無償獻血者乙肝病毒核酸檢測分析

李小容 譚寒玉 朱 林 淳 靜

（四川省綿陽市紅十字中心血站，四川綿陽 621000）

輸血是臨床急救及手術(shù)治療等的重要環(huán)節(jié)，也是挽救傷病者的關(guān)鍵，而輸血安全則是保障傷病者生命安全的重中之重，其中，輸血相關(guān)性傳染病的預(yù)防是臨床關(guān)注的重點，血液篩查也是各地血站安全工作的核心。一直以來，血清免疫學(xué)檢測都是血液篩查的主要手段，檢測的陽性率高，但是HBV、HCV及HIV這3種液傳播疾病病毒檢測的窗口期均較長，仍具有一定的安全風(fēng)險。而核酸檢測應(yīng)用的逐漸廣泛，有效彌補了血清免疫檢測的不足[1]。本研究就核酸檢測在無償獻血者乙肝病毒空窗期篩查中的應(yīng)用價值進行探究，效果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年8月至2017年12月本院采集的且經(jīng)過血清免疫檢測合格的無償獻血者的血樣標本為研究樣本，共有107 465例，均進行核酸檢測。無償獻血者均經(jīng)過嚴格篩選，均身體健康，滿足衛(wèi)生部頒布的現(xiàn)行的《獻血者健康檢查要求》的相關(guān)標準。采集血液后，同時留取用以血清免疫檢測和核酸檢測的樣本，先進行血清免疫檢測，合格后，再行核酸檢測，血清免疫檢測及核酸檢測全程中，血樣的采集、存取及處理操作，皆由專業(yè)人員嚴格依照衛(wèi)生部的技術(shù)要求規(guī)范進行。

1.2 試劑與儀器

（1）血清免疫檢測。使用全自動酶聯(lián)免疫分析儀（生 產(chǎn) 廠 家：HUMAN Gesellschaft fürBiochemica und DiagnosticambH）全自動加樣儀（生產(chǎn)廠家：嘉興凱實生物科技有限公司）；乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAG）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體（HCV）酶聯(lián)免疫試劑盒以及人類免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒均購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司，具體操作，皆嚴格依照產(chǎn)品使用說明書進行。

（2）核酸檢測。使用羅氏COBASS201檢測系統(tǒng)，使用配套試劑，具體操作步驟，皆嚴格依照產(chǎn)品使用說明書進行。

1.3 方法

（1）標本采集及處理方法。EDTA-K2真空抗凝管，留取10mL血液，分2管裝存，其中，應(yīng)用帶分離膠的真空抗凝管保存核酸檢測標本。全部標本在血樣采集后4 h內(nèi)進行離心處理，運輸或保存待檢時，應(yīng)將樣本置于4℃環(huán)境內(nèi)，需保證在采集血樣24 h內(nèi)進行檢測。需要追蹤檢測的獻血者的血樣，使用帶分離膠的真空抗凝管留樣，5 mL即可，核酸初檢為陽性的標本，需取血袋血漿，實施核酸拆分實驗。

（2）核酸檢測方法。先進行單人份聯(lián)合檢測，若為核酸單獨反應(yīng)性標本，則進一步采取分項鑒別試驗。

1.4 檢測結(jié)果判定標準

兩種檢測行平行檢測。血清免疫檢測結(jié)果低于設(shè)定的Cut off值，則可判定為陰性，而若大于或等于設(shè)定的Cut off值，則可判定為陽性[2]。

在核酸檢測中，核酸單獨反應(yīng)性判定由系統(tǒng)自動完成，以樣本S/CO值≥1為判定標準，初檢時同時檢測3種病毒，出現(xiàn)反應(yīng)性結(jié)果便是存在1 ～ 3種陽性病毒核酸；初檢陽性者，取血袋血漿，分別進行3種病毒核酸反應(yīng)試驗，無反應(yīng)，則為陰性，有反應(yīng)，為陽性，

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用（±s）表示，行t檢驗；計數(shù)資料用（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核酸單獨反應(yīng)性檢測結(jié)果

在本組107 465例無償獻血者中，出現(xiàn)核酸單獨反應(yīng)性的樣本有331例，陽性檢出率為0.31%，核酸初檢單陽性例數(shù)有223例，單陽性率為0.21%。

