品凈化

凈化用氨基柱，先用 5 mL二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)的混合溶液預淋柱子，當溶液到達吸附層表面時，立即將上述濃縮液加至柱中，并用刻度試管接洗脫液，用上述混合液5 mL洗滌3次，收集全部淋洗液。將收集的洗脫液在45 ℃水浴氮吹至近干，用甲醇準確定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，待上機。

1.2.3 測定步驟

在1.1.4色譜工作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按標準溶液、樣品溶液、標準溶液的順序進行色譜分析。采用外標法對樣品進行定量分析。

2 結果與討論

2.1 洗脫液選擇

本方法選用二氯甲烷+甲醇(95︰5，體積比)作為凈化洗脫溶液。當用5 mL洗脫液洗脫2次時回收率最佳，且雜質影響不大。

2.2 流動相選擇

本方法對流動相條件進行了優(yōu)化，采用梯度洗脫，使得峰型得到了很好的改善，并且能夠使氯蟲苯甲酰胺和雜質得到很好的分離，效果比較理想。

2.3 質譜條件的優(yōu)化

根據氯蟲苯甲酰胺分子的結構，選擇 ESI(＋)作為電離化模式，將氯蟲苯甲酰胺標準溶液配置成1.0 μg/mL的甲醇溶液，通過全掃描模式找出母離子。

使用二級掃描的方式根據母離子選擇特征離子，選用離子強度較大的2個子離子作為定量和輔助定性離子，并優(yōu)化其碰撞能量，最后在SRM方式中進一步驗證碰撞能量。最終選擇的母離子、特征離子和碰撞能量詳見表2。

圖1 標準樣品色譜圖

2.4 分析方法的線性相關測定

在上述確定的色譜條件下，氯蟲苯甲酰胺標準樣品譜圖見圖1。用甲醇將氯蟲苯甲酰胺標準貯備溶液配制成 10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0 μg/L 系列濃度的標準工作溶液。將系列濃度分別進樣5 μL，在液質聯用儀上測定峰面積，每個濃度測得的峰面積與對應的氯蟲苯甲酰胺標準溶液濃度繪制標準曲線。氯蟲苯甲酰胺的濃度在10.0～320.0 μg/L呈良好的線性關系，線性方程為 y=21 154x－188 580，R2=0.995 3 (圖 2)。

圖2 氯蟲苯甲酰胺標準曲線

2.5 精密度、回收率試驗

采用添加法，在表3所列無雜質干擾的空白樣中添加已知含量的標準溶液，在上述的色譜條件下進行測定，添加量0.04 mg/kg、0.08 mg/kg和0.16 mg/kg，測得花椰菜等11種果蔬樣品添加回收率為70.60%～116.42%，色譜圖如圖3～圖13，表明本方法對花椰菜等 11種果蔬中氯蟲苯甲酰胺農藥殘留的測定靈敏度高，操作簡單，定量準確。具體數據見表3。

3 結 論

本文選用LC-MS/MS法的SRM方式檢測花椰菜等11種果蔬中的氯蟲苯甲酰胺，用固相萃取柱凈化，過濾后進行分析，方法簡便、快速。

表3 花椰菜等11種果蔬中氯蟲苯甲酰胺添加回收率(n=5)

圖3 花椰菜樣品添加回收譜圖

圖4 蘋果樣品添加回收譜圖

圖5 甘藍樣品添加回收譜圖

圖6 油菜樣品添加回收譜圖

圖7 姜樣品添加回收譜圖

圖8 馬鈴薯樣品添加回收譜圖

圖9 芹菜樣品添加回收譜圖

圖10 菜豆樣品添加回收譜圖

圖11 黃瓜樣品添加回收譜圖

圖12 西葫蘆樣品添加回收譜圖

圖13 草莓樣品添加回收譜圖

采用三重四極桿質譜的選擇反應監(jiān)測(SRM)方式，確定其母離子，經碰撞能量優(yōu)化試驗確定特征離子，獲得極高的檢測靈敏度。

經試驗驗證，在10.0～320.0 μg/L，氯蟲苯甲酰胺的相關系數為0.995 3，回收率為70.60%～116.42%，精密度小于15.2%。

綜上所述，本方法可適用于花椰菜等11種果蔬的測定，具有快速、準確、靈敏度高等優(yōu)點，方法靈敏度高、選擇性更優(yōu)、重現性更好。