2.2 核酸鑒別試驗陽性檢出結(jié)果

進一步核酸鑒別試驗中，有97例為反應(yīng)性樣本，總陽性率為29.31%；而其中，HCV-NRA的鑒別陽性檢出率顯著高于HCV-DRA和 HIV-NRA，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.05），見表 1。

表1 HBV-DNA、 HCV-DRA和 HIV-NRA核酸鑒別情況比較[例（%）]

3 討論與結(jié)論

一直以來，臨床都以血清免疫學(xué)檢查為血液篩查的主要手段，陽性檢出率高，但若患者處于窗口期、合并病毒變異或處于免疫靜默期間，均容易出現(xiàn)漏診[3]。近年來，隨著分子流行病學(xué)的的發(fā)展以及分子生物科學(xué)技術(shù)的不斷進步，核酸檢測在血液篩查，尤其是HBV、HCV以及HIV等病毒的篩檢中，應(yīng)用逐漸廣泛，現(xiàn)如今，其應(yīng)用幾乎已經(jīng)覆蓋了全國各地的血站。

相比于血清免疫學(xué)監(jiān)測，核酸檢測的最顯著優(yōu)勢就是能夠縮短病原體檢測的窗口期，其檢測的靈敏度很高，能夠直接對血液中的病原體進行篩查，可以準確檢測出血清免疫檢測不到的隱匿病毒，從而有效提升輸血安全。

核酸檢測基于TMA技術(shù)，其基本原理如下：借助特異性的磁微珠以及目標捕獲試劑，將被檢測的病毒核酸分子進行分離和純化，再借助TMA技術(shù)，實現(xiàn)對HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-RNA的核酸片段進行擴增，最后，再利用HPA法對擴增產(chǎn)物進行檢測，所用試劑中，具有內(nèi)標分子，在整個反應(yīng)過程中都起到嚴密監(jiān)測的作用，可以有效避免假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

現(xiàn)階段，臨床將核酸檢測引入到無償獻血者的血液篩查中，其目的就在于對血清免疫檢測遺漏的血樣進行再次篩查，而血清免疫檢測漏診的發(fā)生，主要集中于以下兩種原因，其一，獻血者正處于血清免疫檢測的窗口期，其二則是獻血者屬于隱匿性HBV病毒感染；后一種現(xiàn)象的出現(xiàn)，多是由于病毒變異或者患者自身免疫系統(tǒng)發(fā)生變化導(dǎo)致，感染者體內(nèi)的乙肝表面抗原的合成降低或者出現(xiàn)結(jié)構(gòu)變化，在進行血清HBsAg檢測時，結(jié)果呈陰性，但是患者肝組織中還是可以檢出HBV-DNA。而核酸檢測則正好能彌補這一不足。但有研究證實，核酸檢測的總檢出率相比于血清免疫檢測較低，且成本較高，因此，在實踐應(yīng)用中，均先行血清免疫檢測，再行核酸檢測進行二次篩查，以確保安全性。

本研究中，針對107 465例血清免疫檢測合格的無償獻血者的血樣進行核酸檢測，先行單人份聯(lián)合檢測，成功發(fā)現(xiàn)有331例血樣存在核酸單獨反應(yīng)性，進行核酸單陽性確定有223例，進一步實施核酸鑒別反應(yīng)試驗，最終確定有97例血樣存在病毒感染，而其中有94例HBV-DNA陽性檢出，HCV-DRA以及HIV-DRA陽性檢出則分別為2例和1例。證實了核酸檢測能夠有效彌補血清免疫檢測的缺漏，將兩者聯(lián)合應(yīng)用，效果突出。將陽性檢出率進行兩兩交叉對比，結(jié)果顯示，HBV-DNA陽性檢出與其它兩種的陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），證實目前輸血安全風(fēng)險主要為乙肝病毒感染，所以應(yīng)將其作為防控重點。

綜上所述，核算檢測可以與血清免疫檢測聯(lián)合應(yīng)用于無償獻血者血液安全檢查中，能有效提升輸血安全，另外，臨床應(yīng)加強對乙肝病毒感染的篩查和防控。